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Compound soft regenerated skull material for repairing dog skull defects using bone morphogenetic protein as an inductor and nanohydroxyapatite as a scaffold

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Neural Regeneration Research 2008年第8期3卷 843-846页

作者： Zhidong Shi Mingwang Liu zhongzong qin qinmei Wang Ying Guo Haiyong He Zhonghe Yu Department of Neurosurgery Third Affiliated Hospital Sun Yat-sen University Guangzhou 510630 Guangdong Province China Laboratory of Artificial Heart First Affiliated Hospital Sun Yat-sen University Guangzhou 510630 Guangdong Province China Animal Room Third Affiliated Hospital Sun Yat-sen University Guangzhou 510630 Guangdong Province China

BACKGROUND：In previous studies of skull defects and regeneration, bone morphogenetic protein as an inductor and nanohydroxyapatite as a scaffold have been cocultured with osteoblasts. OBJECTIVE： To verify the characteristics of the new skull regenerated material after compound soft regenerated skull material implantation. DESIGN, TIME AND SETTING： The self-control and inter-group control animal experiment was performed at the Sun Yat-sen University, China from February to July 2007. MATERIALS： Twenty-four healthy adult dogs of both genders weighing 15–20 kg were used in this study. Nanohydroxyapatite as a scaffold was cocultured with osteoblasts. Using demineralized canine bone matrix as a carrier, recombinant human bone morphogenetic protein-2 was employed to prepare compound soft regenerated skull material. Self-designed compound soft regenerated skull material was implanted in models of skull defects. METHODS： Animals were randomly assigned into two groups, Group A （n = 16） and Group B （n = 8）. Bilateral 2.5-cm-diameter full-thickness parietal skull defects were made in all animals. In Group A, the right side was reconstructed with calcium alginate gel, osteoblasts, and nanometer bone meal composite; the left side was reconstructed with calcium alginate gel, osteoblasts, nanometer bone meal and recombinant human bone morphogenetic protein-2 composite. In Group B, the right side was kept as a simple skull defect, and the left side was reconstructed with calcium alginate gel, osteoblasts, nanometer bone meal and recombinant human bone morphogenetic protein-2 composite. MAIN OUTCOME MEASURES： Bone regeneration and histopathological changes at the site of the skull defect were observed with an optical microscope and a scanning electron microscope after surgery. The ability to form bone was measured by alizarin red S staining. In vitro cultured osteoblasts were observed for morphology. RESULTS： One month following surgery, newly formed bone trabeculae mostly covered t

关键词： tissue engineering skull regeneration animal experiment

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Application of a venous conduit as a stent for repairing rabbit facial nerve injury

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Neural Regeneration Research 2007年第12期2卷 717-721页

作者： Zhidong Shi Mingwang Liu zhongzong qin qinmei Wang Ying Guo Zhuopeng Ye Zhonghe Yu Department of Neurosurgery Third Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University Guangzhou 510630 Guangdong Province China Laboratory for Artificial Heart First Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University Guangzhou 510089 Guangdong Province China Animal Laboratory Third Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University Guangzhou 510630 Guangdong Province China

BACKGROUND： Recently, many investigators have tried to use natural biomaterials, such as, artery, vein, decalcified bone, etc., as conduits for nerve repair. However, immunological rejection of conduits made of natural biomaterials limits their application. Therefore, it is essential to identify more suitable types of biomaterials. OBJECTIVE： To observe the characteristics of a bioengineering processing method using venous conduit as a stent for repairing facial nerve injury. DESIGN： A controlled observational experiment. SETTING： Animal Laboratories of the Third Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University and the 157 Hospital. MATERIALS： Thirty-three male New Zealand rabbits of pure breed, weighing 1.5 to 2.0 kg, were provided by Medical Experimental Animal Room of Sun Yat-sen University. The protocol was carried out in accordance with animal ethics guidelines for the use and care of animals. Venous conduits and autogenous nerves were transplanted into the left and right cheeks, respectively. Eleven animals were chosen for anatomical observations at 5, 10 and 15 weeks after surgery. METHODS： This experiment was carried out in the Animal Laboratories of the Third Hospital Affdiated to Sun Yat-sen University and the 157 Hospital between May and November 2006. After animals were anesthetized, 15 mm of retromandibular vein was harvested for preparing a venous conduit. Approximately 3 cm of low buccal branch of facial nerve was exposed. A segment of 1.2 cm nerve was resected from the middle, and a gap of 1.5 cm formed due to bilateral retraction. The prepared venous conduit of 1.5 cm was sutured to the outer membrane of the severed ends of the nerve. Muscle and skin were sutured layer by layer. Using the same above-mentioned method, the low buccal branch of right autogenous facial nerve was resected, and the left facial nerve segment from the same animal was transplanted using end-to-end neurorrhaphy for control. MAIN OUTCOME MEASURES：（1）Post-operatively,

