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自噬在失血性休克小鼠急性肺损伤中的生物学作用及相关机制

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中华危重病急救医学 2024年第8期36卷 848-852页

作者：林雪容王佳张志斌朱丽娟河北北方学院附属第一医院急诊科河北张家口075000

目的探讨自噬在失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)中的生物学作用及机制。方法按随机数字表法将野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、ALI组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组8只;将自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)基因敲除的C57BL/6小鼠分... 详细信息

目的探讨自噬在失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)中的生物学作用及机制。方法按随机数字表法将野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、ALI组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组8只;将自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)基因敲除的C57BL/6小鼠分为LC3敲除组和LC3敲除+ALI组,每组8只。对照组、ALI组、LC3敲除组、LC3敲除+ALI组腹腔注射2 mL/kg生理盐水,雷帕霉素组腹腔注射3 mg/kg自噬激活剂雷帕霉素,3-MA组腹腔注射15 mg/kg自噬抑制剂3-MA,均连续给药3 d,末次给药后2 h制备失血性休克致ALI模型。制模后24 h处死小鼠,计算肺指数;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变并计算肺损伤评分;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肺组织自噬基因LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1的表达;按试剂盒步骤检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,ALI组肺组织结构破坏、渗出增多,肺指数、肺损伤评分、肺组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达及TNF-α、IL-6、MDA含量均明显升高。与ALI组比较,雷帕霉素组肺组织结构破坏减轻、渗出减少,肺指数、肺损伤评分及肺组织中TNF-α、IL-6、MDA含量降低,肺组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达升高〔肺指数:(7.56±0.39)%比(9.12±0.59)%,肺损伤评分(分):3.04±0.58比9.32±2.14,TNF-α(ng/mg):1.85±0.32比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):1.61±0.32比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):1.03±0.16比1.88±0.24,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:1.21±0.12比0.39±0.05,Beclin-1/β-actin:1.10±0.12比0.58±0.06,均Png/mg):4.77±0.71比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):3.44±0.52比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):2.71±0.42比1.88±0.24,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:0.25±0.04比0.39±0.05,Beclin-1/β-actin:0.21±0.03比0.58±0.06,均Png/mg):4.85±0.72比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):3.28±0.51比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):2.75±0.41比1.88±0.24,均P<0.05〕。结论自噬在失血性休克小鼠ALI中起保护作用,相关的分子机制是抑制炎症反应和氧化应激反应。

关键词：失血性休克急性肺损伤自噬炎症反应氧化应激

脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征患者血清焦亡蛋白的表达及意义

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国际呼吸杂志 2024年第2期44卷 207-211页

作者：刘佳丽苑萌韩宝华谭俊晖林雪容河北北方学院附属第一医院急诊科张家口075000

目的研究脓毒症相关急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清焦亡蛋白的变化及意义。方法本研究为病例对照研究。采用非随机抽样法,选择2020年1月至2022年12月河北北方学院附属第一医院收治的脓毒症200例患者作为研究对象,根... 详细信息

