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养殖与饲料 2023年第4期22卷 19-25页

作者：张喜文鲁绍芳李盼盼冉梦媛李卓燕焦凤超董建国黄立赵聘曲哲会时代信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 信阳市畜禽重大疫病防控综合技术研究重点实验室河南信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 河南省信阳市浉河区农业农村局河南信阳464000

[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)... 详细信息

[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定,从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化,并进行表达产物可溶性分析,重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,并通过间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因,约1065 bp,获得重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后,可见分子质量约43 ku的特异蛋白,可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应,终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2~5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件,呈包涵体形式表达,经亲和层析纯化后,成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白,蛋白质量浓度为329μg/m L,鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白,并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。

关键词：鸭坦布苏病毒 NS1蛋白原核表达系统多克隆抗体

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水稻剑叶衰老过程中内源IAA的轭合态变化及其氮素调控效应

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中国水稻科学 2018年第6期32卷 591-600页

作者：赵华王复标韩展誉 SHAMSU-ADO zakari 李兆伟潘刚程方民金华职业技术学院浙江金华321017 浙江大学农业与生物技术学院杭州310058

【目的】揭示水稻抽穗开花后剑叶衰老过程的内源自由态IAA和轭合态IAA含量的动态变化及其基因型间的差异,明确氮素营养供应对叶片衰老过程的延缓效应及其与两种化学态IAA含量之间的关系。【方法】以剑叶早衰水稻突变体(psf)与其野生型(... 详细信息

【目的】揭示水稻抽穗开花后剑叶衰老过程的内源自由态IAA和轭合态IAA含量的动态变化及其基因型间的差异,明确氮素营养供应对叶片衰老过程的延缓效应及其与两种化学态IAA含量之间的关系。【方法】以剑叶早衰水稻突变体(psf)与其野生型(浙恢7954)为材料,比较了其在大田条件下剑叶衰老过程中的内源IAA含量、IAA类型和YUCCAs家族基因转录表达量差异,并利用水培种植试验设低氮(LN,1.45mmol/L)、正常氮(NN,2.9mmol/L)和高氮(HN, 5.8 mmol/L)3个氮浓度水平处理,对不同氮素水平下水稻叶片衰老相关指标与两类IAA含量间的关系进行了分析。【结果】早衰突变体psf剑叶中的自由态IAA含量显著低于相同取样时期的野生对照,但前者剑叶中的轭合态IAA含量显著高于后者,且随叶片衰老进程呈较明显的上升趋势;在7个YUCCAs同工型基因中,YUCCA1、YUCCA2、YUCCA3、YUCCA4和YUCCA6)的转录表达量随叶片衰老而下降,但YUCCA7则随叶片衰老呈现出先上升后下降的变化趋势。相同灌浆时期相比,绝大多数YUCCAs在早衰突变体psf剑叶中的转录表达量要低于其野生型对照,说明IAA合成代谢较弱是psf剑叶叶绿素含量迅速下降和早衰症状加剧的重要原因之一。其中,YUCCA7转录表达量随叶片衰老而上升,可能对psf已衰老叶片中的IAA合成起重要调控作用;氮浓度对水稻叶片中的IAA含量及其自由态与共轭态的影响表现为,在叶片开始衰老的初期和前中期,低氮处理(LN)引起剑叶中的自由态IAA含量下降和轭合态IAA含量上升,而高氮处理(HN)可诱导叶片中的自由态IAA含量增加,并导致轭合态IAA含量明显降低,但对已严重衰老的叶片而言(psf在抽穗开花后28d的剑叶),高氮处理下(HN)的自由态IAA和轭合态IAA含量均低于正常氮处理(NN)和低氮处理(LN)。【结论】水稻叶片的衰老进程与其叶片器官中的IAA含量及其化学态之间存在较密切联系。其中,轭合态IAA含量在叶片衰老过程的大幅度提升,是早衰突变体psf剑叶衰老进程加快的一个重要生理特征,而轭合态IAA含量的下降,可能是高氮处理对水稻叶片衰老进程起到延缓作用的一个重要生理调节因素。

关键词：水稻叶片衰老生长素氮素营养早衰突变体

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水稻生育后期叶片早衰突变体的光合特性与叶绿体超微结构观察

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作物学报 2012年第5期38卷 871-879页

作者：王复标黄福灯程方民李兆伟胡东维潘刚毛愉婵浙江大学农业与生物技术学院浙江杭州310058 浙江省农业科学院浙江杭州310031

以旗叶早衰的水稻突变体(psf)与其野生型对照(浙恢7954)为材料,对两者在水稻抽穗开花后旗叶衰老过程中的光合速率、叶绿素荧光和叶绿体超微结构比较分析表明,旗叶早衰突变后的每穗实粒数、结实率、千粒重和单株产量均不同程度降低,以对... 详细信息

以旗叶早衰的水稻突变体(psf)与其野生型对照(浙恢7954)为材料,对两者在水稻抽穗开花后旗叶衰老过程中的光合速率、叶绿素荧光和叶绿体超微结构比较分析表明,旗叶早衰突变后的每穗实粒数、结实率、千粒重和单株产量均不同程度降低,以对每穗实粒数和结实率的影响程度最明显;在水稻灌浆期间,psf旗叶的叶绿素含量、叶绿素a/b值、净光合速率(Pn)、PSII潜在活性(Fv/Fo)和最大光化学效率(Fv/Fm)均比其野生型对照明显降低,且随着抽穗开花后天数的推移,供试材料间的差异幅度呈逐渐拉大趋势;psf叶肉细胞中的叶绿体排列、形态大小及其类囊体结构在水稻抽穗开花期基本正常,但随着叶片衰老过程的推进,psf叶肉细胞中的叶绿体相继会出现沿细胞壁周缘化、外部形态缩皱变形、嗜锇颗粒增多变大、类囊体膜系统退化、片层结构完全解体等变化。其中,叶绿体沿叶肉细胞壁排列的周缘化与外形结构的球状化表现,与叶绿体类囊体膜系统损伤和开始降解之前的净光合速率(Pn)下降有关,而由类囊体膜系统受损所带来的Fv/Fm和Fv/Fo下降过程,则相对滞后于Pn和叶绿素含量下降的起始时间。

关键词：水稻 psf突变体超微结构光合速率叶绿素荧光

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