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马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

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科技通报 2009年第3期25卷 300-304页

作者：陈新江毛洁孟庆来张晓燕张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒与免疫研究室北京100050

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋... 详细信息

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。

关键词： gp90基因原核表达纯化 EIAV 诊断

construction and Analysis of Silkworm Pupa (Bombyx mori) cDNA Library

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construction and Analysis of Silkworm Pupa (Bombyx mori) cDN...

家蚕肌钙蛋白CⅢ基因的原核表达及其抗体的制备

浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者： yaozhou zhang, Jian Chen, Zhengbing Lv, Zuoming Nie, Caiying Jiang, Lili Liu, Dan Wang, Yulan Lou, Fukun Zhao, Xiangfu Wu and Genjun Xu Institute of Biochemisty, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018,China

A cDNA library was constructed from whole silkworm pupae (Bombyx mori) and 1500 clones were randomly selected for sequencing to reveal the gene expression profile of the pupae phase. The general cDNA

关键词： Bombyx mori cDNA construction ORF full-length

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农业生物技术学报 2010年第6期18卷 1156-1162页

作者：严巧灵陈剑清王丹叶曼吴祥甫张耀洲浙江理工大学生命科学学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室中国科学院生物化学与细胞生物学研究所

家蚕肌钙蛋白CⅢ(TnCⅢ)是肌钙蛋白C(TnC)的一种亚型结构,本研究利用大肠杆菌表达TnCⅢ融合蛋白,并制备其多克隆抗体。从本实验室的家蚕(Bombyx mori)蛹cDNA文库中搜索到1条编码家蚕肌钙蛋白CⅢ亚型的cDNA序列,将其命名为BmTnCⅢ(Bombyx... 详细信息

家蚕肌钙蛋白CⅢ(TnCⅢ)是肌钙蛋白C(TnC)的一种亚型结构,本研究利用大肠杆菌表达TnCⅢ融合蛋白,并制备其多克隆抗体。从本实验室的家蚕(Bombyx mori)蛹cDNA文库中搜索到1条编码家蚕肌钙蛋白CⅢ亚型的cDNA序列,将其命名为BmTnCⅢ(Bombyx mori TnC Ⅲ)。该cDNA序列含有完整的ORF,可编码153个氨基酸残基组成的TnCⅢ蛋白。根据该cDNA序列,设计带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,通过RT-PCR的方法从家蚕蛹总RNA中扩增到BmTnCⅢ亚型基因的完整的ORF序列(GenBank登录号为DQ889211),并将其重组到原核表达载体pET-28a相应的酶切位点上。将获得的重组质粒pET-28a-BmTnCⅢ转化大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经1mmol/LIPTG诱导表达重组蛋白后,在分子量约21kD处出现融合蛋白条带。用亲和层析的方法纯化目的蛋白His-Tag BmTnCⅢ,并以此为抗原免疫雄性新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus),制备了该融合蛋白的多克隆抗体。Westernblot结果表明,该多克隆抗体具有较高的特异性,可用于后续的组织分布与定位研究。

关键词：家蚕肌钙蛋白CⅢ(TnCⅢ) 原核表达多克隆抗体

Discovery and Structure Analysis of Novel non-coding mRNA-like RNA

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Discovery and Structure Analysis of Novel non-coding mRNA-li...

应用多种水凝胶支架材料构建三维神经干细胞培养模型

浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者： yaozhou zhang Zuoming Nie Jian Chen Zhengbing Lv Zhaohu Qin Caiying Jiang Dan Wang Lili Liu Yulan Lou Fukun Zhao Xiangfu Wu and Genjun Xu Institute of Biochemisty, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018,China

During the analysis of one thousand cDNA sequences from silkworm pupae, it has been found that about 3% mRNA sequence is non-coding mRNA with a polyU sequence at 5’ terminal which is complementary to

关键词： mRNA-like snoRNA polyU 5’terminal secondary structure transcription characteristic AUG box CAT box Bombyx mori

