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应用全基因组表达谱芯片研究特比奈芬诱导白念珠菌耐药前后基因的差异性表达

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中国感染与化疗杂志 2011年第3期11卷 227-232页

作者：曾跃斌钱元恕辜红妮汕头大学医学院第二附属医院皮肤性病科广东汕头515041 汕头大学医学院药理教研室

目的应用白念珠菌全基因组表达谱芯片比较特比萘芬体外诱导白念珠菌产生耐药性前后基因表达谱的差异,以了解白念珠菌对特比萘芬产生耐药性的相关基因。方法白念珠菌ATCC90028菌株在浓度倍增的特比萘芬诱导下形成耐药的白念珠菌ATCC9002... 详细信息

目的应用白念珠菌全基因组表达谱芯片比较特比萘芬体外诱导白念珠菌产生耐药性前后基因表达谱的差异,以了解白念珠菌对特比萘芬产生耐药性的相关基因。方法白念珠菌ATCC90028菌株在浓度倍增的特比萘芬诱导下形成耐药的白念珠菌ATCC90028-R株,应用白念珠菌全基因组表达谱芯片比较白念珠菌ATCC90028和ATCC90028-R株全基因组表达谱的差异。结果基因芯片共筛选出109个差异表达基因,与白念珠菌ATCC90028株比较,在ATCC90028-R株中有46个基因表达上调,有63个基因表达下调。结论白念珠菌对特比萘芬耐药性的产生可能与其分子转运和解毒相关基因表达的上调,以及有关蛋白质合成、能量生成、糖转运蛋白、细胞应激反应、金属离子平衡基因表达的下调密切相关。

关键词：基因芯片特比奈芬耐药性白念珠菌

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山苍子油对白念珠菌全基因组表达谱的影响

中国感染与化疗杂志 2014年第4期14卷 295-300页

作者：曾跃斌钱元恕侯冰辜红妮汕头大学医学院第二附属医院皮肤病学教研室广东汕头515041

目的应用白念珠菌全基因组表达谱芯片比较山苍子油处理前后白念珠菌基因的差异性表达,分析山苍子油对白念珠菌整个基因表达谱的影响。方法用山苍子油处理白念珠菌ATCC90028株90 min,将处理后的菌株命名为白念珠菌ATCC90028-L,分别抽提... 详细信息

目的应用白念珠菌全基因组表达谱芯片比较山苍子油处理前后白念珠菌基因的差异性表达,分析山苍子油对白念珠菌整个基因表达谱的影响。方法用山苍子油处理白念珠菌ATCC90028株90 min,将处理后的菌株命名为白念珠菌ATCC90028-L,分别抽提细胞总RNA,经杂交、洗涤后,通过扫描分析白念珠菌ATCC90028株和ATCC90028-L株全基因组表达谱的差异。结果基因芯片共筛选出491个差异表达基因,与白念珠菌ATCC90028株比较,在ATCC90028-L株中有216个基因表达上调,有275个基因表达下调,差异表达的基因数量约占总基因数量的11%(491/4 634),差异表达基因主要包括白念珠菌麦角固醇生物合成通路中关键靶酶编码基因(ERGs)、应激反应相关基因、DNA复制与损伤修复相关基因、跨膜分子转运相关基因、能量代谢酶类相关基因等。结论山苍子油可使白念珠菌基因组中约11%基因产生差异性表达,影响较为显著,我们推测山苍子油与唑类抗真菌药物的作用机制相似,均通过对白念珠菌麦角固醇生物合成通路中关键靶酶的影响而起作用,基因芯片筛选出的其他差异表达基因也可能与山苍子油的抗真菌作用机制有关,值得进一步研究。

关键词：山苍子油白念珠菌基因芯片

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小檗碱对MRSA自溶酶系统作用的研究

中国感染与化疗杂志 2012年第4期12卷 310-312页

作者：周树勤姚芬黄源春钱元恕彭青南方医科大学珠江医院麻醉科汕头大学医学院药理学教研室汕头大学医学院附属第一医院检验科

目的探讨小檗碱与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用机制。方法采用蛋白印迹试验(Western-blot)测定小檗碱对MRSA的青霉素结合蛋白(PBP)2a表达的影响,TritonX-100诱导的自溶试验及自溶酶谱分析测定小檗碱对MRSA... 详细信息