目的研究脓毒症相关急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清焦亡蛋白的变化及意义。方法本研究为病例对照研究。采用非随机抽样法,选择2020年1月至2022年12月河北北方学院附属第一医院收治的脓毒症200例患者作为研究对象,根据脓毒症患者是否合并ALI/ARDS分为脓毒症非ALI/ARDS组(116例)与脓毒症ALI/ARDS组(84例),根据脓毒症ALI/ARDS患者28 d预后情况分为生存组(52例)和死亡组(32例)。检测血清焦亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、Gasdermin-D(GSDMD)水平,采用logistic回归分析脓毒症ALI/ARDS患者死亡的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析脓毒症ALI/ARDS患者死亡的预测指标。结果脓毒症ALI/ARDS组患者的血清Caspase-1、GSDMD-N水平均高于脓毒症非ALI/ARDS组。分别为Caspase-1[(1181.25±320.31)ng/L比(913.58±201.46)ng/L];GSDMD-N(8.87±1.59)μg/L比(7.14±1.24)μg/L;(均Png/L比(1039.55±220.2)ng/L;GSDMD-N(10.35±1.55)μg/L比(7.97±0.67)μg/L];APACHEⅡ[(27.50±3.75)分比(21.15±4.70)分。(均P<0.05)];logistic回归分析显示,血清Caspase-1、GSDMD-N、APACHEⅡ评分是脓毒症ALI/ARDS患者死亡的影响因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清Caspase-1(95%CI:0.76~0.93)、GSDMD-N(95%CI:0.88~1.00)及APACHEⅡ评分(95%CI:0.76~0.95)对脓毒症ALI/ARDS患者的死亡具有预测效能,三项指标联合(平行试验)预测的敏感度和特异度分别为96.88%和92.31%。结论脓毒症相关ALI/ARDS患者血清焦亡蛋白Caspase-1、GSDMD-N显著增加,且其联合APACHEⅡ评分对患者死亡具有良好的预测效能。

关键词：脓毒症急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征细胞焦亡

顶空箭型固相微萃取-气相质谱法测定水中致嗅物质

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城镇供水 2023年第5期 54-58,64页

作者：李学荣永康市钱江水务有限公司浙江金华321300

文章建立了顶空箭型固相微萃取(HS-SPME-ARROW)结合气相质谱法(GC-MS)测定水中土臭素(GSM)和2-甲基异莰醇(2-MIB)的分析方法。通过利用目标化合物的TIC图和EIC图确定了目标化合物的保留时间,结合优化后的固相微萃取方法、气相质谱方法,... 详细信息

文章建立了顶空箭型固相微萃取(HS-SPME-ARROW)结合气相质谱法(GC-MS)测定水中土臭素(GSM)和2-甲基异莰醇(2-MIB)的分析方法。通过利用目标化合物的TIC图和EIC图确定了目标化合物的保留时间,结合优化后的固相微萃取方法、气相质谱方法,开展标准工作曲线线性范围、方法可靠性试验、检出限、定量限、加标回收率等质控试验。结果表明:该方法在5~100ng/L具有良好的线性范围,且线性相关系数均> 0.999;GSM和2-MIB的方法检出限分别为1.075ng/L和1.078ng/L,定量下限分别为4.30ng/L、4.31ng/L,满足方法要求;出厂水和原水的加标回收率分别为81.0%~92.5%和88.4%~98.5%。由此表明该方法适用于水中两种致嗅物质(GSM、2-MIB)的检测。

关键词：顶空-箭型固相微萃取气相-质谱土臭素 2-甲基异莰醇

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膳食中双酚类化合物的污染水平和风险评估

中国食品学报 2023年第12期23卷 219-228页

作者：佐鹏谭学蓉刘少颖杨容李波穆芳石卜芳广元市疾病预防控制中心四川广元628000 杭州市疾病预防控制中心杭州310006

采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)对278份广元市售食品中8种双酚类化合物(BPs)进行分析,并估算不同年龄和不同性别组人群的BPs每日膳食摄入量,评估居民通过膳食摄入BPs的情况和健康风险。结果表明:大部分(76.3%)市售食品含有BPs... 详细信息

采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)对278份广元市售食品中8种双酚类化合物(BPs)进行分析,并估算不同年龄和不同性别组人群的BPs每日膳食摄入量,评估居民通过膳食摄入BPs的情况和健康风险。结果表明:大部分(76.3%)市售食品含有BPs,含量在检出限(LOD)~59.08μg/kg之间,平均3.12μg/kg,其中罐头食品、谷类、水产类以及蔬菜中ΣBPs含量较高。BPA和BPS是主要的污染物,分别占总BPs的77.9%%和14.4%。不同年龄和不同性别组人群BPs每日膳食暴露水平在42.59~96.54 ng/kg bw/d之间,BPA对膳食暴露的贡献率最高,其次是BPS。BPs总暴露量随着年龄的增长呈下降趋势。2~19岁(发育关键期)人群的ΣBPs每日膳食摄入量(87.96 ng/kg bw/d)明显高于19岁以上人群的成人组(48.05 ng/kg bw/d)。各组人群由饮食接触引起的BPs健康风险较低,其从膳食接触到的BPs均低于欧洲食品安全局暂定的BPA日允许摄入量(t-TDI,4μg/kg bw/d)。因BPA类似物的生产和应用在全球范围呈上升趋势,故其引起的健康风险应持续被关注。

