BmMP54基因在家蚕组织的表达模式及与BmNPV多角体蛋白基因的融合表达分析

作     者：严婷婷 于滨 潘海涛 舒建洪 张耀洲 Yan Tingting;Yu Bin;Pan Haitao;Shu Jianhong;Zhang Yaozhou

作者机构：浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2017年第43卷第4期

页      面：587-593页

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划"863"项目(No.2007AA021703) "十二五"国家科技重大新药创制专项(No.2012ZX09102301-9) 

主　　题：家蚕MP54基因 跨膜蛋白 家蚕核型多角体病毒多角体蛋白基因 融合表达 实时荧光定量PCR 表达谱 

摘      要：从家蚕蛹c DNA文库中筛选到一个403 bp的未知功能基因,将其命名为Bm MP54(Gen Bank登录号:DY231399.1)。该基因序列包含312 bp的开放阅读框,编码由103个氨基酸残基组成的蛋白质,生物信息学预测其含有2个跨膜区域,等电点及分子质量分别为9.90和10.463 k D。将Bm MP54与家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)的多角体蛋白基因(Polh)融合后分别连接到原核表达载体p GEX-4T-1和家蚕杆状病毒表达系统转移载体p Fast BacTMHTB中构建重组质粒,并分别在大肠埃希菌BL21(DE3)和家蚕卵巢培养细胞(Bm N)中表达。原核表达的融合蛋白通过调节p H值、阴离子交换层析等纯化获得了65 k D的重组融合蛋白Polh-Bm MP54,通过Western blotting可在重组杆状病毒感染的Bm N细胞中检测到42 k D左右的Bm MP54重组蛋白,表明已按设计要求高效表达并纯化获得目的蛋白质。实时荧光定量PCR分析显示Bm MP54在家蚕5龄幼虫的气门和脂肪体组织中表达量最高,在表皮和头部的表达量最低。上述研究结果有利于后续探讨Bm MP54在家蚕生长发育过程中的生物学功能。