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Synthesis of haptens and production of antibodies to bisphenol A

Frontiers of Agricultural Science and Engineering 2017年第3期4卷 366-372页

作者： Xiya ZHANG Xiaoyun DONG Sijun ZHAO yuebin ke Kai WEN Suxia ZHANG Zhanhui WANG Jianzhong SHEN Beijing Advanced Innovation Center for Food Nutrition and Human Health/College of Veterinary Medicine China Agricultural University Beijing key Laboratory of Detection Technology for Animal-Derived Food Safety Department for Safety Supervision of Animal Products China Animal Health and Epidemiology Center Department of Genetic Toxicology Shenzhen Center for Disease Control and Prevention Beijing Laboratory for Food Quality and Safety/National Reference Laboratory for Veterinary Drug Residues

Three immunizing haptens of bisphenol A(BPA), including two new haptens, were used to produce highly sensitive and specific polyclonal antibodies. The spacer arms of haptens for coupling to the protein carrier were located at different positions in BPA, and different length spacer arms were tested. Highly sensitive polyclonal antibodies were obtained and characterized using indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ic ELISA). Under optimized conditions, the half maximal inhibitory concentration(IC50) value of the best polyclonal antibody was 2.1 mg·L^(-1), based on coating heterogeneous antigens, and this optimal polyclonal antibody was highly sensitive toward BPA and displayed negligible crossreactivity with bisphenol B and bisphenol E. A sensitive ic ELISA method utilizing the polyclonal antibody was developed for the determination of BPA in milk. In spiked samples(5, 10 and 20 mg·L^(-1)), the recovery ranged from 80% to 102% with a coefficient of variation(CV) value below 15.8%. The limit of detection of ic ELISA was1.95 mg·L^(-1). These results indicate that the ic ELISA method is suitable for the detection of BPA in milk.

关键词： bisphenol A cross-reactivity hapten indirect competitive ELISA polyclonal antibody

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Prevalence of Salmonella and Antimicrobial Resistance in Isolates from Food Animals—Six PLADs,China,2019

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China CDC weekly 2021年第24期3卷 514-517页

作者： Tingting Cao Peng Liu Yiming Li Mingquan Cui Chunping Zhang Yang Wang Zhangqi Shen Jianzhong Shen yuebin ke Shaolin Wang Yongning Wu College of Veterinary Medicine China Agricultural UniversityBeijingChina China Institute of Veterinary Drug Control BeijingChina key Laboratory of Molecular Epidemiology of Shenzhen Shenzhen Center for Disease Control and PreventionShenzhenGuangdongChina National Health Commission key Laboratory of Food Safety Risk Assessment Food Safety Research Unit(2019RU014)of Chinese Academy of Medical ScienceChina National Center for Food Safety Risk AssessmentBeijingChina.

Summary What is already known about this topic?Salmonella causes acute and chronic diseases in food animals,and infected food animals are one of the most important source of human *** does this report contribute?The prevalence of Salmonella was 10.5%in chicken samples,24.4%in pig,23.3%in duck,and 29.4%in *** isolates were highly resistant to ampicillin(59.60%).What are the implications for public health practices?Data on Salmonella infections among food animals in China could help identify sources and factors related to the spread of Salmonella in food animals and food production chains.

关键词： chains food spread

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Epigenetic regulation mechanism of ABCG2 induced drug-resistant phenotype

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Journal of Medical Colleges of PLA(China) 2011年第5期26卷 243-253页

作者： Yuan Jianhui Zhou Jianmeng JiNana Xu Xinyun Liu Jianjun ke yuebin Cheng Jinquan． Zhuang Zhixiong key Laboratory of Modern Toxicology of Shenzhen Shenzhen Center for Disease Control and Prevention Shenzhen 518055 China

