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敲低JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1857-1868页

作者：罗杰杨酸毛同辉杨棋张依裕铜仁职业技术学院贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室铜仁市畜牧技术推广站

Janus激酶2 (Janus kinase, JAK2)是一种激素受体偶联激酶，参与母牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞增殖、分化、凋亡等过程，而其调控猪(Sus scrofa)乳腺上皮细胞的增殖或凋亡机制尚不清楚。为探究RNA干扰JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖... 详细信息

Janus激酶2 (Janus kinase, JAK2)是一种激素受体偶联激酶，参与母牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞增殖、分化、凋亡等过程，而其调控猪(Sus scrofa)乳腺上皮细胞的增殖或凋亡机制尚不清楚。为探究RNA干扰JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响，本研究根据JAK2基因序列设计并合成4对shRNA (short hairpin RNA)干扰序列和1对阴性对照序列，构建shRNA表达载体并将其转染至猪乳腺上皮细胞中，筛选干扰效果最佳的载体，采用串联质谱标记(tandem mass tags, TMT)定量蛋白质组学技术进行蛋白组测序并筛选差异蛋白，分别采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒、流式细胞术、q RT-PCR检测细胞增殖、凋亡、周期及相关基因的mRNA表达水平。结果显示，共筛选到差异表达蛋白699个，其中上调蛋白309个，下调蛋白390个。GO富集分析表明，差异蛋白主要富集在多肽生物合成过程和酰胺生物合成过程，以及碳水化合物衍生物结合、核糖体的结构组成等分子功能方面；KEGG富集分析可知，差异蛋白主要富集在核糖体、补体系统和丙型肝炎信号通路。干扰JAK2后，细胞增殖能力相较于对照组在不同时间节点均显著降低(P<0.05)，在72 h时的OD450值极显著降低(P<0.01)，细胞凋亡率(24.0%±3.82%)显著低于对照组(33.2%±2.55%)(P<0.05)，且诱导细胞周期G1/S期阻滞；IFIT1 (interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1)、ISG15 (interferon-stimulated gene 15)、GRB2 (growth factor receptor-bound protein 2)和RACK1 (receptor for activated C kinase 1)基因表达水平在沉默JAK2后极显著低于对照组(P<0.01),RSAD2 (radical S-adenosyl methionine domain containing 2)基因在沉默JAK2后极显著高于对照组(P<0.01)。综上，沉默JAK2可诱导猪乳腺上皮细胞周期G1/S期阻滞，从而抑制细胞增殖，并抑制细胞凋亡，B6E241蛋白(对应基因GRB2)可作为今后研究乳腺上皮细胞增殖相关的关键蛋白。本研究为深入探讨母猪乳腺发育和泌乳调控机制提供了基础资料。

关键词： Janus激酶(JAK2) 猪乳腺上皮细胞细胞增殖细胞凋亡

SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

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南方农业学报 2024年第1期55卷 207-216页

作者：毛同辉杨酸罗杰苏徵张依裕铜仁市畜牧技术推广站贵州铜仁554300 铜仁职业技术学院贵州铜仁554300 贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS... 详细信息

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC,分别转染猪乳腺上皮细胞,然后通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。【结果】以过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组(P<0.01,下同);转染48和72 h后,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组猪乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组,说明过表达载体pcDNA3.1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36.15±0.92)%]显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组[(30.55±0.35)%](P<0.05,下同),且过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的G1期细胞比例极显著降低,而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组相比,除JAK2、STAT3和TYK2基因外,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。【结论】SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化,从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

关键词：猪乳腺上皮细胞 SOCS1基因细胞增殖细胞凋亡 JAK/STAT信号通路

Surface-exchange of NOx and NH_3 above a winter wheat field in the Yangtze Delta, China

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Journal of Environmental Sciences 2006年第4期18卷 689-700页

作者： FANG Shuang-xi zhang yi MU yu-jing Research Center for Eco-Environmental Sciences Chinese Academy of Sciences Beijing 100085 China

A four-dynamic-chamber system was constructed to measure NOx and NH3 surface-exchange between a typical wheat field and the atmosphere in the Yangtze Delta, China. The average fluxes of NO, NO2 and NH3 were 79, -5.6 and -5.1 ngN/（m^2·s）, and 91, -1.8 and 23 ngN/（m^2·s）, respectively for the wheat field and the bare soil. The NO flux was positively correlated with soil temperature and the fluxes of NO2 and NH3 were negatively correlated with their ambient concentrations during the investigated period. The compensation point of NO2 between the wheat field and the atmosphere was 11.9 μg/m3. The emissions of NO-N and NH3-N from the urea applied to the wheat field were 2.3% and 0.2%, respectively, which indicated that the main pathway of N loss from the investigated winter wheat field was NO. Application of a mixture of urea and lignin increased the emissions of NO, but also greatly increased the yield of the winter wheat.