来源： cnki会议评论

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中国细胞生物学学报 2015年第1期37卷 66-73页

作者：吴婷李朝晖崔占峰刘庆喜孙贺张耀洲天津中医药大学天津市现代中药重点实验室天津300193 天津国际生物医药联合研究院天津300457 天津卫凯生物工程有限公司天津300457 英国牛津大学生物医学工程研究所天津大学药物科学与技术学院天津300072

该研究以鼠尾胶原、透明质酸以及海藻酸钠为主要成分,同时添加功能化的层粘连蛋白形成12种生物材料支架。应用大鼠神经干细胞(rat neural stem cells,r NSCs)体外培养,比较了支架的生物相容性和功能特点。结果显示,鼠尾胶原和透明质酸... 详细信息

该研究以鼠尾胶原、透明质酸以及海藻酸钠为主要成分,同时添加功能化的层粘连蛋白形成12种生物材料支架。应用大鼠神经干细胞(rat neural stem cells,r NSCs)体外培养,比较了支架的生物相容性和功能特点。结果显示,鼠尾胶原和透明质酸支架形成的三维多孔结构利于r NSCs的黏附,培养7 d后,1 mg/m L胶原组内的细胞活力更强,而含15%交联剂的层粘连蛋白–透明质酸支架内细胞与神经突触相互缠绕,展现出更明显的神经元样生理形态和特异性蛋白。1.5%海藻酸钠胶珠内的细胞呈球体生长,更适用于进行细胞的大规模动态培养。该研究构建的支架与r NSCs具有良好的生物相容性,利于其增殖和分化。因此,r NSCs分化后的神经元与水凝胶构成的三维培养模型,有望进一步应用于神经退行性疾病的研究和相关药物检测中。

关键词：神经干细胞三维培养模型生物支架胶原透明质酸海藻酸钠

BmMP54基因在家蚕组织的表达模式及与BmNPV多角体蛋白基因的融合表达分析

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蚕业科学 2017年第4期43卷 587-593页

作者：严婷婷于滨潘海涛舒建洪张耀洲浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

从家蚕蛹c DNA文库中筛选到一个403 bp的未知功能基因,将其命名为Bm MP54(Gen Bank登录号:DY231399.1)。该基因序列包含312 bp的开放阅读框,编码由103个氨基酸残基组成的蛋白质,生物信息学预测其含有2个跨膜区域,等电点及分子质量分别为... 详细信息

从家蚕蛹c DNA文库中筛选到一个403 bp的未知功能基因,将其命名为Bm MP54(Gen Bank登录号:DY231399.1)。该基因序列包含312 bp的开放阅读框,编码由103个氨基酸残基组成的蛋白质,生物信息学预测其含有2个跨膜区域,等电点及分子质量分别为9.90和10.463 k D。将Bm MP54与家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)的多角体蛋白基因(Polh)融合后分别连接到原核表达载体p GEX-4T-1和家蚕杆状病毒表达系统转移载体p Fast BacTMHTB中构建重组质粒,并分别在大肠埃希菌BL21(DE3)和家蚕卵巢培养细胞(Bm N)中表达。原核表达的融合蛋白通过调节p H值、阴离子交换层析等纯化获得了65 k D的重组融合蛋白Polh-Bm MP54,通过Western blotting可在重组杆状病毒感染的Bm N细胞中检测到42 k D左右的Bm MP54重组蛋白,表明已按设计要求高效表达并纯化获得目的蛋白质。实时荧光定量PCR分析显示Bm MP54在家蚕5龄幼虫的气门和脂肪体组织中表达量最高,在表皮和头部的表达量最低。上述研究结果有利于后续探讨Bm MP54在家蚕生长发育过程中的生物学功能。

