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不同保存介质对人少突胶质前体细胞生物学特性的影响

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中国组织工程研究 2019年第29期23卷 4651-4655页

作者：汪兆艳杨印祥王倩管倩栾佐解放军总医院第六医学中心

背景:保存介质直接影响干细胞活性以及细胞功能,目前国内外缺乏对人少突胶质前体细胞保存介质方面的研究。目的:评价临床常用的保存介质对人少突胶质前体细胞活率的影响。方法:在4℃条件下,将处于对数生长期的人少突胶质前体细胞分别在... 详细信息

背景:保存介质直接影响干细胞活性以及细胞功能,目前国内外缺乏对人少突胶质前体细胞保存介质方面的研究。目的:评价临床常用的保存介质对人少突胶质前体细胞活率的影响。方法:在4℃条件下,将处于对数生长期的人少突胶质前体细胞分别在少突细胞完全培养基、含有1%白蛋白的生理盐水、生理盐水中放置24h,比较不同保存介质中的细胞活性以及继续培养后的细胞增殖能力。结果与结论:①细胞冷藏24h进行锥虫蓝染色,少突细胞完全培养基组、含有1%白蛋白的生理盐水组、生理盐水组细胞活率分别为83%,68%和51%,少突细胞完全培养基组细胞活率最高,单纯生理盐水组细胞活率最低;②细胞冷藏后继续培养1代,3种保存介质中少突胶质前体细胞的扩增能力有逐渐降低的趋势,少突细胞完全培养基组细胞增殖能力最高,其次是含有1%白蛋白的生理盐水组,单纯生理盐水中保存的细胞无法继续增殖。

关键词：少突胶质前体细胞保存保存介质细胞活率细胞增殖能力国家自然科学基金

少突胶质前体细胞移植治疗早产儿脑白质损伤大鼠模型

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中国当代儿科杂志 2017年第9期19卷 1003-1007页

作者：吴成君汪兆艳杨印祥栾佐南方医科大学第三临床医学院广东广州510515 海军总医院儿科北京100048

目的探讨少突胶质前体细胞(OPCs)移植对治疗早产儿脑白质损伤(WMI)模型大鼠的长期作用。方法将80只3日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型对照组、5 d脑室/白质移植组、9 d脑室/白质移植组、14 d脑室/白质移植组(n=10);除假手... 详细信息

目的探讨少突胶质前体细胞(OPCs)移植对治疗早产儿脑白质损伤(WMI)模型大鼠的长期作用。方法将80只3日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型对照组、5 d脑室/白质移植组、9 d脑室/白质移植组、14 d脑室/白质移植组(n=10);除假手术组外其余各组行右侧颈总动脉离断并缺氧80 min制备早产儿WMI模型;采用孕10~12周人胚胎脑组织制备OPCs。各移植组分别在造模后5 d、9 d和14 d将3×105OPCs注入右侧脑室/脑白质中,待大鼠60日龄和90日龄时分别对各组行电镜下脑髓鞘评估和神经功能评估。结果电镜下,大鼠60日龄时各移植组髓鞘损害程度相比模型组略有改善;无论是与同组60日龄大鼠还是与同日龄模型组大鼠比较,90日龄时各移植组的髓鞘均明显增厚,结构破坏更少,其中14 d移植组变化最为明显;但不同移植时间脑室和白质移植组间的髓鞘损害程度未见有明显差异。60及90日龄各移植组大鼠的神经功能缺陷评分(m NSS)均高于假手术组,但均低于模型组(P<0.05)。结论 OPCs移植可能对治疗早产儿WMI存在长期效应,延迟移植时间可能增强疗效。

关键词：早产儿脑白质损伤少突胶质前体细胞细胞移植髓鞘新生大鼠

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无关脐血移植治疗Ⅰ型黏多糖病

中华实用儿科临床杂志 2015年第8期30卷 604-607页

作者：吴南海栾佐鲍亮唐湘凤海军总医院儿科北京100048

目的探讨无关脐血移植对Ⅰ型黏多糖病（MPS Ⅰ）的治疗效果.方法 1例4岁2个月男性MPS Ⅰ患儿,确诊后行人类白细胞抗原不全相合无关脐血移植,预处理采用白消安＋环磷酰胺＋氟达拉滨（Bu/Cy4＋ Flud）方案：Bu 1.2 mg/kg,每6h1次,用4d;Cy... 详细信息

