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过表达GmNHX1基因提高大豆根系的耐盐性

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大豆科学 2011年第6期30卷 889-894页

作者：王敏娟侯文胜王庆钰林汉明韩天富中国农业科学院作物科学研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程北京100081 吉林大学植物科学学院吉林长春130062 香港中文大学生命科学院中国香港

Na+/H+反向转运蛋白可调控细胞质pH值、钠离子浓度和细胞体积,从而减轻盐胁迫对植物的伤害。利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导法,向大豆根系导入由CaMV35s启动子调控的Na+/H+反向转运蛋白编码基因GmNHX1的cDNA序列,通过该... 详细信息

Na+/H+反向转运蛋白可调控细胞质pH值、钠离子浓度和细胞体积,从而减轻盐胁迫对植物的伤害。利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导法,向大豆根系导入由CaMV35s启动子调控的Na+/H+反向转运蛋白编码基因GmNHX1的cDNA序列,通过该基因的过量表达,提高大豆的耐盐性。通过潮霉素筛选、gus染色及RT-PCR检测,确认获得了转GmNHX1基因的大豆发状根。对转基因发状根耐盐性分析表明:在100、150和200 mmol.L-1的NaCl胁迫下,置于Ms固体培养基中的转基因离体发状根的长度和重量增加值均显著大于对照。带有转基因发状根的子叶及复合体植株在盐胁迫条件下也具有较强的生存能力。试验证明,过表达GmNHX1基因能够显著提高转基因发状根的耐盐性,该结果为利用GmNHX1基因进行大豆耐盐性的改良提供了依据。

关键词：大豆发根农杆菌 GmNHX1 根系耐盐性

大豆F-box基因Glyma08g11030启动子克隆及植物表达载体构建

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大豆科学 2018年第2期37卷 179-184页

作者：张承琪王怡夏成林于月华倪志勇新疆农业大学农学院新疆乌鲁木齐830052

本研究以大豆Williams 82的基因组DNA为原始材料,根据前期预测的Glyma08g11030启动子序列用DNAMAN8.0设计引物,通过常规PCR方法克隆获得了Glyma08g11030基因上游长度为3 000 bp的启动子序列。在PlantCARE植物启动子区域在线预测网站上查... 详细信息

本研究以大豆Williams 82的基因组DNA为原始材料,根据前期预测的Glyma08g11030启动子序列用DNAMAN8.0设计引物,通过常规PCR方法克隆获得了Glyma08g11030基因上游长度为3 000 bp的启动子序列。在PlantCARE植物启动子区域在线预测网站上查询,预测的结果显示Glyma08g11030启动子序列里含有数量众多、功能各异的顺式作用元件。其中以TATA-box和CAAT-box这两个基本的顺式作用元件最多,此外还有许多与应答相关的顺式作用元件,如干旱、热、光、激素等。根据这些顺式作用元件在Glyma08g11030启动子序列中的位置对启动子序列进行截短并分别设计引物,采用PCR方法成功截出了3段长度分别为2 492,1 185和342bp的启动子序列,将3段序列替换pCAMBIA3301载体双酶切出的CaMV35s启动子序列,并构建了3个启动子序列驱动gus植物融合表达载体,从而得到含不同顺式作用元件的启动子序列。研究结果将为以后分析Glyma08g11030启动子的功能和作用机理提供前期准备。

关键词：大豆启动子克隆植物表达载体

超声波辅助农杆菌介导八棱海棠转rolC基因

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果树学报 2006年第5期23卷 659-663页

作者：丛郁王三红王红霞姚泉洪章镇南京农业大学园艺学院南京210095 上海市农业遗传重点实验室上海市农业科学院生物技术研究中心上海201106

应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D... 详细信息

应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D600nm为0．6且含有75 mg／L As的农杆菌悬浮液中侵染2 min后,用功率为100 W的超声波处理30 s,再浸泡2．5 min,然后放到再生培养基上共培养3 d,能获得最佳的gus基因瞬间表达率。最佳处理条件下转化683枚八棱海棠叶片,共得到138个抗性愈伤组织和15株抗性苗,转化率为2．2％。gus染色、PCR及southern blotting检测结果显示,有12个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。

