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家蚕整合素Bmintegrin β1基因的克隆及表达

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生物工程学报 2017年第12期33卷 1955-1967页

作者：李重阳张奎申利赵羽卒潘光照徐曼苏晶晶崔红娟西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716

整合素作为一种跨膜糖蛋白,与生物体的生理和病理等多个过程密切相关。为了探究其在家蚕中扮演的角色,通过PCR及RACE技术克隆得到了家蚕整合素β家族成员Bmintegrinβ1,通过结构域预测网站对其结构域进行了预测,并构建进化树对其进化关... 详细信息

整合素作为一种跨膜糖蛋白,与生物体的生理和病理等多个过程密切相关。为了探究其在家蚕中扮演的角色,通过PCR及RACE技术克隆得到了家蚕整合素β家族成员Bmintegrinβ1,通过结构域预测网站对其结构域进行了预测,并构建进化树对其进化关系进行分析,此外通过原核表达系统及蛋白纯化方法获得其重组蛋白,使用重组蛋白免疫小鼠获得其多克隆抗体,并采用半定量PCR及Western blotting方法检测Bmintegrin β1的时空表达。文中得到家蚕整合素Bmintegrin β1的3种剪切形式,且这3种剪切体具有长为2 502 bp的开放阅读框架,编码833个氨基酸。根据预测该蛋白含有Integrin-B-tail、跨膜区等一系列整合素家族保守的结构域。进化树结果表明该蛋白与同为鳞翅目成员的烟夜蛾和黑脉金斑蝶的整合素蛋白最为接近。此外我们通过原核表达系统及亲和层析技术获得了高纯度的Bmintegrin β1蛋白,进一步制得多克隆抗体。并通过免疫印迹反应证明该抗血清能特异识别Bmintegrin β1重组蛋白。之后通过半定量PCR及免疫印迹检测,结果显示该蛋白在家蚕的各组织以及血细胞各时期均有较高表达且在血液中表达量最高。总之,这项研究为家蚕整合素家族的研究提供了基础。

关键词： Bmintegrin β1 家蚕时空表达分析原核表达多克隆抗体制备

家蚕组织蛋白酶L(BmCathepsin L)基因鉴定、表达及其功能分析

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中国农业科学 2017年第16期50卷 3236-3246页

作者：潘光照张奎李重阳赵羽卒申利徐曼苏晶晶林西崔红娟西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室

【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB... 详细信息

【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB)中序列BGIBMGA006893设计引物,利用RACE技术克隆家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA全长序列,通过在线工具对基因结构和蛋白质分子量及等电点进行预测;在NCBI数据库下载其他物种组织蛋白酶L同源序列,利用Clustalx(1.83)和MEGA 6.0软件进行同源比对并构建进化树。运用RT-PCR和qRT-PCR对其时空表达特征进行分析。选取该基因的特异性片段,经PCR扩增,测序验证后将其连接至pET-28载体,转化至Rosseta感受态表达菌株,经IPTG在适宜温度条件下诱导,获得组织蛋白酶L重组蛋白。然后再利用镍离子亲和层析法对该蛋白进行纯化,获得纯度较高的重组蛋白。最后利用大肠杆菌对家蚕血液系统进行攻毒,检测家蚕组织蛋白酶L基因的表达水平。【结果】通过查询家蚕基因组数据库和生物信息学分析得出,家蚕组织蛋白酶L基因定位于家蚕第10号染色体上,基因编号为BGIBMGA006893,nscaf2860。基因开放阅读框全长687 bp,编码228个氨基酸,含有保守的Pept1结构域。通过在线网站预测,得出该蛋白酶的分子量为26.132 k D,等电点为4.57。进化分析表明该基因与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾和黑脉金斑蝶亲缘关系最为接近。RT-PCR显示该基因集中表达于血细胞,在血液不同龄期也较高表达。用His抗体检测经纯化后的蛋白,最终成功孵育出纯化后的蛋白条带;大肠杆菌个体攻毒免疫试验检测显示,其mRNA表达水平随攻毒时间呈现抛物线式的显著性变化规律,从而揭示出BmCat L与家蚕免疫系统的关联性。【结论】克隆获得家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA序列,发现其特异性高表达于血细胞。通过原核表达和蛋白纯化成功获得了该基因的重组蛋白。大肠杆菌的刺激能够显著上调其表达,推测组织蛋白酶L可能参与家蚕免疫反应。

关键词：组织蛋白酶L基因家蚕基因克隆原核表达蛋白纯化免疫应激

家蚕B类清道夫受体BmSCRB8基因的克隆及表达

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生物工程学报 2016年第10期32卷 1408-1421页

作者：赵羽卒张奎唐梅徐曼李重阳潘光照申利崔红娟杨丽群西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716

B类清道夫受体在动脉粥样硬化及其他心血管疾病的形成或抑制,机体免疫防御,凋亡细胞清除等生理过程中起着重要的作用。克隆了家蚕B型清道夫受体家族的一个成员BmSCRB8基因,通过RACE技术获得BmSCRB8的c DNA全长为2 668 bp,其ORF为1 704 ... 详细信息