关键词： NOx NH3, flux surface-exchange

白羽王鸽CAPN11基因SNPs鉴定及其对屠宰性状的影响

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农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2381-2390页

作者：向进龙霞庞金兰成敏张依裕杨阿明贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室黔西市农业农村局贵州裕黔农业生物科技发展有限公司

白羽王鸽（Columba livia）是重要的经济禽类，探究其钙蛋白酶11 （calpain 11, CAPN11）基因多态性与屠宰性状的关系，对其屠宰性状的遗传改良和经济性状提升具有重要意义。本研究采用PCR直接测序法对白羽王鸽CAPN11基因SNP进行筛查，... 详细信息

白羽王鸽（Columba livia）是重要的经济禽类，探究其钙蛋白酶11 （calpain 11, CAPN11）基因多态性与屠宰性状的关系，对其屠宰性状的遗传改良和经济性状提升具有重要意义。本研究采用PCR直接测序法对白羽王鸽CAPN11基因SNP进行筛查，并分析SNP位点与白羽王鸽屠宰性状的关联性。通过鉴定白羽王鸽的CAPN11基因的SNPs发现，在外显子6区的第636和738位发现g.3641644 C>T和g.3641746 C>T 2个同义突变，均存在3种基因型，优势基因型和优势等位基因均为CT和C,0.252检验显示，2个SNPs位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）；连锁不平衡分析显示，2个SNPs位点之间不满足D'>0.80,r2>0.33，表明不存在强连锁不平衡效应；关联性分析显示，g.3641644 C>T位点对宰前活重的影响达到显著水平（PT位点对白羽王鸽的宰前活重、屠体重、全净膛重、胸肌重和腿肌重等屠宰性状的影响均达到了显著水平（P<0.05）；双倍型分析发现，2个SNPs位点在实验群体中共检测到4种单倍型和10种双倍型，双倍型H2H2 （CCTT）个体的宰前活重、屠体重、全净膛重和腿肌重均显著高于其他9种双倍型（P<0.05）；双倍型H2H2 （CCTT）个体的胸肌重显著高于除双倍型H3H3 （TTCC）和H3H4 （TTCT）外的其他双倍型个体（P<0.05）。通过分析单倍型m RNA二级结构发现，单倍型H1 （CC）、H2 （CT）、H3 （TC）均引起了CAPN11基因的mRNA二级结构变化，可能会影响转录和翻译效率，进而影响屠宰性能。综上，CAPN11基因能够作为潜在候选基因用于改善白羽王鸽屠宰性状，为加速白羽王鸽育种选育进程提供一定的理论依据，为提升品种屠宰性状的分子标记选育工作提供参考。

关键词：白羽王鸽钙蛋白酶11基因(CAPN11) SNPs 屠宰性状

中医药调控NF⁃κB相关信号通路干预溃疡性结肠炎相关性癌变的研究进展

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1455-1466页

作者：张钰异王浩王思琳周春航宋宁宁程丽敏黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040 黑龙江中医药大学第一附属医院黑龙江哈尔滨150040

溃疡性结肠炎是以慢性、反复发作性和非特异性为特征的肠道炎症疾病,难以治愈,并有恶化为相关性肿瘤的风险,长期持续的慢性炎症刺激能增加癌变的风险,信号途径作为调节肿瘤微环境的关键一环,核因子⁃κB(NF⁃κB)不仅是肠道炎症重要的调... 详细信息

溃疡性结肠炎是以慢性、反复发作性和非特异性为特征的肠道炎症疾病,难以治愈,并有恶化为相关性肿瘤的风险,长期持续的慢性炎症刺激能增加癌变的风险,信号途径作为调节肿瘤微环境的关键一环,核因子⁃κB(NF⁃κB)不仅是肠道炎症重要的调节因子,还能作为其他信号途径的下游因子来共同调节,如TLR4、MAPK、STAT、PI3K等途径。目前已有大量动物实验研究证明了中药可通过干预NF⁃κB相关信号通路减轻炎症反应,改善肠道炎症,进而抑制炎症向肿瘤的进展。该文就NF⁃κB相关串扰通路关系及中医药对其干预机制的研究作一综述,以期为临床溃疡性结肠炎治疗及相关性癌变预防策略的优化提供借鉴与参考。

关键词：溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎相关性癌(UCRCC) NF⁃κB 中医药

柯乐猪BMP7基因SNP位点与繁殖性能的关联分析

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南方农业学报 2024年第8期55卷 2495-2503页

作者：向进吴燕王春源赵永付红梅丁义杰张依裕贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室/贵州大学香猪研究所贵州贵阳550025