关键词：八棱海棠超声波辅助农杆菌转化 rolC基因

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虎杖PcMYB1启动子的克隆及其活性分析

生物技术通报 2021年第5期37卷 48-55页

作者：林艳丽覃建兵伍翔王岩岩潘佑找柳忠玉长江大学生命科学学院荆州434025 长江大学园艺园林学院荆州434025

获得药用植物虎杖(Polygonum cuspidatum)PcMYB1启动子,并分析其活性,为进一步研究虎杖转录因子PcMYB1的功能奠定基础。通过hiTAIL-PCR方法,从虎杖叶片基因组DNA中克隆PcMYB1启动子并进行生物信息学分析。分别构建由全长启动子或5'端缺... 详细信息

获得药用植物虎杖(Polygonum cuspidatum)PcMYB1启动子,并分析其活性,为进一步研究虎杖转录因子PcMYB1的功能奠定基础。通过hiTAIL-PCR方法,从虎杖叶片基因组DNA中克隆PcMYB1启动子并进行生物信息学分析。分别构建由全长启动子或5'端缺失启动子驱动gus的重组表达载体P1∷gus、P2∷gus、P3∷gus和P4∷gus。将重组表达载体转入发根农杆菌中进行虎杖毛状根转化试验,以转化的阳性毛状根为材料,通过gus组织化学染色分析启动子的活性。成功获得2 884 bp的PcMYB1启动子序列(GenBank登录号MT811057)。该启动子具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,还含有茉莉酸甲酯和低温响应元件以及光响应、厌氧应答等相关的顺式调控元件。重组表达载体经PCR鉴定,证实已构建成功。转化的虎杖毛状根染色之后显蓝色,但同对照相比颜色较浅,说明全长启动子或5'端缺失启动子都具有驱动gus的活性,但启动活性都比CaMV35s启动子的启动活性弱。PcMYB1的启动子被成功克隆,其具有驱动下游gus表达的活性。

关键词：虎杖 PcMYB1 启动子序列分析 gus活性

虾青素合成关键酶基因bkt和CrtR-B双价植物表达载体的构建及对花生的遗传转化

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河南农业科学 2007年第12期36卷 35-39页

作者：徐静杨庆利檀琮萍侯艳华禹山林秦松淮海工学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室江苏连云港222005 山东省花生研究所山东青岛266100 中国科学院海洋研究所山东青岛266071

虾青素是一种具有极强抗氧化活性的类胡萝卜素,具有广泛的应用价值。β-胡萝卜素酮化酶(BKT)和β-胡萝卜素羟化酶(CrtR-B)是虾青素的生物合成途径中的两个关键酶。采用LaTaqDNA聚合酶用PCR的方法分别从pET-28a(+)-bkt,pET-28a(+)-CrtR... 详细信息

虾青素是一种具有极强抗氧化活性的类胡萝卜素,具有广泛的应用价值。β-胡萝卜素酮化酶(BKT)和β-胡萝卜素羟化酶(CrtR-B)是虾青素的生物合成途径中的两个关键酶。采用LaTaqDNA聚合酶用PCR的方法分别从pET-28a(+)-bkt,pET-28a(+)-CrtR中扩增得到bkt和CrtR-B基因,用bkt基因替换pBI221中的gus基因形成含有CaMV 35s启动子和NOs终止子的bkt基因表达盒,然后插入植物表达载体pCAMBIA1301的多克隆位点,再用CrtR-B基因替换pCAMBIA1301中的另一个gus基因,形成CrtR-B基因表达盒,最终获得带有抗性基因的双价植物表达载体pCAMBIA1301-bkt-CrtR。通过农杆菌EHA105介导将其转入花生(花育23),获得了经卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,花生基因组中含有这两个基因。

关键词：虾青素 bkt基因 CrtRB基因载体构建花生

甜菜BvM14-MADs box基因启动子的组织特异性表达

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黑龙江大学自然科学学报 2011年第6期28卷 848-852页

作者：赵晨曦李沛锦吴川王宇光李海英黑龙江大学生命科学学院黑龙江省普通高等学校分子生物学重点实验室哈尔滨150080 黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心哈尔滨150500

