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不同镇痛方法对膝关节置换术后患者疼痛及功能恢复的影响

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海南医学 2021年第10期32卷 1297-1299页

作者：熊向华徐异彩吴良优河源市中医院麻醉科广东河源517000

目的探讨不同镇痛方法对膝关节置换术后患者疼痛及功能恢复的影响。方法选取2017年12月至2020年10月因膝关节骨性关节炎拟在河源市中医院行膝关节置换术的80例患者为研究对象,根据随机数表法分为单次股神经联合坐骨神经阻滞组(A组)和术... 详细信息

目的探讨不同镇痛方法对膝关节置换术后患者疼痛及功能恢复的影响。方法选取2017年12月至2020年10月因膝关节骨性关节炎拟在河源市中医院行膝关节置换术的80例患者为研究对象,根据随机数表法分为单次股神经联合坐骨神经阻滞组(A组)和术中关节腔周围鸡尾酒注射镇痛组(B组),每组40例。术后采用视觉模拟(VAS)评分法评估两组患者的疼痛情况,术后2周、1个月、3个月门诊随访,按Lysholm评分系统评价两组患者的膝关节功能恢复情况。结果A组患者术后4 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h静息状态下的VAS评分分别为(0.59±0.14)分、(1.06±0.15)分、(1.20±0.22)分、(2.31±0.38)分、(1.59±0.26)分、(1.44±0.30),明显低于B组的(0.88±0.17)分、(1.46±0.23)分、(1.94±0.33)分、(2.95±0.41)分、(2.52±0.35)分、(2.32±0.36)分,差异均有统计学意义(P0.05)。结论单次股神经联合坐骨神经阻滞能够更好地缓解膝关节置换术后疼痛,值得临床推广应用。

关键词：膝关节置换术后镇痛单次股神经联合坐骨神经阻滞关节腔周围鸡尾酒注射

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A型肉毒毒素鼠源中和单抗的制备与鉴定

军事医学 2018年第9期42卷 689-693页

作者：张秀娟李磊付楚溪汪建华熊向华张惟材哈尔滨商业大学药学院哈尔滨150076 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 沈阳师范大学沈阳110034

目的制备并鉴定A型肉毒毒素(Bo NT/A)鼠源中和单克隆抗体。方法利用Bo NT/AHc抗原免疫小鼠筛选得到的55株杂交瘤细胞培养上清,通过小鼠中和实验(MNA)选出中和活性较高单抗,进行抗体分型并扩增抗体可变区基因;利用BALB/c小鼠制备腹水,通... 详细信息

目的制备并鉴定A型肉毒毒素(Bo NT/A)鼠源中和单克隆抗体。方法利用Bo NT/AHc抗原免疫小鼠筛选得到的55株杂交瘤细胞培养上清,通过小鼠中和实验(MNA)选出中和活性较高单抗,进行抗体分型并扩增抗体可变区基因;利用BALB/c小鼠制备腹水,通过辛酸-硫酸铵以及Protein-G亲和层析纯化,并进行ELISA、SDS-PAGE、Western印迹、截短实验、BIAcore、中和活性及中和剂量分析。结果筛选得到1株中和活性较高的小鼠单抗BAS51,其轻链为κ、重链为Ig G1,获得轻、重链可变区序列;小鼠腹水效价为7. 29×105,纯化抗体纯度> 95%;BAS51与抗原Bo NT/AHC亲和力常数为1. 53×109L/mol,可与HCC片段结合,为线性表位,中和活性为100 LD50/mg,中和剂量为66. 7 LD50/mg。结论得到1株具有较强中和活性的抗Bo NT/A小鼠源单抗,为A型肉毒毒素中和抗体的研发奠定了基础。

关键词：肉毒杆菌毒素,A型抗体,单克隆中和试验杂交瘤

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甲基营养菌MP681基因组测序文库的构建

生物技术通讯 2010年第6期21卷 775-778页

作者：杨璐熊向华汪建华张惟材军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的:建立甲基营养菌MP681基因组文库,用于鸟枪法测序。方法:提取MP681基因组DNA,经超声随机片段化及T4 DNA聚合酶末端修平处理后,与经SmaⅠ酶切、小牛肠碱性磷酸酶(CIP)去磷酸化处理的pUC19载体连接,电击转化大肠杆菌DH5α感受态,并通... 详细信息

目的:建立甲基营养菌MP681基因组文库,用于鸟枪法测序。方法:提取MP681基因组DNA,经超声随机片段化及T4 DNA聚合酶末端修平处理后,与经SmaⅠ酶切、小牛肠碱性磷酸酶(CIP)去磷酸化处理的pUC19载体连接,电击转化大肠杆菌DH5α感受态,并通过末端双向测序对文库质量进行评价。结果:分别构建了2～4 kb和4～6 kb基因组文库,电泳结果显示插入片段长度与预期符合,文库库容均在10万以上。结论:构建了插入片段大小和库容符合要求的甲基营养菌MP681全基因组鸟枪法2～4 kb、4～6 kb测序文库。