目的探讨小檗碱与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用机制。方法采用蛋白印迹试验(Western-blot)测定小檗碱对MRSA的青霉素结合蛋白(PBP)2a表达的影响,TritonX-100诱导的自溶试验及自溶酶谱分析测定小檗碱对MRSA自溶酶系统的影响。结果小檗碱对MRSA所产PBP2a的表达无影响,但能显著诱导MRSA的自溶酶系统。结论小檗碱对自溶酶系统的激活作用可能是小檗碱增强β内酰胺类抗生素对MRSA抗菌作用的机制之一。本研究为今后小檗碱用于临床抗MRSA治疗提供了科学的理论基础。

关键词：小檗碱 β内酰胺类抗生素协同作用自溶酶

Ecg/Egcg与β内酰胺类抗生素对MRSA的协同抗菌机制研究

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中国感染与化疗杂志 2010年第2期10卷 123-126页

作者：华德兴彭青黄源春姚芬钱元恕汕头大学医学院药理教研室 515041 汕头大学医学院附属粤北人民医院检验科汕头大学医学院第一附属医院检验科

目的测定表儿茶素没食子酸酯(Ecg)/表没食子儿茶素没食子酸酯(Egcg)与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用,并探讨其作用机制。方法以微量稀释法测定Ecg、Egcg和β内酰胺类抗生素的体外协同抗MRSA作用;以RT-PCR技... 详细信息

目的测定表儿茶素没食子酸酯(Ecg)/表没食子儿茶素没食子酸酯(Egcg)与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用,并探讨其作用机制。方法以微量稀释法测定Ecg、Egcg和β内酰胺类抗生素的体外协同抗MRSA作用;以RT-PCR技术检测Ecg和Egcg对自溶酶基因lytM和lgrA表达的影响;以蛋白免疫印迹法测定Egcg对MRSA的PBP2a蛋白表达的影响;测定Ecg和Egcg对β内酰胺酶的抑制情况,并与他唑巴坦的抑酶作用进行比较。结果50mg/L的Ecg/Egcg均能增强苯唑西林、头孢拉啶、头孢呋辛和美罗培南对MRSA的抗菌作用,并以与美罗培南的协同作用最强;且Ecg与β内酰胺类抗生素的协同效果比Egcg明显。随着Ecg和Egcg浓度的增高,MRSA的lytM、lgrA基因表达上调,同时Egcg可使MRSA-2菌PBP2a蛋白表达下调。浓度为256mg/L的他唑巴坦可完全抑制金葡菌的β内酰胺酶,而Egcg/Ecg对金葡菌β内酰胺酶的抑制作用很微弱。结论Ecg/Egcg联合β内酰胺类抗生素对MRSA的协同作用是由于Ecg/Egcg在抑制PBP2a的表达下调的同时使自溶酶lytM和lgrA基因的表达上调,导致自溶酶分泌增多,促使对细菌黏肽水解增加,从而协同β内酰胺类抗生素抑制细菌细胞壁的合成。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表儿茶素没食子酸酯表没食子儿茶素没食子酸酯抗菌机制

多重耐药奇异变形杆菌外膜通透性改变的初步研究

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中华传染病杂志 2000年第3期18卷 155-158页

作者：贾蓓钱元恕重庆医科大学附属第一医院传染科 400016

目的　研究奇异变形杆菌诱导耐药后外膜通透性改变与其耐药性的关系。方法　用含头孢噻肟的梯度平板多步诱导 2株奇异变形杆菌达稳定耐药 ;以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)电泳耐药前后细菌外膜蛋白 ;以高效液相色谱... 详细信息