The aim of this study is to investigate epigenetic mechanism of ABCG2 induced drug-resistance. It is not only expatiate for drug-resistance regulation mechanism in all-round, but also to provide scientific experimental basis for selecting target to reverse its drug-resistance. Apply methylation-specific PCR （MSP） to have tested methylation of ABCG2 promoter region -359 to -353 specific positions in breast cancer tissues and paired adjacent tissue of 22 cases and test their methylation positions with MSP products for sequencing; and adopt fluorescent quantitation RT-PCR to test expression level DNMT1, DNMT3A, DNMT3B and ABCG2; to make analysis on relationship between them with statistical spearman correlation. Specific positions of ABCG2 gene promoter region of 18 cases among the 22 cases with breast cancer （18/22, 82%） existed high methylation （P〈0.05）, MSP products sequencing proved methylation of the specific position, and mRNA expression level was relative higher in remarkable positive correlation （P〈0.05） ABCG2, DNMT1, DNMT3A, DNMT3B mRNA expression levels in breast cancer tissues were obviously higher than adjacent tissues （P〈0.01）, and DNMT3B expression level was obviously higher than DNMT1 and DNMT3A （P〈0.01） in negative correlation with ABCG2 gene expression （P=0.001）. -359 to -353 positions of promoter regions of ABCG2gene existed high methylation capable to push expression of this gene in beast cancer tissue. DNMT3B is involved in expression regulation in ABCG2 gene, and provides new scientific basis for drug-resistance target as reverse ABCG2 induction

关键词： Breast cancer ABCG2 gene: Epigenetics

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环境化学物暴露与儿童急性淋巴细胞白血病风险的关联研究

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中华预防医学杂志 2016年第10期50卷 893-899页

作者：蒋伟超吴思英柯跃斌深圳市疾病预防控制中心医学分子生物学重点实验室 518055 福建医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系

目的：探讨环境化学物暴露与儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）之间的关联性。方法采用病例-对照研究的方法，收集2015年1月—2016年1月深圳市儿童医院就诊于血液肿瘤科的儿童病例，按年龄和性别进行1∶2匹配，招募就诊于骨科的调查对象... 详细信息

目的：探讨环境化学物暴露与儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）之间的关联性。方法采用病例-对照研究的方法，收集2015年1月—2016年1月深圳市儿童医院就诊于血液肿瘤科的儿童病例，按年龄和性别进行1∶2匹配，招募就诊于骨科的调查对象作为对照组。通过问卷调查获取儿童及其家长的基本信息资料以及环境暴露特征，并采集儿童的血液、尿液标本。采用ELISA测定血清中甲醛的内暴露物（人-甲醛白蛋白结合物）的浓度；采用高效液相色谱法（HPLC）测定尿液中苯、甲苯、二甲苯的内暴露物（反-反式黏糠酸、马尿酸、2-、3-、4-甲基马尿酸）的浓度。采用多因素logistic回归模型分析儿童及其父母暴露因素与cALL发病的关系。结果共收集新发cALL病例71例，年龄为（6.08±3.61）岁，对照142名，年龄为（5.91±3.57）岁。环境化学暴露因素的问卷调查结果显示，10年内居所油漆（OR=4.39，95%CI：1.87~10.31）、母亲孕期暴露化学物（OR=11.78，95%CI：1.65~83.88）、父亲暴露柴油/汽油（OR=8.15，95%CI：2.68~24.83）、父亲暴露染发剂等染料（OR=7.77，95%CI：1.52~39.67）、垃圾焚烧（OR=6.08，95%CI：1.17~31.66）是cALL的危险因素；化学物内暴露方面，病例组中苯的内暴露物检出率（91%，40/44）高于对照组（73%，81/111），差异有统计学意义（χ2=5.92，P=0.021）。病例组中甲醛、苯的内暴露浓度的P50（分别为32.120 pg/ml和2.505μg/g肌酐）高于对照组（分别为18.705 pg/ml和0.672μg/g肌酐），差异有统计学意义（Z值分别为-1.98和-3.95，P值分别为0.047、〈0.001）。多因素logistic回归模型分析结果显示，苯暴露（OR=1.09，95%CI：1.00~1.19）、10年内居所油漆暴露（OR=3.56，95%CI：1.20~10.53）、父亲汽油/柴油暴露（OR=3.75，95%CI：1.06~13.22）是cALL发病的危险因素。结论苯等多种环境化学因素的暴露可能增加cALL的发病风险。