B类清道夫受体在动脉粥样硬化及其他心血管疾病的形成或抑制,机体免疫防御,凋亡细胞清除等生理过程中起着重要的作用。克隆了家蚕B型清道夫受体家族的一个成员BmSCRB8基因,通过RACE技术获得BmSCRB8的c DNA全长为2 668 bp,其ORF为1 704 bp,编码567个氨基酸,通过在线预测其蛋白分子量为63.87 k Da,等电点为6.06。采用RT-PCR方法得到了BmSCRB8的时空表达谱,结果表明BmSCRB8在家蚕各组织以及血液各时期均有表达,且在脂肪体中表达量最高,变态发育时期表达量较高。原核表达获得BmSCRB8重组蛋白,并经由蛋白纯化、免疫小鼠后制备得到家蚕BmSCRB8多克隆抗体。同时构建了BmSCRB8真核表达载体并转染家蚕胚胎细胞系。免疫荧光及过表达结果显示BmSCRB8主要定位于细胞膜上,Western blotting结果显示免疫小鼠后所得到的抗血清可特异性识别BmSCRB8蛋白。

关键词：家蚕 BmSCRB8 表达谱多克隆抗体亚细胞定位

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安徽省农村人口疟疾防治知识知晓情况

热带病与寄生虫学 2013年第2期11卷 80-84页

作者：李卫东虞晨王建军张建勤许娴张滔赵立胜王岩姜静静宋律安徽省疾病预防控制中心合肥市230601

目的了解安徽省一、二类县的学生和居民疟疾防治知识知晓情况。方法在安徽省内随机选择一个一类县和一个二类县作为研究地点。定量调查中使用多阶段抽样的方法,每县抽取100名初中生,100名小学生和200名居民进行问卷调查。定性调查中每... 详细信息

目的了解安徽省一、二类县的学生和居民疟疾防治知识知晓情况。方法在安徽省内随机选择一个一类县和一个二类县作为研究地点。定量调查中使用多阶段抽样的方法,每县抽取100名初中生,100名小学生和200名居民进行问卷调查。定性调查中每县选择村民、乡镇基层卫生人员、中小学教师和乡村干部四类人群进行深入访谈。结果 2010年12月,对凤阳县和绩溪县的488名学生和409名农村居民进行了疟疾知识知晓率调查,其中凤阳县小学生、初中生、居民总知晓率分别为55.76%,51.17%和69.85%,绩溪县小学生、初中生、居民总知晓率分别为31.76%,48.75%和50.70%。凤阳县小学生、居民总知晓率高于绩溪县,2县初中生总知晓率无显著差异。结论安徽省农村人群疟疾防治知识知晓率略低于周边省份,有待于进一步将加强健康教育。

关键词：疟疾知晓率农村地区

中药浴足方(消癫灵)结合中医辨证施护在免疫性血小板减少性紫癜中的护理研究

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四川中医 2023年第5期41卷 212-215页

作者：赵红王文成都中医药大学附属医院四川成都610072

目的:探索我科自制中药足浴方(消癜灵)联合辨证施护在免疫性血小板减少性紫癜中的应用效果。方法:选取2020年1月~2021年6月的本院血液科患者110例,随机分为对照组和观察组各55例,对照组实施常规护理,观察组在常规护理基础上辨证施护联... 详细信息

目的:探索我科自制中药足浴方(消癜灵)联合辨证施护在免疫性血小板减少性紫癜中的应用效果。方法:选取2020年1月~2021年6月的本院血液科患者110例,随机分为对照组和观察组各55例,对照组实施常规护理,观察组在常规护理基础上辨证施护联合消癜灵足浴方,比较两组患者皮肤瘀点、瘀斑情况、并发症发生率,满意度和护理人员解决问题能力。结果:观察组患者出血情况、并发症发生率在干预后明显低于干预前,且干预后出血情况、并发症发生率显著低于对照组;患者满意度和护理人员解决问题能力在干预后明显高于干预前,且满意度和护理人员解决问题能力观察组得分明显高于对照组,均具有统计学差异(P0.05)。结论:中药浴足方结合辨证施护能有效改善患者出血情况,减少患者并发症发生率,有效帮助患者康复,提高了患者对医护人员的满意度,增加了患者对医护人员的信任,进而提高了患者的护理效果。

关键词：辨证施护消癜灵足浴方免疫性血小板减少性紫癜应用研究

平肝化浊浴足方对高血压病患者血压和颈动脉内膜-中膜厚度的影响

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实用临床医药杂志 2019年第6期23卷 70-72页

作者：尚德师郭强赵婕上海市第六人民医院金山分院中医内科上海201599 上海市第六人民医院金山分院超声功能科上海201599

目的探讨平肝化浊浴足方对1～2级高血压病患者血压和颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)的影响。方法选取中医内科门诊收治的高血压(肝阳上亢夹痰湿型)患者60例将其随机分为治疗组和对照组,对照组口服左旋氨氯地平片和辛伐他汀片,治疗组在对照组... 详细信息