关键词：甲基营养菌基因组测序鸟枪法文库构建吡咯喹啉醌

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F型肉毒毒素单克隆抗体的筛选及评价

药物生物技术 2022年第2期29卷 116-120页

作者：马骏池许永亮张惟材熊向华张秀娟军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 哈尔滨商业大学药学院黑龙江哈尔滨150076 辽宁大学生命科学学院辽宁沈阳1100361

研究以筛选得到中和抗体为目的,通过抗体制备的常用手段——杂交瘤技术进行,以F型肉毒毒素受体结合结构域FHc端作为单克隆抗体的筛选抗原。利用现有抗原FHc蛋白辅助佐剂对动物进行免疫,免疫结束后无菌环境中取动物脾细胞,与预先培养的SP... 详细信息

研究以筛选得到中和抗体为目的,通过抗体制备的常用手段——杂交瘤技术进行,以F型肉毒毒素受体结合结构域FHc端作为单克隆抗体的筛选抗原。利用现有抗原FHc蛋白辅助佐剂对动物进行免疫,免疫结束后无菌环境中取动物脾细胞,与预先培养的SP2/0细胞融合后HAT选择性培养基筛选得到阳性杂交瘤细胞株,大量培养后通过体内诱生法制备单抗,纯化后对所得鼠源抗体各指标进行评价,结果测得该单抗亚型为IgG1,κ型、经过Protein G柱纯化后抗体纯度可达到98%以上、与FHc端结构域亲和力可达到5.2×10^(-8)mol/L、轻重链基因调取后经Igblast tool分析得抗体可变区中轻链及重链CDR3区氨基酸序列为QHIRELTR、ARWLGDYAMDY,采用10倍半数致死量进行攻毒实验可得,该抗体中和效价在200 LD_(50)/mg,当抗体量达到50μg就可以实现完全保护。实验通过细胞融合的方式,在聚乙二醇的化学刺激下,筛得一株阳性杂交瘤细胞株,取细胞上清,以亲和力作为筛选指标,得到了一株针对F型肉毒毒素受体结合结构域FHc端的具有高亲和力和并同时具有中和效果的鼠源单克隆抗体,所得单抗为具有潜在临床应用价值的鼠源单克隆抗体,为后续治疗药物的开发即鼠源抗体人源化奠定了基础。

关键词： F型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤技术细胞融合抗体纯化中和抗体

烧结节能提效集成新技术在柳钢2~# 360m^2烧结机上的应用

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烧结球团 2018年第2期43卷 25-28,63页

作者：吴丹伟刘武杨刘华熊爱臣向小平谭世全广西柳州钢铁集团有限公司烧结厂广西柳州505001

介绍了柳钢2~# 360 m^2烧结机系统上进行的节能提效集成新技术,其主要有熟熔剂的精准配料技术、圆筒混合机不粘料和制粒效果提升技术、混匀料料温提升技术、铺底料粒级优化技术等。该集成技术应用后取得了较明显的效果,其有利于提高生... 详细信息

介绍了柳钢2~# 360 m^2烧结机系统上进行的节能提效集成新技术,其主要有熟熔剂的精准配料技术、圆筒混合机不粘料和制粒效果提升技术、混匀料料温提升技术、铺底料粒级优化技术等。该集成技术应用后取得了较明显的效果,其有利于提高生产效率,改善产品质量,降低能耗。对国内同类烧结生产线的节能提效具有一定的借鉴意义。

关键词：烧结节能提效精准配料圆筒混合机混匀料料温铺底料优化

节杆菌乙内酰脲水解酶与GST蛋白融合表达及纯化

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生物技术通讯 2008年第6期19卷 852-854页

作者：李洪贞张惟材汪建华熊向华军事医学科学院生物工程研究所北京100071 沈阳药科大学辽宁沈阳110016

目的:构建节杆菌BT801乙内酰脲水解酶(HyuH)与GST融合表达载体,利用大肠杆菌表达GST-HyuH融合蛋白并纯化。方法:将节杆菌HyuH基因插入载体pGEX-KG构建重组表达质粒pGEX-KG-HyuH;SDS-PAGE检查GST-HyuH的表达;利用薄层层析检查融合蛋白的H... 详细信息

目的:构建节杆菌BT801乙内酰脲水解酶(HyuH)与GST融合表达载体,利用大肠杆菌表达GST-HyuH融合蛋白并纯化。方法:将节杆菌HyuH基因插入载体pGEX-KG构建重组表达质粒pGEX-KG-HyuH;SDS-PAGE检查GST-HyuH的表达;利用薄层层析检查融合蛋白的HyuH活性;最后利用谷胱甘肽-Sepharose 4B树脂纯化融合蛋白GST-HyuH。结果:SDS-PAGE表明重组菌在相对分子质量77×103处有特异的蛋白表达条带,且重组菌可以水解5-苯基乙内酰脲,纯化得到了有HyuH活性的纯度较高的GST-HyuH融合蛋白。结论:得到了有HyuH活性的GST-HyuH,为进一步研究HyuH的修饰奠定了基础。

