奶牛乳房炎致病菌多重Taq-Man荧光PCR检测方法的建立

作     者：张莉莉 丁慧妍 魏瑞成 庞茂达 何涛 包红朵 王冉 ZHANG Lili;DING Huiyan;WEI Ruicheng;PANG Maoda;HE Tao;BAO Hongduo;WANG Ran

作者机构：江苏省农业科学院江苏南京210014 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第52卷第11期

页      面：90-94页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金(编号:BK20180054) 农业行业标准(18162130109237065) 

主　　题：奶牛乳房炎 Taq-Man荧光PCR 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌 

摘      要：为同时检测大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌,提高对奶牛乳房炎的诊断率,本试验针对3种病原菌的保守序列设计合成了3套特异性引物,通过优化PCR反应体系和反应条件,建立了多重Taq-Man荧光定量PCR检测方法。结果显示,该检测方法具有高特异性,与肠炎沙门菌、肺炎克雷伯菌及鲍曼不动杆菌等无交叉反应;大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的最低检测浓度分别为103、102和104拷贝数/μL,敏感度较高。DNA各个拷贝数浓度的变异系数均低于2.02%,表明重复性良好。对24份临床采集奶样的检测结果表明,建立的多重Taq-Man荧光定量PCR检测方法可用于临床大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎的检测,具有良好的推广应用价值。