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Transient carriage and low-level colonization of orally administrated lytic and temperate phages in the gut of mice

食物生产加工与营养(英文) 2020年第1期2卷 140-147页

作者： Hongduo Bao Hui Zhang Yan Zhou Shujiao Zhu maoda pang Khashayar Shahin Ademola Olaniran Stefan Schmidt Ran Wang Key Laboratory of Control Technology and Standard for Agro-product Safety and Quality Jiangsu Key Laboratory for Food Quality and Safety-State Key Laboratory Cultivation Base of Ministry of Science and TechnologyInstitute of Food Safety and NutritionJiangsu Academy of Agricultural SciencesNanjing 210014China Discipline of Microbiology School of Life SciencesCollege of AgricultureEngineering and ScienceUniversity of KwaZulu-NatalPietermaritzburg CampusPrivate Bag X01Pietermaritzburg 3201South Africa Discipline of Microbiology School of Life SciencesCollege of AgricultureEngineering and ScienceUniversity of KwaZulu-NatalWestville CampusPrivate Bag X54001Durban 4000South Africa

Many studies have shown the efficacy of phage therapy in reducing gastrointestinal ***,it is unclear whether phages can successfully colonize the gut when administered in an adequate amount for a long *** 1×10^(8)PFU/mL of purified lytic phage PA13076 or temperate phage BP96115 were fed daily to mice via drinking water over 31 days,to elucidate the distribution of phages in the gastrointestinal *** day 16 and 31,six different segments of the gastrointestinal tract with their contents,including stomach,duodenum,jejunum,ileum,cecum,colon,and fresh feces,were aseptically *** phage titers were determined using the double-layered plate method with *** ATCC 13076 or *** SPu-109 used as host *** results indicated that a small portion of administered phages survived exposure to gastric acid and entered the intestinal *** prevalence of phages in the gastrointestinal tract was lower than 1%of the primary phage *** phage titers were detected in the cecum with 10^(4)~10^(5)PFU/g,and most of the phages were eliminated from the body via feces with 10^(6)PFU/*** day 16 and day 31,the same level of phage titers in different segments of the gastrointestinal tract indicated that the colonization of phages had reached saturation at day *** results demonstrate transient phage carriage and low-level colonization of orally administrated lytic and temperate gut phages in mice.

关键词： Lytic phage Temperate phage Colonization Gut Mice

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江苏部分地区牛源无乳链球菌流行病学研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2017年第4期38卷 25-29页

作者：庞茂达孙利厂何涛包红朵王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏南京210014

对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因... 详细信息

对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因子。结果表明:自327份乳房炎奶样中共分离到84株无乳链球菌,该菌在不同奶牛场中的阳性率存在较大差异(阳性率为0~51.3%),主要流行株类型为ST67、ST103及ST568型菌株;牛源菌株的荚膜分型为Ⅰa型或Ⅱ型,均具有PI-2b型菌毛及乳糖操纵子,能够代谢乳糖,且具有不同的溶血能力;另外,所有牛源菌株对头孢噻肟均未产生耐药性。这一研究为无乳链球菌在奶牛场中的临床监测和防控提供了重要信息,有助于进一步阐明该菌的致病机制。

关键词：奶牛无乳链球菌多位点序列分型毒力因子生化特性耐药性

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肠出血性大肠埃希菌噬菌体裂解酶的毕赤酵母重组表达及裂解活性分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第4期39卷 1-6页

作者：孙利厂庞茂达何灵尘周艳何涛王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室/农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014

为研究噬菌体V-EcoM-C1所编码裂解酶LysC1的裂解活性,在酵母菌GS115中重组表达裂解酶LysC1,并检测裂解酶LysC1对大肠埃希菌的裂解活性。结果表明:通过甲醇诱导后,含有裂解酶基因LysC1的重组表达质粒pPIC9K-LysC1能够在酵母菌GS115中表达... 详细信息

为研究噬菌体V-EcoM-C1所编码裂解酶LysC1的裂解活性,在酵母菌GS115中重组表达裂解酶LysC1,并检测裂解酶LysC1对大肠埃希菌的裂解活性。结果表明:通过甲醇诱导后,含有裂解酶基因LysC1的重组表达质粒pPIC9K-LysC1能够在酵母菌GS115中表达,重组蛋白LysC1的分子量约为25ku,以外分泌方式表达,经HIS-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后可获得有活性的重组蛋白LysC1,且该裂解酶对多种不同O抗原类型的肠出血性大肠埃希菌均具有较高的裂解活性,其最小抑菌浓度(MIC)为100μg·mL^(-1)。这一研究利用酵母表达系统成功表达出大肠埃希菌噬菌体裂解酶,且该裂解酶无需穿孔素等破膜因子的辅助,可直接裂解大肠埃希菌,为肠出血性大肠埃希菌的防控提供了新的思路和途径。