关键词：乙内酰脲水解酶融合表达纯化

基于Methylovorus sp.J1-1基因组尺度代谢网络优化吡咯喹啉醌合成

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生物技术通报 2022年第2期38卷 173-183页

作者：寇航王艳梅李彤薄明井张惟材熊向华黎明工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院天津300457 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071

通过构建Methylovorus sp.J1-1基因组尺度代谢网络模型(genome scale of metabolic network model,GSMM),发掘能够提升吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)产量的发酵策略和相关靶基因。基于其注释的基因组和生化信息,构建J1-1的GSMM。再通过COBRApy预测可能使PQQ产量提高的氨基酸和潜在的靶基因并进行验证。构建了Methylovorus sp.J1-1的GSMM模型iKH584,共有584个基因,779个生化反应,121个交换反应与765个代谢产物,且可以用于后续模拟。根据iKH584模拟,外源添加谷氨酸、谷氨酰胺和脯氨酸、过表达glyA与hps1以及敲除hps2基因,均具有促进PQQ合成效果。结果表明:添加谷氨酸与脯氨酸时,PQQ的产量分别提高了10.4%与22.9%;过表达基因glyA与hps1,PQQ产量分别提高20.6%与14.6%;敲除基因hps2,PQQ产量最高可达140.84 mg/L,提高了8.0%,这与模拟结果基本一致,表明构建的模型基本正确。最后,在5 L发酵罐进行J1-1△hps2的分批补料发酵,PQQ的产量为812.64 mg/L,比亲本菌株提高了11.1%。建立的模型可以用来指导J1-1的发酵和菌株改造,提高PQQ产量。

关键词： Methylovorus sp.J1-1 基因组尺度代谢网络模型吡咯喹啉醌氨基酸靶基因预测

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A型肉毒毒素中和抗体3D12的表达

生物技术通讯 2016年第3期27卷 340-343页

作者：赵巧林汪建华张惟材熊向华军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的:表达A型肉毒毒素(Bo NT/A)中和抗体3D12。方法:按哺乳动物偏好密码子设计合成3D12轻链(L)和重链(H)编码序列,分别连入L293、H293表达载体,共转染至HEK293细胞进行瞬时表达并纯化;通过ELISA检测3D12效价、3D12与Bo NT/A受体的竞争... 详细信息

目的:表达A型肉毒毒素(Bo NT/A)中和抗体3D12。方法:按哺乳动物偏好密码子设计合成3D12轻链(L)和重链(H)编码序列,分别连入L293、H293表达载体,共转染至HEK293细胞进行瞬时表达并纯化;通过ELISA检测3D12效价、3D12与Bo NT/A受体的竞争结合作用及与Bo NT/AHc的亲和力常数,通过Western印迹鉴定3D12的特异性。结果:得到轻链(L293-L)及重链(H293-H)表达载体;瞬时表达并纯化得到抗体3D12;ELISA结果显示3D12效价为1.22×106,3D12与Bo NT/A受体FGFR3、SV2C之间不存在竞争结合作用,3D12的亲和力常数K=10.6×108L/mol;Western印迹显示3D12与Bo NT/AHc能够特异性结合。结论:得到A型肉毒毒素中和抗体3D12,为肉毒毒素中和抗体的开发及阐明中和抗体的表位奠定了基础。

关键词： A型肉毒毒素中和抗体 3D12 HEK293细胞瞬时表达

Seaweed glue as a novel polymer depressant for the selective separation of chalcopyrite and galena

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International Journal of Minerals,Metallurgy and Materials 2019年第12期26卷 1495-1503页

作者： xiong Chen Guo-hua Gu Zhi-xiang Chen School of Minerals Processing and Bioengineering Central South University

The use of seaweed glue(SEG)as a novel polymer depressant for the separation of chalcopyrite from galena with butyl xanthate(BX)as a collector was studied through microflotation *** angle,adsorption,dynamic potential,and infrared spectral analyses were conducted to clarify the mechanism underlying the action of SEG on *** results of microflotation experiments indicated that chalcopyrite could be selectively separated from galena by using a SEG depressant concentration of 15 mg·L^-1,BX concentration of 10 mg·L^-1,and methyl isobutyl carbinol concentration of 8.5 mg·L^-1 at pH 8.0.A Cu concentrate with a grading of 23.68wt% was obtained at a recovery rate of 81.52% from mixed minerals with 8.29wt% Cu *** angle analysis showed that the effect of SEG on the wettability of galena was stronger than that on the wettability of ***,zeta potential,and FT-IR spectral analyses revealed that SEG and BX were coadsorbed on the surfaces of *** depressed galena by covering xanthate ions in the functional groups of-COO and mainly underwent weak physisorption on *** mechanisms account for the ability of SEG to depress galena effectively while enabling chalcopyrite flotation.

关键词： seaweed glue chalcopyrite galena flotation separation