【目的】明确骨形态发生蛋白7基因(BMP7)单核苷酸多态性(SNP)位点与柯乐猪繁殖性能的关联性,挖掘柯乐猪繁殖性状的分子辅助标记,为加速柯乐猪繁殖性能提升及推进其品种改良进程提供技术支撑。【方法】选取150头健康经产柯乐母猪为研究对... 详细信息

【目的】明确骨形态发生蛋白7基因(BMP7)单核苷酸多态性(SNP)位点与柯乐猪繁殖性能的关联性,挖掘柯乐猪繁殖性状的分子辅助标记,为加速柯乐猪繁殖性能提升及推进其品种改良进程提供技术支撑。【方法】选取150头健康经产柯乐母猪为研究对象,采用Sanger测序法筛查鉴定BMP7基因SNP位点,计算各SNP位点的群体遗传参数,并通过SPSS 22.0中的一般线性模型(GLM)分析SNP位点与柯乐猪总产仔数、初生窝重、平均初生重、断奶仔猪数、断奶窝重及平均断奶重等6个繁殖性状指标的关联性。【结果】在柯乐猪BMP7基因上共发现5个SNPs位点:g.57602289C>T(第2外显子)、g.57602334C>T(第2外显子)、g.57602404C>T(第2内含子)、g.57602418C>T(第2内含子)和g.57602561G>T(第2内含子),均存在3种基因型;5个SNPs位点的优势基因型分别为CT、CT、CT、CT和GT,对应的多态信息含量(PIC)介于0.358~0.375,均表现为中度多态(0.250.05),且各SNP位点间均存在强连锁不平衡关系[LD系数(Dʼ)>0.800,相关系数(R^(2))>0.330]。关联分析结果显示,g.57602289C>T、g.57602334C>T和g.57602418C>T等3个位点TT基因型个体的初生窝重均显著高于CC基因型个体(PT位点TT基因型个体的总产仔猪数极显著高于CC基因型个体;g.57602561G>T位点TT基因型个体的总产仔猪数极显著高于GG基因型个体。此外,双倍型H2H2和H3H3个体的总产仔数、初生窝重、断奶仔猪数和断奶窝重均高于其他双倍型个体,尤其是H2H2个体在断奶仔猪数和初生窝重方面表现出明显优势。【结论】在柯乐猪BMP7基因上发现的5个SNPs位点均与其繁殖性能存在较强的关联性,BMP7基因可作为柯乐猪繁殖性状的候选基因,而双倍型H2H2可作为繁殖性状分子标记辅助选择的参考。

关键词：柯乐猪 BMP7基因 SNP位点繁殖性能关联分析

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基于转录组测序的剑白香猪表皮颜色相关miRNA筛选与鉴定

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南方农业学报 2024年第3期55卷 670-679页

作者：赵德鹏覃海毕欢袁巍张依裕陈伟贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025

【目的】对剑白香猪黑色和白色表皮组织进行转录组测序,筛选出对黑色素生成起调节作用的miRNA,为进一步研究miRNA对剑白香猪表皮颜色形成的调控机制提供理论依据。【方法】以剑白香猪黑色和白色表皮组织为试验材料进行转录组测序,以|log... 详细信息

【目的】对剑白香猪黑色和白色表皮组织进行转录组测序,筛选出对黑色素生成起调节作用的miRNA,为进一步研究miRNA对剑白香猪表皮颜色形成的调控机制提供理论依据。【方法】以剑白香猪黑色和白色表皮组织为试验材料进行转录组测序,以|log2FoldChange|≥1且错误发现率(FDR)≤0.05为标准,采用DESeq2筛选差异表达miRNA,使用miRanda和RNAhybrid预测差异表达miRNA靶基因并进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析,构建差异表达miRNA、靶基因和KEGG信号通路互作网络,利用实时荧光定量PCR对转录组测序结果进行验证。【结果】从剑白香猪黑色和白色表皮中鉴定出280个已知miRNA和618个新miRNA,筛选出17个差异表达miRNA,白色表皮较黑色表皮有10个miRNA上调表达,7个miRNA下调表达。共预测获得1327个靶基因,GO功能注释分析结果显示,在生物学过程中,差异表达miRNA靶基因主要涉及上皮发育、细胞增殖和分解代谢过程等条目;在细胞组分和分子功能中,主要涉及细胞质、细胞质囊泡、ATP结合和催化活性等条目。KEGG信号通路富集结果显示,靶基因在磷脂酰肌醇信号系统、黑色素生成和细胞色素P450等信号通路富集,其中ssc-miR-615靶基因包括CALM3、CREBBP、FZD5和DVL2,其富集通路均与表皮色素沉着有关,ssc-miR-221-3p靶基因TYRP1和ssc-miR-224靶基因RAB23富集的通路与黑色素生成有关。选取7个差异表达miRNA与靶基因TYRP1和RAB23进行实时荧光定量PCR验证,结果表明差异表达miRNA的表达变化与转录组测序分析的变化趋势一致,TYRP1和RAB23在剑白香猪黑色表皮中的表达量极显著高于白色表皮(P<0.01)。【结论】ssc-miR-615、ssc-miR-221-3p和ssc-miR-224是影响剑白香猪表皮颜色的候选基因,可能对剑白香猪表皮的黑色素形成有重要影响。