关键词：家蚕MP54基因跨膜蛋白家蚕核型多角体病毒多角体蛋白基因融合表达实时荧光定量PCR 表达谱

多胞薄壁铝合金方管载荷特性与多目标优化研究

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包装工程 2024年第7期45卷 246-253页

作者：李耀宙张冰冰薛仲卿范志强太原工业学院太原030008 中北大学太原030051

目的通过引入边长系数γ,得到构型不同的W型和C型多胞薄壁方管结构,改善多胞薄壁方管的吸能效率。方法本文利用实验和数值方法对2种类型方管进行研究,材料选用6060T4铝合金,深入分析边长系数γ和壁厚t对结构的载荷特性、能量吸收及变形... 详细信息

目的通过引入边长系数γ,得到构型不同的W型和C型多胞薄壁方管结构,改善多胞薄壁方管的吸能效率。方法本文利用实验和数值方法对2种类型方管进行研究,材料选用6060T4铝合金,深入分析边长系数γ和壁厚t对结构的载荷特性、能量吸收及变形模式的影响。然后采用非支配排序遗传算法(Non-dominated Sorting Genetic Algorithm,NSGA-Ⅱ)求解,针对结构的峰值载荷(Pc)和比吸能(Sa)进行多目标优化。结果数值仿真所得载荷曲线与实验结果一致,折叠波数均为7个,边长系数γ对2类结构的载荷和变形有显著影响。结论本文所得结果为改善多胞薄壁方管结构的缓冲吸能及冲击防护提供了数据支持。

关键词：多胞薄壁方管边长系数响应面模型非支配排序遗传算法(NSGA-Ⅱ) 多目标优化

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病毒感染条件下家蚕ORC的表达变化

生物技术通报 2010年第9期26卷 191-193页

作者：杨慧鹏罗素娟李轶女张志芳沈桂芳张耀洲浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

DNA复制原点识别复合体(origin recognition complex,ORC)识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能。利用荧光定量PCR技术监测... 详细信息

DNA复制原点识别复合体(origin recognition complex,ORC)识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能。利用荧光定量PCR技术监测感染核型多角体病毒(BmNPV)后,家蚕五龄起蚕脂肪体组织中ORC各个亚基的表达的变化。在感染早期,ORC的拷贝数有所下降,随后表达量增加,并出现两个峰值。病毒感染36 h后,ORC各个亚基的表达量均下降。家蚕感染病毒后,脂肪体组织中ORC的表达趋势与病毒DNA复制的趋势相近,推测BmORC参与了病毒DNA的复制。

关键词：家蚕 ORC 表达趋势实时荧光定量PCR 家蚕核型多角体病毒

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香附水提液对小麦幼苗生理活性酶的影响

基因组学与应用生物学 2019年第4期38卷 1697-1701页

作者：孙君艳刘俊强张耀洲王付山仝胜利程琴刘书含信阳农林学院信阳464000 河南省财经学校郑州450002 南阳市桐柏县种子管理站南阳474750

鉴于中草药在抗菌、杀菌,抑制细胞分裂等方面的作用,利用中草药来抑制小麦穗发芽或许是一种新的途径和方法。为了初步研究香附水提液在小麦种子萌发过程中对幼苗生理活性酶的影响,采用室内培养皿培养法,分析不同浓度的香附水提液浸种后... 详细信息

鉴于中草药在抗菌、杀菌,抑制细胞分裂等方面的作用,利用中草药来抑制小麦穗发芽或许是一种新的途径和方法。为了初步研究香附水提液在小麦种子萌发过程中对幼苗生理活性酶的影响,采用室内培养皿培养法,分析不同浓度的香附水提液浸种后对小麦幼苗的α-淀粉酶含量、叶绿素含量和过氧化氢酶活性的作用,结果表明α-淀粉酶含量、叶绿素含量随水提液浓度的增加而降低,过氧化氢酶活性含量则随之递增,并且以香附水提液浓度为120 g/L和150 g/L的处理差异显著,此为研究开发抑制小麦穗发芽的中草药生物抑制剂提供试验依据。

关键词：香附小麦幼苗 α-淀粉酶叶绿素含量过氧化氢酶