关键词：苯甲醛内暴露急性淋巴细胞白血病环境化学物

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Transmission of Carbapenem Resistance Between Human and Animal NDM-Positive Escherichia coli Strains

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Engineering 2022年第8期8卷 24-33页

作者： Yingbo Shen Fupin Hu Yongqiang Wang Dandan Yin Lu Yang Yiqiang Chen Chunyan Xu Jiyun Li Junyao Jiang Xueyang Wang Yulin Fu Dongyan Shao Dejun Liu Tengfei Ma Chang Cai Zhangqi Shen Shaolin Wang Juan Li Rong Zhang yuebin ke Congming Wu Jianzhong Shen Timothy R.Walsh Yang Wang Beijing key Laboratory of Detection Technology for Animal-Derived Food Safety College of Veterinary MedicineChina Agricultural UniversityBeijing 100193China CAS key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology Institute of MicrobiologyChinese Academy of SciencesBeijing 100101China Institute of Antibiotics&key Laboratory of Clinical Pharmacology of Antibiotics(MoH) Huashan HospitalFudan UniversityShanghai 200040China Department of Preventive Veterinary Medicine College of Veterinary MedicineChina Agricultural UniversityBeijing 100193China State key Laboratory of Animal Nutrition College of Animal Science and TechnologyChina Agricultural UniversityBeijing 100193China College of Animal Science and Technology College of Veterinary MedicineZhejiang A and F UniversityHangzhou 311300China State key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control Collaborative Innovation Center for Diagnosis and Treatment of Infectious DiseaseNational Institute for Communicable Disease Control and PreventionChinese Center for Disease Control and Prevention(CDC)Beijing 102206China The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University Zhejiang UniversityHangzhou 310009China key Laboratory of Genetics&Molecular Medicine of Shenzhen Shenzhen Center for Disease Control and PreventionShenzhen 518055China Department of Zoology University of OxfordOxford OX13SZUK

Although carbapenem use is prohibited in animals in China,carbapenem-resistant Escherichia coli(CREC),especially New Delhi metallo-β-lactamase(NDM)-producing strains,are widely prevalent in foodproducing *** present,the impact of livestock-associated CREC strains on human populations at the national level is ***,we conduct a retrospective cross-sectional study to investigate the prevalence of CREC from clinical settings across 22 Chinese provinces or municipalities and analyze anthropogenic factors associated with their *** also ascertain the blaNDMand blaKPCabundance among pig and chicken farms and present a detailed genomic framework for CREC of animal and human ***,631/29799(2.1%)clinical Escherichia coli(***)isolates were identified as *** analysis revealed that being male,an age below 1,an age between 13 and 18,provinces with greater chicken production,and provinces with higher pig production were associated with higher odds of CREC *** general,73.8%(n=45/61)of pig farms and 62.2%(n=28/45)of chicken farms had a blaNDMabundance of 1×10^(-5)to 1×10^(-3)and 1×10^(-3)to 1×10^(-2),*** all the Chinese NDM-positive ***(n=463)available at the National Center for Biotechnology Information(NCBI),the genomic analysis revealed that blaNDM-5and Inc X3 were the predominant carbapenemase gene-plasmid combination,while a highly homogeneous relationship between NDM-positive isolates from humans and animals was demonstrated at the plasmid and core genome *** the findings suggest frequent CREC transmission between humans and animals,indicating that further discussions on the use of antibiotics in animals and humans are needed,both in China and across the globe.

关键词： Carbapenem resistance Escherichia coli blaNDM-5 One Health Antimicrobial resistance transmission

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邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2016年第5期34卷 346-351页

作者：吕子全谢杏柯跃斌华中科技大学同济医学院公共卫生学院教育部环境与健康重点实验室武汉430030 深圳市疾病预防控制中心、深圳市现代医学分子生物重点实验室

目的探索邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响。方法用1．5、15．0、150．0μmol／L的DEHP对HepG2细胞进行24h持续染毒，连续处理20代后，对细胞的DNA甲基转移酶1（DNMT1）... 详细信息