关键词： miRNA 剑白香猪表皮黑色素转录组

Permeation of dimethyl sulfoxide into articular cartilage at subzero temperatures

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2012年第3期13卷 213-220页

作者： Shao-zhi zhang Xiao-yi yu Guang-ming CHEN Institute of Refrigeration and Cryogenics Zhejiang University Hangzhou 310027 China

Osteochondral allografting has been proved to be a useful method to treat diseased or damaged areas of joint surfaces. Operational long-term stocks of grafts which supply a buffer between procurement and utilization would contribute to the commercialization or industrialization of this technology. Vitrification has been thought to be a promising method for successful preservation of articular cartilage （AC）, but high concentration cryoprotectants （CPAs） are used which may cause high cellular toxicity. An effective way to reduce CPA toxioity is to increase CPA concen- tration gradually while the temperature is lowered. Understanding the mechanism of （31~A permeation at subzero temperatures is important for designing the cryopreservation protocol. In this research, the permeation of dimethyl sulfoxide （MezSO） in ovine AC at subzero temperatures was studied experimentally. Pretreated AC discs were ex- posed in Me2SO solutions for different time （0, 5, 15, 30, 50, 80, and 120 min） at three temperature levels （-10, -20, and -30℃）. The Me2SO concentration within the tissue was determined by ultraviolet （UV） spectrophotometry. The diffusion coefficients were estimated to be 0.85×10-6, 0.48×10-8, and 0.27×10-6 cm2/s at -10, -20, and -,30℃, respectively, and the corresponding activation energy was 29.23 kJ/mol. Numerical simulation was performed to com- pare two Me2SO addition protocols, and the results demonstrated that the total loading duration could be effectively reduced with the knowledge of permeation kinetics.

关键词： Articular cartilage Vitrification Dimethyl sulfoxide Permeation Diffusion coefficient Subzero temperature

宫内发育迟缓猪胎盘SLC7A2基因过表达对滋养层细胞增殖和迁移的影响

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南方农业学报 2024年第6期55卷 1778-1786页

作者：胡光玲伍治敏张才在杨振清张依裕敖政贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025

【目的】探究溶质载体家族7成员2基因(SCL7A2)在正常初生重(NBW)和宫内发育迟缓(IUGR)猪胎盘中的表达差异,明确SCL7A2基因过表达对猪滋养层细胞(pTr2)增殖和迁移的影响,为揭示猪IUGR的发生发展机制提供参考依据。【方法】采用实时荧光定... 详细信息

【目的】探究溶质载体家族7成员2基因(SCL7A2)在正常初生重(NBW)和宫内发育迟缓(IUGR)猪胎盘中的表达差异,明确SCL7A2基因过表达对猪滋养层细胞(pTr2)增殖和迁移的影响,为揭示猪IUGR的发生发展机制提供参考依据。【方法】采用实时荧光定量PCR检测NBW和IUGR胎盘中SLC7A2基因相对表达量,通过免疫组织化学试验分析NBW和IUGR胎盘组织中SLC7A2蛋白的定位分布及表达情况,利用CCK-8试验检测SLC7A2基因过表达对pTr2细胞增殖能力的影响,并以细胞划痕试验检测SLC7A2基因过表达对pTr2细胞迁移能力的影响。【结果】IUGR胎盘中的SLC7A2基因相对表达量极显著高于NBW胎盘(P0.05)。以Vector-SLC7A2+和Vector-NC分别转染pTr2细胞后,Vector-SLC7A2+转染组的pTr2细胞增殖效果在转染后12、24、48和72 h显著或极显著低于Vector-NC转染组,pTr2细胞迁移率则表现为Vector-SLC7A2+转染组极显著低于Vector-NC转染组,表明SLC7A2基因过表达能有效抑制pTr2细胞的增殖和迁移能力。【结论】SLC7A2基因过表达会抑制猪胎盘滋养层细胞的增殖与迁移,影响胎盘的形态发育和母—胎间的营养转运效率,进而诱发猪IUGR的发生发展。

关键词：猪 SLC7A2基因胎盘宫内发育迟缓(IUGR) 营养转运