MADs-box基因在植物的花器官和各种营养器官中均有不同形式的时空表达模式,行使不同功能。实验室前期获得了甜菜M14品系BvM14-MADs box基因的特异启动子Pbm,并对其进行了瞬时表达。本试验利用含有重组载体pBI121-Pbm-gus的农杆菌转化烟... 详细信息

MADs-box基因在植物的花器官和各种营养器官中均有不同形式的时空表达模式,行使不同功能。实验室前期获得了甜菜M14品系BvM14-MADs box基因的特异启动子Pbm,并对其进行了瞬时表达。本试验利用含有重组载体pBI121-Pbm-gus的农杆菌转化烟草,对报告基因gus在转基因烟草各组织表达特性进行研究,探讨BvM14-MADs box基因特异启动子Pbm是否具有组织特异性表达活性。试验结果表明,gus基因只在花的萼片中有表达,在根、茎、叶中均无表达,可见此启动子Pbm在花组织的萼片中具有表达特异性。

关键词： BvM14-MADs box基因启动子遗传转化组织特异性表达

花生磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆及反义表达载体的构建

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山东农业大学学报（自然科学版） 2010年第1期41卷 1-5页

作者：潘昱名刘风珍万勇善郑成超山东农业大学农学院作物生物学国家重点实验室山东泰安271018

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)是控制植物籽粒中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。本研究利用RT-PCR技术,克隆PEPCase基因的cDNA片段,并将克隆的PEPCase基因片段反向连接替代植物表达载体PB I121的gus基因。从花生栽培品种荔蒲大花生中... 详细信息

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)是控制植物籽粒中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。本研究利用RT-PCR技术,克隆PEPCase基因的cDNA片段,并将克隆的PEPCase基因片段反向连接替代植物表达载体PB I121的gus基因。从花生栽培品种荔蒲大花生中克隆获得编码PEPCase基因的cDNA片段(886 bp),测序结果显示其核苷酸序列与已报道的花生(EU391629)、棉花(AY008939)、大豆(D10717)、拟南芥(AY210895)、豌豆(D64037)PEPCase基因对应部分的同源性分别为99.77%、84.37%、81.54%、81.25%、78.71%。构建的反义表达载体中PEPCase基因由35s启动子所控制,将构建的反义表达载体命名为pBGPEP。为通过反义抑制技术提高花生含油量提供了基因及表达载体。

关键词：花生 PEP羧化酶 RT-PCR 反义表达载体

大豆gma-miR160o启动子的克隆及植物表达载体构建

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华北农学报 2015年第1期30卷 19-23页

作者：倪志勇于月华刘超任燕萍陈全家曲延英新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室新疆乌鲁木齐830052

为了研究miRNA表达的调控机制,以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-miR160o启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆gma-miR160o上游一段长度为1 910 bp的启动子序列。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi... 详细信息

为了研究miRNA表达的调控机制,以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-miR160o启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆gma-miR160o上游一段长度为1 910 bp的启动子序列。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,gma-miR160o启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。将gma-miR160o启动子替代p BI121载体中的Ca MV35s启动子,构建了与gus融合的启动子表达载体。

关键词：大豆 gma-miR160o 启动子植物表达载体

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大豆GmPLP1启动子的克隆及功能分析

大豆科学 2014年第3期33卷 311-314页

作者：李永光张宇航罗秋兰谷翰卿李文滨东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室东北农业大学农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030

本研究利用染色体步移法从大豆栽培品种东农L13基因组中分离得到了GmPLP1基因1.5 kb的启动子片段,利用PLACE和PlantCARE在线启动子预测工具发现了107个调控元件。将该片段定向替换载体pBI121的CaMV35s组成型启动子,构建表达载体pBI121-p... 详细信息

本研究利用染色体步移法从大豆栽培品种东农L13基因组中分离得到了GmPLP1基因1.5 kb的启动子片段,利用PLACE和PlantCARE在线启动子预测工具发现了107个调控元件。将该片段定向替换载体pBI121的CaMV35s组成型启动子,构建表达载体pBI121-pGmPLP1,驱动下游报告基因gus基因表达,并通过组织化学染色和gus定量分析对预测结果进行验证,结果显示GmPLP1受黑暗、蓝光、低温、GA3和ABA诱导表达。

关键词： GmPLP1启动子 gus基因组织化学染色顺式调控元件