目的探讨平肝化浊浴足方对1～2级高血压病患者血压和颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)的影响。方法选取中医内科门诊收治的高血压(肝阳上亢夹痰湿型)患者60例将其随机分为治疗组和对照组,对照组口服左旋氨氯地平片和辛伐他汀片,治疗组在对照组基础上加用平肝化浊浴足方浴足,每晚1次,共治疗6个月,比较2组患者治疗前后IMT指标,并比较2组患者治疗前及治疗1、2、3、4、5、6个月后的血压。结果与对照组相比,治疗组治疗2、3、4、5、6个月后的收缩压显著更低,治疗3、4、5、6个月后的舒张压显著更低(P <0. 01),且治疗组治疗6个月后的IMT显著更低(P <0. 01)。结论将平肝化浊浴足方应用于1～2级高血压病患者中,可在一定程度上改善患者血压和颈动脉硬化情况。

关键词：高血压病肝火亢盛夹痰浊证平肝化浊浴足方颈动脉内膜-中膜厚度

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甲状腺机能亢进性心脏病临床研究分析

中医临床研究 2019年第25期11卷 53-55页

作者：赵晓华蒋子云范冠杰广州中医药大学深圳医院(福田) 广东深圳518000 广东省中医院广东广州510405

目的:探讨甲状腺功能亢进性心脏病患者的发病特点和中医证候规律,以期对今后甲亢性心脏病的诊治提供科学的、客观的临床循证医学证据。方法:通过对三甲中医院43例第一诊断为甲亢性心脏病患者的临床资料进行回顾性分析,运用频数统计方法... 详细信息

目的:探讨甲状腺功能亢进性心脏病患者的发病特点和中医证候规律,以期对今后甲亢性心脏病的诊治提供科学的、客观的临床循证医学证据。方法:通过对三甲中医院43例第一诊断为甲亢性心脏病患者的临床资料进行回顾性分析,运用频数统计方法对其临床发病特点,中医证候、证素等进行统计分析。结果:纳入的43例甲亢性心脏病患者中以女性患者多见,发病年龄以中年人居多,甲亢病史7d^30年,平均住院时间10d;心脏彩超提示最常见的是全心扩大,左心室扩大以及二尖瓣三尖瓣重度关闭不全;心电图常见表现是心房颤动和窦性心动过速;胸片常见表现是心影扩大和肺动脉高压,以及肺瘀血;甲状腺彩超发现超过一半患者提示结节性甲状腺肿;甲亢性心脏病常见的合并疾病前五位是心律失常,慢性甲状腺炎,心功能不全,高血压,高尿酸血症;常见的前6位证素是血瘀,气虚,痰,阴虚,湿以及热;常见的中医证候主要是气阴两虚,气虚痰瘀阻络,湿热瘀阻,肝郁脾虚。结论:甲亢性心脏病的发生不分年龄、性别、病程,临床表现以心脏的主要表现为主,合并心律失常,慢性甲状腺炎患者居多,中医证候及证素分析提示以气阴两虚、湿热瘀阻为主。

关键词：甲状腺机能亢进性心脏病临床研究证候规律

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消渴浴足方治疗糖尿病周围神经病变临床研究

国际中医中药杂志 2016年第5期38卷 414-416页

作者：孙聪聪徐巍龙许方圆刘飞祥赵越余江毅南京中医药大学研究生院 210023 江苏省中医院内分泌科南京210029

目的评价消渴浴足方治疗糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）的临床疗效。方法将符合入选标准的100例DPN住院患者按随机数字表法分为2组各50例，对照组采用西医常规治疗，治疗组在此基础上配合消渴浴足方足浴。对... 详细信息

目的评价消渴浴足方治疗糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）的临床疗效。方法将符合入选标准的100例DPN住院患者按随机数字表法分为2组各50例，对照组采用西医常规治疗，治疗组在此基础上配合消渴浴足方足浴。对2组治疗前后中医症状积分、DPN临床评分（多伦多积分）进行比较，评价临床疗效。结果治疗后，治疗组多伦多评分中，症状分[（1．50±0．94）分比（2．23±1．01）分，t=-2．920]、反射分[（3．60±1．77）分比（4．27±1．72）分，t=-1．980]、感觉分[（1．53±0．63）分比（2．10±0．84）分，t=-2．950]均显著低于对照组（P〈0．05）；治疗组中医证候主症积分[（1．77±1．17）分比（3．17±1．82）分，t=-3．550]、次症积分[（2．23±1．59）分比（4．27±1．57）分，t＝-4．980]、舌苔脉象积分[（1．83±0．65）分比（2．47±0．51）分，t=-4．220]均显著低于对照组（P〈0．01）。结论消渴浴足方可改善DPN患者的临床症状。

关键词：消渴浴足方糖尿病周围神经病变临床疗效