关键词： bioengineering venous conduit repair facial nerve injury

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微小RNA-203抑制胶质母细胞瘤干细胞的干细胞特性

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中华实验外科杂志 2016年第3期33卷 675-677页

作者：邓一帆祝刚黄小山李百升秦忠宗惠州市中心人民医院神经外科广东516001

目的培养胶质母细胞瘤干细胞，观察微小RNA（miR）-203对其干细胞的影响，探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用。方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织，免疫磁珠法分选CD133^＋细胞；免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白（Nestin... 详细信息

目的培养胶质母细胞瘤干细胞，观察微小RNA（miR）-203对其干细胞的影响，探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用。方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织，免疫磁珠法分选CD133^＋细胞；免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白（Nestin）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白2（MAP2）的表达。将人miR-203模拟体和无意义寡核苷酸链（NC）分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-203组、NC组，用成球试验检测miR-203对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力的影响。反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫荧光染色分别检测两组细胞CD133、Nestin、GFAP、MAP2的mRNA和蛋白的表达。结果培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物CD133、Nestin，分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2；转染后7d，当NC组细胞球数目为100％时，miR-203组一、二次球数目分别为（67．84±13．79）％和（30．53±8．91）％，差异均有统计学意义（P〈0．05）；RT-PCR结果显示与NC组比较，miR-203组细胞CD133mRNA的相对表达水平为0．29士0．15，nestinmRNA为0．27±0．18；GFAP、MAP2mRNA表达升高，分别为7．89±3．99和2．59±1．16，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-203可以抑制胶质母细胞瘤干细胞的自我更新能力并促进其多向分化，可能成为新的针对胶质母细胞瘤的治疗策略。

关键词：胶质母细胞瘤胶质母细胞瘤干细胞微小RNA-203 自我更新多向分化

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微小RNA-203在胶质母细胞瘤干细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

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中华实验外科杂志 2015年第9期32卷 2085-2087页

作者：邓一帆祝刚黄小山李百升秦忠宗惠州市中心人民医院神经外科广东516001

目的培养胶质母细胞瘤干细胞,检测微小RNA-203（miR-203）在胶质母细胞瘤干细胞中的表达,并观察其对肿瘤干细胞增殖的影响.方法对胶质母细胞瘤组织行体外原代培养,以CD133为标志物,免疫磁珠法分选胶质母细胞瘤干细胞;免疫荧光染色检... 详细信息

目的培养胶质母细胞瘤干细胞,检测微小RNA-203（miR-203）在胶质母细胞瘤干细胞中的表达,并观察其对肿瘤干细胞增殖的影响.方法对胶质母细胞瘤组织行体外原代培养,以CD133为标志物,免疫磁珠法分选胶质母细胞瘤干细胞;免疫荧光染色检测分选所得细胞的CD133、巢蛋白（nestin）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白2（MAP2）的表达,从而鉴定肿瘤干细胞.反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测分选后CD133＋细胞、CD133-细胞miR-203的表达;将miR-203模拟体和无意义寡核苷酸链（NC）分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-203、NC组,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测转染后24、48、72、96、120 h细胞生存率;流式细胞仪细胞检测转染后3d细胞凋亡率.结果培养的胶质母细胞瘤干细胞成球样生长,表达干细胞标志物CD133、Nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;分选后CD133＋细胞中miR-203的表达低于CD133-细胞;转染miR-203后24、48、72、96、120 h组的细胞生存率均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞仪检测显示miR-203组的细胞凋亡率为（9.74±2.81）％,高于NC组的（3.95±0.91）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论上调miR-203可能成为针对胶质母细胞瘤干细胞的基因治疗策略.

关键词：胶质母细胞瘤胶质母细胞瘤干细胞微小RNA-203 细胞增殖

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颅内动脉瘤夹闭术后残留的预防分析

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广东微量元素科学 2015年第7期22卷 56-59页

作者：刘家凯杨炳湖秦忠宗李百升惠州市中心人民医院广东惠州516000

目的探讨颅内动脉瘤夹闭术后出现残留的原因并寻求预防方法。方法随机选取惠州市中心人民医院2007年3月—2014年12月收治的100例接受开颅动脉瘤颈夹闭术的颅内动脉瘤患者。全部于手术前给予DSA或者CTA辅助检查,确诊为颅内动脉瘤,术后1... 详细信息

目的探讨颅内动脉瘤夹闭术后出现残留的原因并寻求预防方法。方法随机选取惠州市中心人民医院2007年3月—2014年12月收治的100例接受开颅动脉瘤颈夹闭术的颅内动脉瘤患者。全部于手术前给予DSA或者CTA辅助检查,确诊为颅内动脉瘤,术后1个月行DSA检查观察其恢复情况,观察有无残留。结果 100例患者经手术治疗后1个月行3D-DSA复查,其中完全夹闭90例,完全夹闭率90%,发现有载瘤血管狭窄(与手术之前相比较)3例,出现动脉残留7例,残留率为7%。7例出现残留的患者2 mm与3 mm级的3例患者均进行介入栓塞术再次治疗,余下4名1 mm级患者保持随访进行中。此7名患者目前状况均良好。结论颅内动脉瘤夹闭术后残留的情况和手术前仔细检查分析、手术器械使用、术中正确选取器材等具有明显的关联,通过上述流程的改进和完善,颅内动脉瘤夹闭术后残留是能够预防的。

