A型肉毒毒素鼠源中和单抗的制备与鉴定

作     者：张秀娟 李磊 付楚溪 汪建华 熊向华 张惟材 ZHANG Xiu-juan;LI Lei;FU Chu-xi;WANG Jian-hua;XIONG Xiang-hua;ZHANG Wei-cai

作者机构：哈尔滨商业大学药学院哈尔滨150076 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 沈阳师范大学沈阳110034 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2018年第42卷第9期

页      面：689-693页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家科技重大专项资助项目(2018X09J18105-003 

主　　题：肉毒杆菌毒素,A型 抗体,单克隆 中和试验 杂交瘤 

摘      要：目的制备并鉴定A型肉毒毒素(Bo NT/A)鼠源中和单克隆抗体。方法利用Bo NT/AHc抗原免疫小鼠筛选得到的55株杂交瘤细胞培养上清,通过小鼠中和实验(MNA)选出中和活性较高单抗,进行抗体分型并扩增抗体可变区基因;利用BALB/c小鼠制备腹水,通过辛酸-硫酸铵以及Protein-G亲和层析纯化,并进行ELISA、SDS-PAGE、Western印迹、截短实验、BIAcore、中和活性及中和剂量分析。结果筛选得到1株中和活性较高的小鼠单抗BAS51,其轻链为κ、重链为Ig G1,获得轻、重链可变区序列;小鼠腹水效价为7. 29×105,纯化抗体纯度 95%;BAS51与抗原Bo NT/AHC亲和力常数为1. 53×109L/mol,可与HCC片段结合,为线性表位,中和活性为100 LD50/mg,中和剂量为66. 7 LD50/mg。结论得到1株具有较强中和活性的抗Bo NT/A小鼠源单抗,为A型肉毒毒素中和抗体的研发奠定了基础。