关键词：肠出血性大肠埃希菌噬菌体裂解酶

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水族箱气单胞菌的鉴定及致病特性分析

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水产学报 2015年第4期39卷 573-579页

作者：吴亚锋王旭远庞茂达陆承平刘永杰南京农业大学动物医学院

为了确定南京市某渔场发病鱼感染的病原,本研究采集患鱼脏器,采用平板培养、生化实验和特异性gyr B基因扩增测序等方法进行细菌的分离鉴定;利用PCR技术检测分离株毒力基因的分布,分析其生物学特性,并进一步通过动物实验确定菌株致病力... 详细信息

为了确定南京市某渔场发病鱼感染的病原,本研究采集患鱼脏器,采用平板培养、生化实验和特异性gyr B基因扩增测序等方法进行细菌的分离鉴定;利用PCR技术检测分离株毒力基因的分布,分析其生物学特性,并进一步通过动物实验确定菌株致病力。结果分离到1株水族箱气单胞菌,命名为LK-25。该菌株携带5种主要毒力基因:气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、温敏胞外蛋白酶(epr)和丝氨酸蛋白酶(ahp),其溶血性和溶蛋白能力较强,对斑马鱼的半数致死量为1.02×103CFU/尾,确定为强毒株。进化树分析表明,水族箱气单胞菌与嗜水气单胞菌达卡亚种亲缘关系较近。本研究在国内首次报道发现水族箱气单胞菌,为进一步预防该菌所引起的相关疾病的发生和传播提供理论基础。

关键词：水族箱气单胞菌分离鉴定致病特性

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南京地区某渔场嗜水气单胞菌流行菌株的鉴定及分子分型

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水产学报 2017年第1期41卷 134-141页

作者：曹青张向阳庞茂达王楠楠 FURQAN Awan 陆承平刘永杰南京农业大学动物医学院

为确定南京地区某渔场异育银鲫出血性败血症的病原体,采集该渔场3个饲养塘口患病鱼脏器进行细菌分离培养,基于气单胞菌DNA促旋酶B亚单位(gyr B)基因序列设计引物,PCR扩增后测序进行细菌鉴定;同时,对病原菌生物学特性如溶血性、蛋白酶活... 详细信息

为确定南京地区某渔场异育银鲫出血性败血症的病原体,采集该渔场3个饲养塘口患病鱼脏器进行细菌分离培养,基于气单胞菌DNA促旋酶B亚单位(gyr B)基因序列设计引物,PCR扩增后测序进行细菌鉴定;同时,对病原菌生物学特性如溶血性、蛋白酶活性、生物被膜形成能力、运动能力以及对斑马鱼的毒力等进行分析,并进行多位点序列分型(MLST)。结果在3个饲养塘口均分离到嗜水气单胞菌,分别命名为GL-15、GL-17和GL-18;MLST分型显示三株分离菌均为ST251型;生物学特性实验表明,均有溶血性、蛋白酶活性以及运动性,生物被膜形成能力较强,OD595均超过0.5,对斑马鱼的LD50在1.4×103～3.9×103 CFU/尾,属强毒株。本研究为有效防控南京地区嗜水气单胞菌引发的出血性败血症的暴发流行提供了依据。

关键词：嗜水气单胞菌鉴定 ST251 生物学特性

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沙门菌噬菌体抗性菌的筛选鉴定及致病力研究

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微生物学报 2020年第4期60卷 759-768页

作者：包红朵朱树娇张辉周艳张旭晖庞茂达孙利厂李维王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京)江苏南京210014 南京林业大学林学院江苏南京210037 中粮饲料有限公司北京100020

【目的】筛选鉴定沙门菌噬菌体侵染裂解过程中的抗性菌株,研究抗性菌株的生物学特性及致病力的差异,为解决噬菌体治疗应用中的抗性菌问题提供理论依据。【方法】本研究通过次级感染法和双层平板法筛选沙门菌噬菌体抗性菌,通过生物学特... 详细信息