目的　研究奇异变形杆菌诱导耐药后外膜通透性改变与其耐药性的关系。方法　用含头孢噻肟的梯度平板多步诱导 2株奇异变形杆菌达稳定耐药 ;以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)电泳耐药前后细菌外膜蛋白 ;以高效液相色谱法 (HPLC)测定细菌对环丙沙星的摄取量 ;以扫描、透射电镜观察形态学变化。结果　所诱导的细菌对氟喹诺酮类、头孢类、青霉素类抗生素多重耐药 ;耐药株外膜蛋白相对分子质量 40 0 0 0含量下降 ,370 0 0增加 ;耐药株与敏感株对环丙沙星摄取曲线峰浓度比为 1∶1.74和 1∶1.5 3,耐药株中环丙沙星浓度低于临界耐药浓度 1mg/L ,且耐药株和敏感株胞内浓度相差不到 2倍 ,而其MIC却相差较大 ;电镜下耐药株菌体变短 ,外膜皱褶明显 ,间隙加宽 ,胞内空泡减少。结论　奇异变形杆菌被诱导多重耐药后 ,对药物摄入减少 ,结构发生变化。

关键词：奇异变形杆菌外膜蛋白通透性抗药性

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一种改良的金黄色葡萄球菌自溶酶谱分析方法

现代医院 2010年第5期10卷 12-13页

作者：彭青华德兴钱元恕汕头大学医学院广东汕头515041 粤北人民医院广东韶关512026

目的建立金黄色葡萄球菌自溶酶谱的研究方法。方法用SDS抽提金黄色葡萄球菌的自溶酶粗提蛋白。将同样菌体热杀灭后用SDS抽提其细胞壁粗提物作为自溶酶的底物,以SDS-PAGE电泳分析金黄色葡萄球菌的自溶酶谱。结果凝胶在黑色背景下可见每... 详细信息

目的建立金黄色葡萄球菌自溶酶谱的研究方法。方法用SDS抽提金黄色葡萄球菌的自溶酶粗提蛋白。将同样菌体热杀灭后用SDS抽提其细胞壁粗提物作为自溶酶的底物,以SDS-PAGE电泳分析金黄色葡萄球菌的自溶酶谱。结果凝胶在黑色背景下可见每条泳带上有20多条大小不一的黑色条带,如用1%亚甲基蓝染色,则可见凝胶背景为蓝色,自溶酶条带呈透明状。结论该方法可用于研究金黄色葡萄球菌在不同因素影响下的自溶酶谱及其活性,有助于研究抗菌药物对金黄色葡萄球菌自溶酶系统的作用。

关键词：金黄色葡萄球菌自溶酶

美洛培南等抗生素对超广谱β-内酰胺酶的稳定性及抑酶效应研究

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中国抗生素杂志 2000年第3期25卷 204-206页

作者：陈勇川刘松青钱元恕第三军医大学西南医院重庆400038 重庆医科大学附一院传染科重庆400042

用紫外分光光度法 ,以其它 β-内酰胺抗生素为对照 ,研究美洛培南对 6种标准超广谱 β-内酰胺酶 (TEM- 3,TEM- 4,TEM- 5 ,SHV- 2 ,SHV- 4,SHV- 5 )的稳定性及抑酶作用。美洛培南、亚胺培南、拉氧头孢和头孢西丁对 6种标准超广谱 β-内... 详细信息

用紫外分光光度法 ,以其它 β-内酰胺抗生素为对照 ,研究美洛培南对 6种标准超广谱 β-内酰胺酶 (TEM- 3,TEM- 4,TEM- 5 ,SHV- 2 ,SHV- 4,SHV- 5 )的稳定性及抑酶作用。美洛培南、亚胺培南、拉氧头孢和头孢西丁对 6种标准超广谱 β-内酰胺酶均高度稳定。氨曲南对 6种酶的稳定性较好 ,其相对水解率不超过 13% ;青霉素及一、二、三代头孢菌素对 6种酶均不稳定 ,大多数相对水解率超过 2 0 %。美洛培南和亚胺培南对 6种 β-内酰胺酶具有良好抑制作用 ,且抑制程度与抑制剂浓度有关。