目的探索邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响。方法用1．5、15．0、150．0μmol／L的DEHP对HepG2细胞进行24h持续染毒，连续处理20代后，对细胞的DNA甲基转移酶1（DNMT1）的基因和蛋白表达、基因组甲基化水平、凋亡水平和细胞周期进行检测，比较DEHP染毒细胞与正常对照细胞的差异。结果HepG2细胞经DEHP染毒处理后，DNMT1的mRNA与蛋白表达水平均明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；随着DEHP染毒剂量的增加，15．0、150．0μmol／L染毒组细胞的基因组甲基化水平明显下调，差异行统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）；150．0μmol／L染毒组细胞晚期凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞周期无显著变化。结论HepG2细胞在接受长期低剂量的DEHP染毒后。细胞基因组DNA甲基化水平明显下调。最高剂量的DEHP长期染毒能诱导细胞出现一定程度的凋亡，DEHP具有细胞毒性，但其对细胞周期没有明显影响。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DNA甲基转移酶1 DNA甲基化

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少数民族人群hOGG1基因多态性与生活方式及DNA氧化损伤的关系

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卫生研究 2012年第1期41卷 45-50页

作者：吴双蒋友胜袁建辉庄志雄柯跃斌深圳市疾病预防控制中心

目的为评估hOGG1基因自然变异和基因-环境的交互作用,对中国5个民族人群的953个健康个体的hOGG1基因326位多态性分布进行了调查。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分析hOGG1基因326位密码子多态性,用高效液相色... 详细信息

目的为评估hOGG1基因自然变异和基因-环境的交互作用,对中国5个民族人群的953个健康个体的hOGG1基因326位多态性分布进行了调查。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分析hOGG1基因326位密码子多态性,用高效液相色谱-电化学检测（HPLC-ECD）方法分析尿中8-羟基-脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）水平,生活方式相关因素（吸烟、饮酒、肉类和水果摄入）资料通过问卷调查获得。结果中国人群中hOGG1基因的等位基因频率分别为0.16（Ser/Ser）,0.49（Ser/Cys）和0.35（Cys/Cys）。5个民族人群中Ser326Cys多态性频率具有显著性差异（P=0.002）。除Ser326Cys与吸烟有关联外（P=0.027）,hOGG1基因多态性与其他的生活方式因素没有关系。Cys326Cys等位基因健康受试者尿中8-OHdG水平显著升高（P=0.033）。结论各民族人群hOGG1基因存在自然变异。吸烟与Cys/Cys多态性频率有关,hOGG1 Cys326Cys基因型个体DNA氧化性损伤的修复水平较低。

关键词： DNA修复人8-羟基鸟嘌呤糖基酶(hOGG1) Ser326Cys多态性生活方式 8-羟基-脱氧鸟嘌呤

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血浆miRNA表达与儿童急性淋巴细胞白血病风险的关联研究

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中华流行病学杂志 2017年第9期38卷 1252-1258页

作者：袁冬妹吴思英黄素丽蒋伟超柯跃斌深圳市疾病预防控制中心医学分子生物学重点实验室 518055 福建医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系福州350108 环境因素与肿瘤福建省重点实验室

目的探讨miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）病例血浆中的表达分布特征，分析其与cALL发病风险之间的关系，并判断miRNA作为cALL诊断标记物的可行性。方法采用病例对照方法，收集2015年1月至2016年11月在深圳市儿童医院确诊初发c... 详细信息

目的探讨miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）病例血浆中的表达分布特征，分析其与cALL发病风险之间的关系，并判断miRNA作为cALL诊断标记物的可行性。方法采用病例对照方法，收集2015年1月至2016年11月在深圳市儿童医院确诊初发cALL和骨折病例作为对照各111例，按性别相同和年龄（±1岁）进行1：1匹配，并从中选择4对cALL病例和对照进行LNATM miRNA表达谱芯片检测。采用实时定量PCR验证miRNA表达水平，利用条件logistic回归分析miRNA与cALL发病风险之间的关系，以受试者工作特征曲线（ROC）和重新分类方法分析miRNA作为cALL生物标志物的可行性。结果芯片筛选出204个差异表达的miRNA。根据入选条件，纳入let-7f-5p、miR-5100、miR-25-3p和miR-3654进行实时定量PCR。病例组let-7f-5p、miR-5100和miR-25-3p的表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P〈0.01）。在调整混杂因素后，这3个miRNA仍然与cALL的发生存在关联[OR值和95%CI分别为0.84（0.76~0.92）、0.81（0.73~0.90）、0.81（0.74~0.89）]。ROC和重新分类法结果显示与传统危险因素模型相比，加入1个或≥ 2个miRNA均增加曲线下面积（P〈0.05），且模型诊断均有增加价值作用（P〈0.01）。结论 let-7f-5p、miR-5100、miR-25-3p的表达水平与cALL的发生关联，可作为cALL的生物标志物。