关键词： UPLC-MS/MS 双酚类化合物污染水平膳食暴露评估

乙炔基雌二醇短期暴露诱导斑马鱼卵巢损伤的恢复机制

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重庆师范大学学报（自然科学版） 2018年第5期35卷 33-40,F0002页

作者：刘智皓兰雪溶李英文重庆师范大学生命科学学院重庆市高校动物生物学重点实验室重庆市高校生物活性物质工程研究中心重庆401331

【目的】探讨乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE2)短期暴露诱导斑马鱼(Danio rerio)卵巢损伤的恢复机制。【方法】用100ng·L-1的EE2暴露性成熟斑马鱼雌鱼6d,随后放入清水中自然恢复21d;还设立1个不进行EE2暴露的对照组进行同步处... 详细信息

【目的】探讨乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE2)短期暴露诱导斑马鱼(Danio rerio)卵巢损伤的恢复机制。【方法】用100ng·L-1的EE2暴露性成熟斑马鱼雌鱼6d,随后放入清水中自然恢复21d;还设立1个不进行EE2暴露的对照组进行同步处理。测定此期间实验鱼的体质量、性腺质量、GSI、子代存活率、激素水平和相关基因表达的变化。【结果】与对照组的情况相比,EE2短期暴露后的斑马鱼雌性成鱼卵巢质量、性腺成熟度(GSI)和后代存活率明显下降,斑马鱼卵子发生受到严重损伤,血浆雌二醇(E2)的质量浓度下降,肝脏vtg1基因的表达有所上调,性腺轴中参与卵子发生的cyp19a1b,gnrh-III,fshβ,lhβ,fshr,lhr,cyp19a1a,cyp17a1,20β-hsd和era基因的表达受到明显抑制。在自然恢复期间,经过EE2短期暴露处理的实验鱼的卵巢质量、GSI和后代存活率均逐渐恢复,卵巢的组织学损伤也随之恢复;在恢复21d后,上述实验鱼血浆E2质量浓度、肝脏vtg1基因表达和性腺轴中参与卵子发生的一系列基因的表达均恢复到正常水平。【结论】EE2短期暴露导致斑马鱼的卵巢损伤是可逆的,但恢复所需时间远长于暴露时间,体现出损伤恢复的时滞性。

关键词：乙炔基雌二醇斑马鱼短期暴露卵巢损伤恢复机制

乙炔基雌二醇短期暴露损伤斑马鱼雌性成鱼渗透压调节

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重庆师范大学学报（自然科学版） 2019年第4期36卷 44-48页

作者：刘智皓兰雪溶李英文重庆师范大学生命科学学院重庆市高校动物生物学重点实验室重庆市高校生物活性物质工程研究中心

【目的】考察乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE2)短期暴露对斑马鱼(Danio rerio)雌性成鱼渗透压调节的影响。【方法】用10和100ng·L^-1 EE2暴露性斑马鱼雌性成鱼7d,同时设立不含EE2的对照组,然后测量斑马鱼体质量、体长并计算肥... 详细信息

