鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

作     者：张喜文 鲁绍芳 李盼盼 冉梦媛 李卓燕 焦凤超 董建国 黄立 赵聘 曲哲会 时代 ZHANG Xiwen;LU Shaofang;LI Panpan;RAN Mengyuan;LI Zhuoyan;JIAO Fengchao;DONG Jianguo;HUANG Li;ZHAO Pin;QU Zhehui;SHI Dai

作者机构：信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 信阳市畜禽重大疫病防控综合技术研究重点实验室河南信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 河南省信阳市浉河区农业农村局河南信阳464000 

出 版 物：《养殖与饲料》 (Animals Breeding and Feed)

年 卷 期：2023年第22卷第4期

页      面：19-25页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：河南省科技攻关项目(222102110188) 信阳农林学院高水平科研孵化器建设项目(FCL202004),信阳农林学院科技创新团队建设项目(XNKJTD-014),信阳农林学院青年科研基金项目(20200113),信阳农林学院青年科研基金项目(QN2021012) 信阳市创新应用专项(20200016) 

主　　题：鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 原核表达系统 多克隆抗体 

摘      要：[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定,从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化,并进行表达产物可溶性分析,重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,并通过间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因,约1065 bp,获得重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后,可见分子质量约43 ku的特异蛋白,可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应,终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2~5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件,呈包涵体形式表达,经亲和层析纯化后,成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白,蛋白质量浓度为329μg/m L,鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白,并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。