关键词：颅内动脉瘤开颅动脉瘤颈夹闭术动脉瘤颈残留预防

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MiR-153对胶质母细胞瘤干细胞生物学特性的影响

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中华神经医学杂志 2015年第3期14卷 233-238页

作者：邓一帆祝刚罗洪海李雪松黄小山李百升秦忠宗惠州市中心人民医院神经外科 516001

目的培养胶质母细胞瘤干细胞,观察microRNA（miR）-153对其生物学功能的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用. 方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133＋细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白（nestin... 详细信息

目的培养胶质母细胞瘤干细胞,观察microRNA（miR）-153对其生物学功能的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用. 方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133＋细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白（nestin）,分化后细胞神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白2（MAP2）的表达进行鉴定.RT-PCR检测分选后CD133＋细胞、CD133-细胞miR-153的表达;将人miR-153模拟体和无意义寡核苷酸链（NC）分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-153、NC组,7d后用成球试验检测miR-153对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力的影响.RT-PCR、免疫荧光染色分别检测2组细胞CD133、nestin、GFAP、MAP2 mRNA和蛋白的表达.转染后24、48、72、96和120 h CCK-8法检测2组细胞存活率.转染后3d流式细胞仪检测2组细胞凋亡率. 结果培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物CD133、nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;分选后CD133＋细胞中miR-153的表达低于CD133-细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）.转染后7 dNC组细胞一、二次成球数目均高于miR-153组,差异有统计学意义（P＜0.05）; RT-PCR检测显示与NC组比较,miR-153组细胞CD133、nestin mRNA表达降低,GFAP、MAP2 mRNA表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色与RT-PCR检测结果一致;转染后48、72、96 h miR-153组的细胞存活率均低于NC组,差异均有统计学意义;流式细胞仪检测显示miR-153组的细胞凋亡率（9.41％±1.98％）高于NC组（4.28％±0.31％）,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论上调miR-153可能成为新的针对胶质母细胞瘤干细胞的治疗策略.

关键词：胶质母细胞瘤胶质母细胞瘤干细胞 miR-153 自我更新多向分化

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脑室-腹腔分流术联合颅骨修补术同期治疗脑积水的效果

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世界复合医学 2021年第5期7卷 91-94页

作者：黄小山祝刚晏广秦忠宗惠州市中心人民医院神经外科广东惠州516000

目的探讨脑室-腹腔分流术联合颅骨修补术同期治疗脑积水的效果。方法选取2016年6月—2020年6月期间该院收治的104例脑积水患者作为研究对象,根据数字表法随机分为对照组(n=52)和观察组(n=52),对照组在脑室-腹腔分流术后择期开展颅骨修... 详细信息

目的探讨脑室-腹腔分流术联合颅骨修补术同期治疗脑积水的效果。方法选取2016年6月—2020年6月期间该院收治的104例脑积水患者作为研究对象,根据数字表法随机分为对照组(n=52)和观察组(n=52),对照组在脑室-腹腔分流术后择期开展颅骨修补术治疗,观察组同期开展脑室-腹腔分流术和颅骨修补术治疗,比较两组患者治疗前后Barthel日常生活活动能力量表(BI指数)评分、Fugl-Meyer四肢感觉功能量表(FMA)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分以及卡氏功能状态评分量表(KPS)评分,以及两组患者临床治疗总有效率。结果治疗前观察组BI评分(35.12±2.13)分,FMA评分(48.52±2.24)分,MoCA评分(17.86±1.58)分,KPS评分(60.41±2.26)分,对照组BI评分(35.18±2.16)分,FMA评分(48.56±2.31)分,MoCA评分(17.84±1.62)分,KPS评分(60.47±2.32)分,差异无统计学意义(t=0.143、0.089、0.064、0.134,P>0.05);治疗后观察组BI评分(73.22±3.48)分,FMA评分(76.85±3.56)分,MoCA评分(26.47±2.15)分,KPS评分(73.35±3.61)分,对照组BI评分(65.36±2.35)分,FMA评分(65.47±3.23)分,MoCA评分(22.32±2.06)分,KPS评分(67.77±2.24)分,差异有统计学意义(t=13.515、17.072、10.050、9.471,P<0.05)。观察组临床治疗总有效率为94.23%,高于对照组的76.92%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.310,P<0.05)。结论脑室-腹腔分流术联合颅骨修补术同期治疗脑积水效果确切,对患者生活能力、运动能力和认知功能改善更理想,因此可用于临床推广。

关键词：脑室-腹腔分流术颅骨修补术同期治疗脑积水认知功能

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