【目的】考察乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE2)短期暴露对斑马鱼(Danio rerio)雌性成鱼渗透压调节的影响。【方法】用10和100ng·L^-1 EE2暴露性斑马鱼雌性成鱼7d,同时设立不含EE2的对照组,然后测量斑马鱼体质量、体长并计算肥满度,测定全血量、血浆量和红细胞数量,观察鳃与肾的组织结构。【结果】与对照组相比,受100ng·L^-1 EE2短期暴露处理后的斑马鱼雌性成鱼出现眼球突出、体表充血、鳞片竖起等症状,肥满度明显增加全血量和血浆量明显升高,红细胞数量则明显下降。此外,经EE2短期暴露处理的斑马鱼雌性成鱼的鳃出现上皮细胞水肿、血管扩张等症状,而肾脏则出现小管上皮水肿、多发性出血等症状。【结论】EE2短期暴露导致斑马鱼雌性成鱼渗透压调节出现明显失衡,对该鱼具有强烈的渗透压毒性。

关键词：乙炔基雌二醇斑马鱼雌性短期暴露渗透压调节

液相萃取-反相高效液相色谱法联用测定植物油中的苯并芘

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中国油脂 2018年第10期43卷 112-114页

作者：彭小东王欢李红洲王雪蓉陈大鹏张建贵州省产品质量监督检验院贵阳550013 贵州工业职业技术学院贵阳550008

建立液相萃取-反相高效液相色谱法测定植物油中苯并芘的方法,以乙腈饱和的正己烷-正己烷饱和的乙腈作为萃取试剂,采用反相高效液相色谱仪对植物油中苯并芘的含量进行测定。所得线性方程Y=0.717 823X+0.159 747,相关系数r=0.999 99,线性... 详细信息

建立液相萃取-反相高效液相色谱法测定植物油中苯并芘的方法,以乙腈饱和的正己烷-正己烷饱和的乙腈作为萃取试剂,采用反相高效液相色谱仪对植物油中苯并芘的含量进行测定。所得线性方程Y=0.717 823X+0.159 747,相关系数r=0.999 99,线性范围在2～100 ng/m L,当乙腈饱和的正己烷与正己烷饱和的乙腈体积比为2∶5时(即4 m L乙腈饱和的正己烷,10 m L正己烷饱和的乙腈),其回收率在82.62%,精密度为1.1%,检出限为0.4μg/kg。该方法稳定、高效、检测成本低,适用于植物油中苯并芘的检测。

关键词：苯并芘反相高效液相色谱液相萃取

稳定期慢性阻塞性肺疾病患者营养状况和氧化应激能力与肺功能的关系

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中华结核和呼吸杂志 2017年第1期40卷 40-45页