目的探讨无关脐血移植对Ⅰ型黏多糖病（MPS Ⅰ）的治疗效果.方法 1例4岁2个月男性MPS Ⅰ患儿,确诊后行人类白细胞抗原不全相合无关脐血移植,预处理采用白消安＋环磷酰胺＋氟达拉滨（Bu/Cy4＋ Flud）方案：Bu 1.2 mg/kg,每6h1次,用4d;Cy 50 mg/（kg·d）,用4d;Flud 30 mg/（m^2·d）,用4d.移植当天为0d,移植前为-天数,移植后为＋天数.输入脐血有核细胞4.60×10^7/kg,CD34＋细胞3.05×10^5/kg.移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用抗胸腺细胞球蛋白＋环胞素＋吗替麦考酚酯.移植后应用粒细胞集落刺激因子加速造血重建.结果＋15d粒细胞系植入,＋24 d血小板植入,＋21 d取患者骨髓经STR基因位点检测证实为完全供者型嵌合状态,此后嵌合稳定.移植后83 d a-L-艾杜糖醛酸苷酶（IDUA）活性恢复正常,IDUA基因测序正常.＋12 d肺部感染合并肺动脉高压,＋15 d出现急性Ⅱ度肠道GVHD,＋51 d发生急性Ⅱ度皮肤GVHD,＋180 d发生慢性GVHD（皮肤局限型）;＋35 d合并出血性膀胱炎.上述并发症均顺利治愈.移植后随访18个月,患儿身高增加3 cm,体质量增加2.4kg,角膜转为清亮,肝脾缩小至正常,尿黏多糖检测转阴,智力筛查较移植前稍有进步,但手指畸形及其他骨骼异常无明显变化.结论无关脐血移植治疗MPS Ⅰ有确切疗效.本例为我国首例MPS Ⅰ的无关脐血移植治疗,为今后MPS Ⅰ的脐血移植治疗积累了初步经验.

关键词：造血干细胞移植脐血黏多糖病

脐血造血干细胞移植治疗儿童血液病14例临床观察

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中华儿科杂志 2007年第1期45卷 72-73页

作者：徐世侠栾佐唐湘风吴南海杨平地黄友章海军总医院儿科北京100037 海军总医院血液科北京100037

脐血造血干细胞移植可以根治儿童白血病、再生障碍性贫血、血红蛋白病及先天性免疫缺陷等疾病。自1988年Gluckman等首先应用脐血移植（CBT）成功治疗1例儿童Fanconi贫血以来，CBT发展迅速。由于脐血来源广、采集方便、对供者无害、移植... 详细信息

脐血造血干细胞移植可以根治儿童白血病、再生障碍性贫血、血红蛋白病及先天性免疫缺陷等疾病。自1988年Gluckman等首先应用脐血移植（CBT）成功治疗1例儿童Fanconi贫血以来，CBT发展迅速。由于脐血来源广、采集方便、对供者无害、移植物抗宿主病（GVHD）发生率低而得到广泛应用。我们采用脐血造血干细胞移植治疗14例儿童血液病，现报告如下。

关键词：脐血造血干细胞移植造血干细胞移植治疗儿童血液病临床观察 Fanconi贫血再生障碍性贫血先天性免疫缺陷移植物抗宿主病

不同代数人脂肪干细胞分泌多种细胞因子水平的比较

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中国组织工程研究 2018年第9期22卷 1319-1324页

作者：王倩汤文燕汪兆艳杨印祥栾佐解放军海军总医院儿科北京市100048

背景:脂肪干细胞可分泌丰富的细胞因子,建立良好的损伤修复微环境,可成为细胞因子治疗各种缺血性疾病的良好的种子细胞来源。目的:观察第2-10代(P2-P10)人脂肪干细胞分泌细胞因子水平的变化情况。方法:从人脂肪组织中分离培养脂肪干细胞... 详细信息

