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Effects of adeno-associated virus (AAV) of transforming growth factors β_1 and β_3 (TGFβ_(1,3)) on promoting synthesis of glycosaminoglycan and collagen type II of dedifferentiated nucleus pulposus (NP) cells

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Science China(Life Sciences) 2007年第5期50卷 605-610页

作者： sai jiaming hu yougu wang dechun Orthopaedic Laboratory The Orthopaedics and Traumatology Hospital Qingdao 266003 China Department of Orthopedic Surgery Affiliated Hospital of Medical College Qingdao University Qingdao 266003 China Department of Orthopedic Surgery Affiliated Hospital of Medical College Qingdao University Qingdao 266003 China

The effects of AAV-TGF beta_1 and AAV-TGF beta_3 on promoting synthesis ofglycosaminoglycan and collagen type II of dedifferentiated rabbit lumbar disc NP cells were studiedin this *** rabbit lumbar disc NP cells were isolated and *** earlier and laterdedifferentiated NP cells were established by *** AAV transfection efficiency todedifferentiated NP cells was analyzed with AAV-EGFP in *** dedifferentiated NP cells weretransfected by AAV-TGFp,or AAV-TGF beta_3,their biological effects on promoting synthesis ofglycosaminoglycan or collagen type II were detected and compared by the methods of 35S incorporationor *** experimental results showed that AAV could transfect efficiently the earlierdedifferentiated NP cells,but its transfection rate was shown to be at a low level to the laterdedifferentiated NP *** AAV-TGF beta_1,and AAV-TGF beta_3 could promote the earlierdedifferentiated NP cells to synthesize glycosaminoglycan and collagen type II,and the effect ofAAV-TGFp,was better than that of AAV-TGF beta_*** the later dedifferentiated NP cells,the AAV-TGFbeta_3 could promote their synthesis,but AAV-TGFp,could slightly inhibit ***,AAV-TGFp,and AAV-TGF beta_3 could be used for the earlier dedifferentiated NPcells,and the TGF beta_3 could be used as the objective gene for the later dedifferentiated NPcells.

关键词： adeno-associated virus (AAV) transforming growth factor-beta_1 (TGF beta_1) transforming growth factor-beta_3 (TGFp3) glycosaminoglycan collagen type II gene transfection

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AAV-TGFβ3的构建及其与AV-TGFβ1表达系统对反分化髓核细胞蛋白多糖合成的影响

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中国脊柱脊髓杂志 2006年第12期16卷 946-950,I0024页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所山东省青岛市266003

目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3... 详细信息

目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1分别转染反分化早、晚期髓核细胞,采用免疫印迹法检测TGFβ3和TGFβ1蛋白的表达,并通过Antonopulos法分别检测AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1对蛋白多糖合成的生物学效应。结果:AAV-TGFβ3转染可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ3蛋白的表达,并促进其蛋白多糖的合成。转染后第12天,蛋白多糖含量达到峰值,分别为0.399±0.029和0.152±0.011,此后蛋白多糖含量缓慢降低;于转染后第2个月,蛋白多糖含量稳定在较高水平,分别为0.309±0.021和0.115±0.009。AV-TGFβ1转染亦可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ1蛋白的表达,但其仅促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,转染后第10天蛋白多糖含量达到峰值(0.413±0.041),此后蛋白多糖含量快速降低,转染后第2个月时蛋白多糖含量降至较低水平(0.198±0.013);对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论:AAV-TGFβ3可稳定地促进反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的合成;AV-TGFβ1仅一过性地促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,而且抑制反分化晚期髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：腺相关病毒腺病毒转化生长因子β3 转化生长因子β1 髓核蛋白多糖

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AAV-TGFβ_1的构建及其与AV-TGFβ_1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较

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中国骨与关节损伤杂志 2008年第2期23卷 116-118页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所山东省青岛市266021

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI... 详细信息

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点。将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定。AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达。利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率。AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成。结果测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致。经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建。AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞。AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成。结论AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：腺相关病毒腺病毒转化生长因子β1 髓核蛋白多糖

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椎间盘髓核细胞组织块法原代培养

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脊柱外科杂志 2006年第5期4卷 315-316,320页

作者：赛佳明胡有谷王德春青岛市骨伤医院骨科实验室山东266021 青岛大学医学院附属医院骨科山东省创伤骨科研究所

椎间盘退变为引起颈肩痛、腰腿痛的主要原因，其确切的发生机理迄今仍不十分清楚，所以对椎间盘髓核细胞的研究越来越深入。椎间盘髓核细胞原代培养在研究髓核细胞生物学、转基因治疗以及组织工程等方面日渐成为一种不可缺少的技术。传... 详细信息

椎间盘退变为引起颈肩痛、腰腿痛的主要原因，其确切的发生机理迄今仍不十分清楚，所以对椎间盘髓核细胞的研究越来越深入。椎间盘髓核细胞原代培养在研究髓核细胞生物学、转基因治疗以及组织工程等方面日渐成为一种不可缺少的技术。传统的酶消化法髓核细胞原代培养存在操作烦琐、污染率高以及胰蛋白酶和胶原酶的应用导致细胞活性降低等缺点。因此，有必要对其进行改进。

关键词：椎间盘细胞培养培养基比色法蛋白聚糖类

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腺相关病毒载体介导的TIMP1对人退变腰椎间盘髓核细胞蛋白多糖的影响

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中国脊柱脊髓杂志 2008年第9期18卷 680-683,I0003页

作者：魏见伟王德春胡有谷青岛大学医学院附属医院脊柱外科青岛市266003

目的:探讨腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体介导的基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)对人退变腰椎间盘髓核细胞的生物学效应。方法:单层培养并鉴定人退变腰椎间盘髓核细胞。采用... 详细信息

目的:探讨腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体介导的基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)对人退变腰椎间盘髓核细胞的生物学效应。方法:单层培养并鉴定人退变腰椎间盘髓核细胞。采用绿色荧光蛋白标记的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)检测其对髓核细胞的转染效率。应用构建的rAAV2-TIMP1转染髓核细胞,通过细胞形态学观察、35S标记氨基酸整合法检测rAAV2-TIMP1对人退变腰椎间盘髓核细胞基质合成的影响。在35S检测中,以未转染的退变髓核细胞做为正常对照组。结果:光镜下观察所培养的细胞类型以成纤维样细胞为主,Ⅱ型胶原免疫组化和番红O染色鉴定培养细胞为髓核细胞。AAV转染人退变腰椎间盘髓核细胞的转染效率为12%。35S标记整合法检测rAAV2-TIMP1转染组每分钟计数值为341.43±42.85,正常对照组为224.20±29.26,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TIMP1能够促进退变椎间盘髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词：基质金属蛋白酶组织抑制剂1 蛋白多糖腺相关病毒椎间盘

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