关键词：儿童急性淋巴细胞白血病生物标志物

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基因组DNA氧化水平对甲基化的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2014年第1期32卷 50-54页

作者：柯跃斌徐新云梅树江谢杏陶功华深圳市疾病预防控制中心 518055

目的分析体外培养细胞在H20：染毒后8-oxo-dG的形成、细胞DNA5-mE含量的变化规律，探讨其时间一剂量一效应关系和DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法利用0、20、40、60、80和100μmol／LH202作用于人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549），每天染毒... 详细信息

目的分析体外培养细胞在H20：染毒后8-oxo-dG的形成、细胞DNA5-mE含量的变化规律，探讨其时间一剂量一效应关系和DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法利用0、20、40、60、80和100μmol／LH202作用于人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549），每天染毒1次，每次2h，共持续4d，继续培养8d。应用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA8-oxo—dG水平、高效毛细管电泳（high－performance capillary electrophoresis，HPCE）法检测细胞全基因组DNA5-mE的含量。结果DNA甲基化与DNA氧化呈现不同特点，A549细胞染毒80μmol／LH2O2后DNA甲基化水平的改变需要10d以上的时间，而相同条件下DNA氧化水平的改变仅需12h，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。H2O2可引起A549细胞甲基化程度降低，呈剂量依赖性关系。在一定的时间剂量范围内，DNA氧化与DNA甲基化作用间呈负相关关系（r=-0．72，P〈0．01）。结论DNA氧化能导致细胞DNA甲基化水平降低，DNA氧化可能是影响细胞甲基化的调控机制之一，在化学物质的毒作用效应中，DNA氧化可能是比DNA甲基化更早的一个重要分子事件。

关键词： DNA氧化 DNA甲基化 DNA修复

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利用基因缺陷细胞模型探讨hOGG1和hMTH1的替补作用

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中华预防医学杂志 2014年第3期48卷 197-202页

作者：柯跃斌吴双黄娟袁建辉邓平建程锦泉深圳市疾病预防控制中心现代医学分子生物学重点实验室 518055

目的通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞（HFL）,分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高... 详细信息

目的通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞（HFL）,分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高压液相色谱串联电化学检测技术及RT-PCR技术分析8-羟基-脱氧鸟嘌呤（7,8-dihydro-8-oxoguanine,8-oxo-dG）水平及hOGG1和hMTH1基因表达水平.结果用高滴度慢病毒感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA表达水平（0.09±0.02）比正常HFL细胞（1.00±0.04）下降了91％,hMTH1 mRNA表达水平（0.41±0.04）比正常HFL细胞（1.02±0.06）下降了60％；用100 μmol/L的H2O2诱导12 h,hOGG1基因缺陷细胞的hMTH1基因表达水平（1.26±0.18）相比对照组（1.01±0.07）提高了25％,hMTH1基因缺陷细胞的hOGG1基因表达水平（1.54±0.25）提高了52％；hOGG1基因缺陷细胞的8-oxo-dG水平（2.48±0.54）是对照组（0.80±0.16）的3.1倍,差异有统计学意义（P＜0.01）,hMTH1基因缺陷细胞（1.84±0.46）的8-oxo-dG水平是对照组（0.80±0.16）的2.3倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论利用基因缺陷细胞模型,发现在氧化诱导作用下,修复基因hOGG1与hMTH1在DNA损伤修复活动中可能分别表现出一定的协同性替补作用,hOGG1的替补作用强于hMTH1.

关键词： RNA干扰基因缺陷 DNA氧化修复基因生物标志替补作用

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