背景:脂肪干细胞可分泌丰富的细胞因子,建立良好的损伤修复微环境,可成为细胞因子治疗各种缺血性疾病的良好的种子细胞来源。目的:观察第2-10代(P2-P10)人脂肪干细胞分泌细胞因子水平的变化情况。方法:从人脂肪组织中分离培养脂肪干细胞,显微镜下观察细胞形态特征,通过细胞免疫表型和细胞体外分化功能对细胞进行鉴定。结果与结论:(1)细胞形态:脂肪干细胞形态呈长梭形或多角形,胞体丰满、胞浆均匀、核仁清晰,其生长增殖能力较强,体外诱导可进行成脂、成骨和成软骨分化;(2)流式细胞检测分析结果显示:P3代脂肪干细胞表达间充质表面标志物CD29(99.21%)、CD73(99.65%)和CD90(99.92%),而几乎不表达造血干细胞表面标志CD34(2.25%);(3)酶联免疫吸附试验结果显示:P5代脂肪干细胞分泌血管内皮细胞生长因子和肝细胞生长因子水平最高,P3代脑源性神经营养因子的分泌水平最高。结果证实,脂肪组织来源的干细胞生物学特性稳定,表现出良好的生长和增殖潜能;不同代数的脂肪干细胞分泌的血管内皮细胞生长因子、脑源性神经营养因子和肝细胞生长因子浓度不同,P5代脂肪干细胞显示出较强的分泌血管内皮细胞生长因子和肝细胞生长因子的能力,P3代脂肪干细胞显示出较强的分泌脑源性神经营养因子的能力。

关键词：组织工程干细胞细胞分化

抑制c-Met信号通路可增加白血病细胞株对硼替佐米的化疗敏感性

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基因组学与应用生物学 2017年第10期36卷 3956-3962页

作者：严婧何志旭栾佐金姣陈晓霞艾戎贵州医科大学贵阳550025 北京海军总医院北京100048 贵州医科大学附属医院贵阳550025

本研究通过下调c-Met来观察白血病细胞株K562对抗肿瘤药物硼替佐米的敏感性,以此探索c-Met信号对白血病细胞株的增殖、凋亡等的影响,为临床上寻求治疗白血病新方案提供理论依据。本研究首先采用MTT实验初步判断硼替佐米对K562细胞的增... 详细信息

本研究通过下调c-Met来观察白血病细胞株K562对抗肿瘤药物硼替佐米的敏感性,以此探索c-Met信号对白血病细胞株的增殖、凋亡等的影响,为临床上寻求治疗白血病新方案提供理论依据。本研究首先采用MTT实验初步判断硼替佐米对K562细胞的增殖能力的影响;再构建c-Met干扰载体转染K562细胞,并采用Real-time PCR检测干扰效果,筛选最适干扰质粒。然后采用筛选的c-Met干扰质粒转染细胞,分别使用MTT法检测细胞增殖能力、软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆能力、流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示硼替佐米对K562细胞的增殖具有显著抑制作用(p<0.05),且这种抑制作用具有浓度依赖性。c-Met干扰质粒构建及干扰效果检测实验中发现,随着转染时间的延长,绿色荧光信号越来越强,表明转染效率越来越高。但Real-time检测结果发现,3个干扰质粒中仅c-Met-Homo-1和c-Met-Homo-3干扰质粒对c-Met的表达具有明显抑制效果(p<0.05),且c-Met-Homo-3干扰质粒干扰效果较好。使用c-Met-Homo-3干扰质粒转染细胞后发现,c-Met下调能够显著增强硼替佐米对K562细胞增殖的抑制作用(p<0.05),且增强硼替佐米对K562细胞克隆形成的抑制能力,同时增强了硼替佐米诱导的K562细胞的凋亡。本研究结论为,下调c-Met能够增加白血病细胞株K562对硼替佐米的化疗敏感性。

关键词：白血病细胞K562 c-Met 硼替佐米敏感性

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儿童脐血移植后的巨细胞病毒感染

中华儿科杂志 2004年第12期42卷 951-952页

作者：徐世侠栾佐杨平地吴南海王鹏云黄友章海军总医院儿科北京100037 海军总医院血液科北京100037

脐带血移植(cord blood transplantation, CBT)是治疗儿童高危白血病的有效方法之一,脐血移植由于造血植入延迟,免疫重建慢,各种感染的机会增加,影响了长期生存率[1].巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)感染是异基因干细胞移植严重的合... 详细信息

脐带血移植(cord blood transplantation, CBT)是治疗儿童高危白血病的有效方法之一,脐血移植由于造血植入延迟,免疫重建慢,各种感染的机会增加,影响了长期生存率[1].巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)感染是异基因干细胞移植严重的合并症之一[2],CMV活动性感染常常可以致命,导致移植失败;CMV的预防、早期诊断及时治疗,是降低移植患者死亡的关键.我们采用PCR技术对6例脐血移植患者的血液进行了检测,旨在了解脐血移植患者CMV感染情况.