作者：蒋雪莲钟萍黄成亮何芳范贤明陈雪融西南医科大学附属医院呼吸内二科泸州646000 四川大学华西医院呼吸与危重症医学科

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）稳定期患者营养状况和氧化应激能力与肺功能的关系。方法收集2014年6至8月泸州医学院附属医院（现更名为西南医科大学附属医院）、泸州市江南医院和泸州市龙马潭区红十字医院体检的慢阻肺稳定期患者... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）稳定期患者营养状况和氧化应激能力与肺功能的关系。方法收集2014年6至8月泸州医学院附属医院（现更名为西南医科大学附属医院）、泸州市江南医院和泸州市龙马潭区红十字医院体检的慢阻肺稳定期患者200例（慢阻肺组）和100名健康体检者（对照组）。其中慢阻肺组男119例，女81例；年龄42-87岁，平均年龄（68±8）岁；对照组男49名，女51名；年龄51-87岁，平均年龄（68±8）岁。检测血清蛋白质羰基（PC）、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、总抗氧化能力（TAC）的水平，同时对受试者进行肺功能测量，并采用微型营养评定（MNA）对受试者进行营养状况评估，慢阻肺组按MNA评分进一步分为营养良好亚组和营养不良（风险）亚组。不符合正态分布的定量资料采用中位数（四分位数间距）表示。结果慢阻肺组血清PC、丙二醛、8-OHdG的浓度分别为3．82（1．79，6．83）μg/L和3．89（2．77，5．40）μmol／L、359．18（259．25，587．85）μg／L，明显高于对照组2．29（1．08，3．26）μg/L、3．08（2．32，4．03）μmol／L、311．37（265．47，374．08）ng／L；而慢阻肺组血清TAC的水平为11．35（4．81，20．20）U／ml，显著低于对照组[18．81（15．21，23．19）U／ml，均P〈0．01]。上臂肌围、小腿周径、体重指数和MNA中人体测量、总体评价、膳食评估、主观评定及MNA总分，营养良好亚组均低于营养不良风险亚组（均P〈0．05）。营养不良（风险）亚组血清PC和TAC的水平分别为6．10（3．02，8．18）μg/L和13．33（6．07，23．96）U／ml，明显高于营养良好亚组[3．25（1．61，5．37）μg/L、9．99（4．41，16．77）U／ml]。营养不良（风险）亚组FEV1占预计值％为42．90（34．68，71．23），FEV1／FVC为46．96（38．96，60．63），均明显低于营养良好亚组[69．10（45．95，89．23），53．32（42．13，63．15），均P〈0．05]；上臂肌围、小腿周径、体重指数与MNA均呈正相关性（r值分别为0．498、0．587、0．781，均P〈0．001），与PC呈负相关性（r值分别为-0．209、-0．195、-0．231，均P〈0．05），与FEV．占预计值％呈正相关性（r值分别为0．223、0．274、0．350，均P〈0．05）；上臂肌围、体重指数与FEV1／FVC呈正相关性（r值分别为0．166、0．224，均P〈0．05）。慢阻肺患者血清PC的水平和FEV1占预计值％是MNA的影响因素，且FEV1占预计值％（β=0．367，P〈0．001）对MNA得分的影响较血清PC（β=-0．304，P〈0．001）的水平影响更大。结论机体蛋白质羰基化、气流受限可能与慢阻肺患者发生营养不良密切相关。

关键词：肺疾病慢性阻塞性营养不良氧化应激气流受限

改进的QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法快速测定地表水中双酚类物质

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色谱 2022年第1期40卷 57-65页

作者：谭学蓉赵斌陆建伟刘少颖苟薇妮杨容佐鹏广元市疾病预防控制中心四川广元628000 杭州市疾病预防控制中心浙江杭州310006

建立了同时测定地表水中8种双酚类物质(BPs)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。方法基于QuEChERS处理技术,选用乙酸乙酯为提取剂,从基质效应(ME)和萃取回收率(RE)两方面对过程效率(PE)进行优化,确定了50 mg N-丙基乙二胺(... 详细信息

建立了同时测定地表水中8种双酚类物质(BPs)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。方法基于QuEChERS处理技术,选用乙酸乙酯为提取剂,从基质效应(ME)和萃取回收率(RE)两方面对过程效率(PE)进行优化,确定了50 mg N-丙基乙二胺(PSA)和50 mg石墨化炭黑(GCB)混合吸附剂为净化剂。8种BPs使用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)进行分离,以甲醇和0.1 mmol/L碳酸氢铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾电离(ESI)源、负离子扫描及多反应监测(MRM)模式下进行质谱监测,基质匹配外标法定量。结果表明,8种BPs在8 min内完成色谱分离分析,在各自线性范围内线性关系良好,决定系数(R^(2))均大于0.9990,检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.1~2.3 ng/L和0.3~6.1 ng/L;以河水为样品基质,在不同添加水平下,8种BPs的平均加标回收率为78.8%~116.6%,相对标准偏差(RSD)为1.8%~9.0%。将该方法用于分析嘉陵江广元段及其支流中BPs的污染状况,结果显示,双酚A(BPA)检出率100%,含量为6.15~90.03 ng/L;双酚S(BPS)检出率91%,含量为未检出(nd)~4.63 ng/L。研究建立的方法实现了BPs在水中的快速富集与净化,具有简便、快速、灵敏度高和成本低廉等优势,可用于湖泊、河流等地表水中痕量BPs的快速检测。该方法的建立为我国地表水中BPs检测标准的制订和水质安全监控提供了参考。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱 QuEChERS 双酚类物质地表水