【目的】筛选鉴定沙门菌噬菌体侵染裂解过程中的抗性菌株,研究抗性菌株的生物学特性及致病力的差异,为解决噬菌体治疗应用中的抗性菌问题提供理论依据。【方法】本研究通过次级感染法和双层平板法筛选沙门菌噬菌体抗性菌,通过生物学特性和毒力基因检测比较宿主菌ATCC 13076及其噬菌体抗性菌株R3之间的差异,并通过小鼠攻毒实验和细胞粘附实验比较致病力强弱。【结果】噬菌体抗性菌株R3的生长速度较宿主菌略慢;生化及毒力基因检测均表明抗性菌株与宿主菌无差异;与宿主菌相比,抗性菌R3的LD50增加了74.8%(P>0.05);对MODE-K细胞粘附能力稍弱,但是差异不显著。【结论】该研究表明,与噬菌体宿主菌相比,噬菌体抗性菌株的生物学特性和毒力基因并没有改变,对小鼠致病力减弱,但是对MODE-K细胞粘附能力差异不显著。

关键词：沙门菌噬菌体抗性菌毒力基因生物学特性致病力

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不同畜禽来源产气荚膜梭菌的耐药性分析

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中国动物传染病学报 2023年第4期31卷 9-17页

作者：吴立婷田源王娟包红朵周艳庞茂达王冉张辉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地南京210014 江苏大学食品与生物工程学院镇江212013 西北农林科技大学杨凌712100

鉴定来源于畜禽养殖中的产气荚膜梭菌(Cp)的毒力型,分析其耐药特性及耐药基因携带情况,为Cp引起的疾病防控及公共卫生提供参考依据。采集来自于畜禽养殖场中的样品,分离并鉴定Cp。利用微量肉汤稀释法分析鸡、羊、牛分离株对10种抗生素... 详细信息

鉴定来源于畜禽养殖中的产气荚膜梭菌(Cp)的毒力型,分析其耐药特性及耐药基因携带情况,为Cp引起的疾病防控及公共卫生提供参考依据。采集来自于畜禽养殖场中的样品,分离并鉴定Cp。利用微量肉汤稀释法分析鸡、羊、牛分离株对10种抗生素的敏感特性,PCR鉴定毒力型及耐药基因。经鉴定,52株三种不同来源分离株经鉴定属于A型,耐药分析表明不同来源的Cp对10种抗生素均呈现不同程度的耐药特性,其中对克林霉素(42.31%)和四环素(40.38%)的耐药率较高,对青霉素、氯霉素、氨苄西林、甲硝唑、万古霉素、美罗培南、莫西沙星、头孢曲松耐药率为11.54%~25.00%。鸡源分离株对四环素(12/29,41.38%)耐药率最高,而羊源和牛源的分离株分别对克林霉素表现出高耐药率62.50%(5/8)、73.33%(11/15)。耐药基因分析表明四环素类tet A为主要耐药基因。本研究明确了不同来源(鸡、羊、牛)Cp毒力型,其耐药严重且普遍携带四环素类耐药基因,从而表明Cp耐药性对畜禽养殖场造成重要威胁,同时对Cp引起的疾病有效防治提供参考依据。

关键词：产气荚膜梭菌毒力型耐药特征耐药基因

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产气荚膜梭菌噬菌体鉴定及其环境消减效果评价

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3550-3560页

作者：吴立婷刘半红田源王娟包红朵周艳庞茂达王冉张辉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地南京210014 陕西科技大学食品与生物工程学院西安710021 江苏大学食品与生物工程学院镇江212013 西北农林科技大学杨凌712100

分离获得1株禽源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)噬菌体,拟鉴定其生物学特性及裂解力,并在环境中应用评价其对Cp的消减效果。通过双层及单层平板法从肉鸡肠道组织样品中分离并纯化1株Cp噬菌体。运用透射电镜观察该噬菌体形态... 详细信息