关键词：脐血移植患者 CMV 巨细胞病毒感染治疗儿童高危 PCR技术血液预防

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤程度与后期神经行为异常的关联

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中华新生儿科杂志(中英文) 2023年第9期38卷 555-561页

作者：丁亚兵杨辉周杰汪兆艳王倩栾佐南方医科大学第二临床医学院广州510515 解放军总医院第六医学中心儿科北京100048

目的探讨评分法及磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)判断大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)程度并预测脑损伤后神经行为异常的意义。方法60只7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字表法分为对照... 详细信息

目的探讨评分法及磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)判断大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)程度并预测脑损伤后神经行为异常的意义。方法60只7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字表法分为对照组14只、假手术组14只、模型组32只。采用Rice-Vannucci法离断右侧颈总动脉+缺氧制作HIBD模型。模型组大鼠建模24 h内经一般情况评分及Longa评分联合评估,筛选出中、重度HIBD存活鼠进行实验。建模24 h随机选取5只模型组大鼠采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色验证脑梗死;建模1周各组均随机选取6只大鼠采用苏木精-伊红染色镜下观察HIBD脑损伤情况;建模4周对照组和假手术组各随机选择4只、模型组取剩余的8只大鼠采用MRI进行脑损伤体积评估;建模5~6周对各组剩余8只大鼠采用圆筒实验、13周采用水迷宫实验检测大鼠神经行为。结果模型组32只大鼠经评估,共筛选出19只中、重度HIBD大鼠。模型组大鼠建模24 h经脑梗死验证均为中、重度HIBD,建模1周脑组织病理可见以灰质为主的脑损伤,4周时MRI显示中、重度HIBD比例为7/8。与对照组及假手术组相比,模型组建模5~6周圆筒实验左前肢使用率明显减少(P0.05),建模4周MRI脑损伤体积与5~6周圆筒实验左前肢使用率、13周水迷宫实验穿越平台象限次数呈负相关(P<0.05),与13周水迷宫实验潜伏期呈正相关(P<0.05)。结论HIBD大鼠建模24 h内经一般情况评分及Longa评分可初步预测HIBD模型脑损伤程度,建模4周时在脑损伤慢性期通过MRI再次评估,对观测HIBD大鼠中、远期神经行为异常具有很好的预判作用。

关键词：缺氧缺血性脑损伤大鼠圆筒实验磁共振成像水迷宫实验

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低渗油藏注空气低温氧化数值模拟研究

西南石油大学学报（自然科学版） 2008年第6期30卷 117-120页

作者：于洪敏任韶然杨宝泉左景栾唐汝众中国石油大学石油工程学院山东东营257061 中海石油研究中心北京100027 中国石化胜利油田有限公司采油工艺研究院山东东营257000

针对胜利油田低渗透油藏注空气低温氧化提高采收率,基于室内实验和数值模拟相结合的手段,通过拟合氧化实验的压力降、产出气体含量,建立了注空气低温氧化(LTO)模拟模型,评价了注空气效果影响因素的敏感性及作用机理,对比了注空气与注N2... 详细信息

针对胜利油田低渗透油藏注空气低温氧化提高采收率,基于室内实验和数值模拟相结合的手段,通过拟合氧化实验的压力降、产出气体含量,建立了注空气低温氧化(LTO)模拟模型,评价了注空气效果影响因素的敏感性及作用机理,对比了注空气与注N2的驱油效果及经济可行性。实际应用表明,模拟与实验结果吻合较好,数值模拟方法可行;胜利油田渤南罗36断块注空气效果影响因素的重要性大小依次为注气速度、油藏温度、剩余油饱和度、油藏倾角、射孔位置等;注空气相对于注N2而言成本低,驱油效果好。为胜利油田低渗油藏注空气动态监测及方案调整提供了依据,对注空气提高采收率开发方案的制订及优化具有借鉴意义。

关键词：低渗透注空气低温氧化提高采收率数值模拟胜利油田