关键词：美洛培南超广谱β-内酰胺酶稳定性

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念珠菌属176株的分离鉴定及其耐药性分析

山西医药杂志 2014年第15期43卷 1755-1758页

作者：曾跃斌侯冰周云英钱元恕汕头大学医学院第二附属医院皮肤病学教研室 515041 汕头市皮肤病医院检验科汕头大学医学院第二附属医院检验科 515041 汕头大学医学院药理学教研室

目的了解医院常见酵母样真菌类型的分布特点及其对常见抗真菌药物的耐药性特点,为临床真菌感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的参考依据。方法采用常规培养分离念珠菌,用显色培养基和VlTEK 32全自动微生物分析仪鉴定念珠菌... 详细信息

目的了解医院常见酵母样真菌类型的分布特点及其对常见抗真菌药物的耐药性特点,为临床真菌感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的参考依据。方法采用常规培养分离念珠菌,用显色培养基和VlTEK 32全自动微生物分析仪鉴定念珠菌类型,并参照美国国家临床试验室标准化委员会(NCCLS)推荐的M27-A药敏试验方案的微量稀释法,应用氧化还原指示剂Alamarblue通过比色判定最小抑菌浓度(MIC)值,分别检测分离鉴定出的176株念珠菌属对4种抗真菌药物(氟胞嘧啶、伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬)的体外敏感性。结果在分离鉴定出的176株念珠菌中,白念珠菌114株(64.8%),热带念珠菌23株(13.1%),克柔念珠菌15株(8.5%),光滑念珠菌11株(6.3%),季也蒙念珠菌8株(4.5%),葡萄牙念珠菌5株(2.8%),176株临床分离的念珠菌对抗真菌药物的MIC值呈正态分布,其中白念珠菌对氟胞嘧啶、伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬的耐药率分别为9.6%,8.7%,7.0%,4.4%;热带念珠菌分别为13.0%,0,0,4.3%;克柔念珠菌分别为13.3%,6.7%,0,6.7%;光滑念珠菌分别为9.1%,9.1%,0,0;季也蒙念珠菌分别为12.5%,12.5%,0,12.5%;葡萄牙念珠菌分别为0,0,0,0。结论目前我院临床分离念珠菌中仍以白念珠菌为主,其次是热带念珠菌及克柔念珠菌,比色微量稀释药敏试验方法有较好的可重复性和稳定性,且简单省时,目前常用的抗真菌药对念珠菌属均有良好的体外抑菌作用,均未产生明显的耐药性。

关键词：念珠菌属耐药性抗真菌药

2003-2004年注射用抗菌药应用状况调查

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药物流行病学杂志 2006年第2期15卷 93-95页

作者：张涛曾跃斌胡丽娜钱元恕汕头市中心医院药剂科广东汕头515041 汕头大学医学院第二附属医院皮肤性病科汕头大学医学院药理教研室

目的:了解我院近两年注射用抗菌药应用状况。方法:统计2003—2004年注射用抗菌药的消耗量、金额,用限定日剂量法分析临床使用情况。结果:按照使用频度(DDDs)排序,阿奇霉素、左氧氟沙星、氟罗沙星是临床最常用的注射用抗菌药,其每日药费... 详细信息

目的:了解我院近两年注射用抗菌药应用状况。方法:统计2003—2004年注射用抗菌药的消耗量、金额,用限定日剂量法分析临床使用情况。结果:按照使用频度(DDDs)排序,阿奇霉素、左氧氟沙星、氟罗沙星是临床最常用的注射用抗菌药,其每日药费均较低;按每日药费排序,头孢孟多酯钠、亚胺培南西司他丁、头孢噻肟钠舒巴坦钠、头孢吡肟和帕尼培南倍他米隆等药日消耗药费较多,其DDDs均较低。结论:我院连续2年注射用抗菌药应用基本稳定、合理。

关键词：抗菌药限定日剂量药物利用