分离获得1株禽源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)噬菌体,拟鉴定其生物学特性及裂解力,并在环境中应用评价其对Cp的消减效果。通过双层及单层平板法从肉鸡肠道组织样品中分离并纯化1株Cp噬菌体。运用透射电镜观察该噬菌体形态,分析其MOI、一步生长曲线、pH及温度耐受特性、宿主谱及体外抗菌活性。通过基因组测序分析其基因组信息,最终在模拟环境下评价噬菌体对Cp污染量消减效果。扫描电镜结果显示,该噬菌体为长尾噬菌体,潜伏期<20 min,爆发量为28.5 PFU·cell^(-1),最佳MOI为0.01,能够特异性裂解禽源Cp菌株,对待检的43株Cp裂解率高达83.72%。基因组分析表明,该噬菌体为双链DNA噬菌体,全长41590 bp,拥有59个开放阅读框,其中33个ORF与已知功能蛋白具有一定同源性,将该噬菌体命名为vB_CpeS_SD72。小亚基末端酶构建进化树分析表明,噬菌体与Clostridium phage vB CpeS-CP51同源性较高。在环境消减测试中观察到噬菌体作用0.5 h,杀菌效率可达98.36%;2 h能够抑制99.60%的Cp。研究证实鉴定出1株强裂解性的新型Cp噬菌体能够在环境中有效抑制Cp的污染,为食品动物养殖及畜禽产品中Cp污染和控制提供了可靠的候选者。

关键词：产气荚膜梭菌噬菌体生物学特性基因组环境消减

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肌醇、唾液酸及岩藻糖代谢途径对嗜水气单胞菌致病性的影响

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微生物学报 2018年第8期58卷 1465-1474页

作者：李首纲庞茂达董雨豪刘锦杨媛媛陆承平刘永杰南京农业大学动物医学院江苏南京210095

【目的】调查肌醇、唾液酸以及岩藻糖代谢途径在嗜水气单胞菌感染宿主过程中对细菌致病性的影响。【方法】采用同源重组技术分别缺失嗜水气单胞菌NJ-35株的肌醇代谢相关基因iolC、唾液酸代谢相关基因nanA和岩藻糖代谢相关基因fucK,测定... 详细信息

【目的】调查肌醇、唾液酸以及岩藻糖代谢途径在嗜水气单胞菌感染宿主过程中对细菌致病性的影响。【方法】采用同源重组技术分别缺失嗜水气单胞菌NJ-35株的肌醇代谢相关基因iolC、唾液酸代谢相关基因nanA和岩藻糖代谢相关基因fucK,测定各缺失株对斑马鱼的半数致死量(LD_(50));将野生株与缺失株共感染鲫鱼,统计野生株和缺失株在不同组织中的细菌载量。【结果】各代谢相关基因的缺失均成功阻断了菌株对相应底物的降解能力。iolC的缺失导致菌株对斑马鱼的LD50升高近12倍,而nanA和fucK的缺失对LD50没有明显影响。野生株与iolC缺失株共感染鲫鱼,肝脏、脾脏和肾脏中野生株的载量显著高于缺失株,表现出明显的生长优势;nanA和fucK缺失株与野生株共感染鲫鱼,野生株和缺失株载量在各组织中均无明显差异。【结论】肌醇代谢途径在嗜水气单胞菌感染致病过程中发挥重要作用,而唾液酸和岩藻糖代谢途径对细菌无明显影响。

关键词：嗜水气单胞菌肌醇唾液酸岩藻糖代谢基因缺失致病性

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奶牛乳房炎致病菌多重Taq-Man荧光PCR检测方法的建立

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畜牧与兽医 2020年第11期52卷 90-94页

作者：张莉莉丁慧妍魏瑞成庞茂达何涛包红朵王冉江苏省农业科学院江苏南京210014

为同时检测大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌,提高对奶牛乳房炎的诊断率,本试验针对3种病原菌的保守序列设计合成了3套特异性引物,通过优化PCR反应体系和反应条件,建立了多重Taq-Man荧光定量PCR检测方法。结果显示,该检测方法具有... 详细信息

为同时检测大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌,提高对奶牛乳房炎的诊断率,本试验针对3种病原菌的保守序列设计合成了3套特异性引物,通过优化PCR反应体系和反应条件,建立了多重Taq-Man荧光定量PCR检测方法。结果显示,该检测方法具有高特异性,与肠炎沙门菌、肺炎克雷伯菌及鲍曼不动杆菌等无交叉反应;大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的最低检测浓度分别为103、102和104拷贝数/μL,敏感度较高。DNA各个拷贝数浓度的变异系数均低于2.02%,表明重复性良好。对24份临床采集奶样的检测结果表明,建立的多重Taq-Man荧光定量PCR检测方法可用于临床大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎的检测,具有良好的推广应用价值。

关键词：奶牛乳房炎 Taq-Man荧光PCR 大肠杆菌金黄色葡萄球菌无乳链球菌

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