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CD14稳定沉默胃癌细胞系的建立及其侵袭能力研究

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中国癌症杂志 2013年第4期23卷 254-259页

作者：李康旦增王中华德吉陈晓红刘明花西藏自治区人民医院消化内科西藏拉萨850000

背景与目的:白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen 14,CD14)为脂多糖(lipopolysaccharide,LPs)的高亲和受体,能够识别革兰阴性菌、真菌以及结核杆菌并介导机体的炎性反应,为病菌引发多种细胞信号转导的第一步,在肿瘤组... 详细信息

背景与目的:白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen 14,CD14)为脂多糖(lipopolysaccharide,LPs)的高亲和受体,能够识别革兰阴性菌、真菌以及结核杆菌并介导机体的炎性反应,为病菌引发多种细胞信号转导的第一步,在肿瘤组织以及癌细胞中常呈异常表达。近来有研究指出,CD14启动子区的功能性突变能够影响CD14的表达,并增加幽门螺杆菌感染后罹患胃癌的风险,据此推测CD14与胃癌的发生、发展密切相关。本研究拟构建CD14-shRNA干扰载体,建立CD14稳定沉默的胃癌细胞系,初步探讨CD14对胃癌细胞侵袭能力的影响,以期为胃癌发病机制的研究奠定实验基础。方法:根据shRNA引物设计原则设计并合成4条CD14-shRNA序列,构建sh-CD14表达载体,转染MGC-803细胞,G418筛选稳转细胞系;RT-PCR检测CD14 mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测CD14蛋白的表达;Transwell小室模型检测细胞的侵袭能力。结果:测序结果表明,CD14-shRNA表达载体构建成功并筛选得到了CD14稳定沉默的胃癌细胞系,其CD14 mRNA以及蛋白的表达分别降低了71.7%%和63.4%;与对照组相比CD14-shRNA组细胞侵袭能力显著降低,差异有显著统计学意义(PshRNA干扰载体并获得了CD14稳定沉默的胃癌细胞系,初步证实CD14的沉默能够影响胃癌细胞的侵袭能力。

关键词：白细胞分化抗原14 shRNA载体构建胃癌细胞侵袭

sh3TC2促进结直肠癌的发生与进展——基于生信分析

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河南大学学报（医学版） 2023年第2期42卷 114-120,127页

作者：陈德合夏天红岳婷李洪涛宁夏医科大学银川750000 解放军联勤保障部队第940医院兰州730050 商丘市第五人民医院商丘476000 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的:基于TCGA和GTEx样本数据信息挖掘在结直肠癌中异常表达且与预后相关的基因,以期提高其诊疗效果和改善预后生存。方法:利用GEPIA 2.0可视化分析平台对公共数据库中癌及癌旁1034个组织标本数据进行差异表达和预后生存相关mRNA筛选,使... 详细信息

目的:基于TCGA和GTEx样本数据信息挖掘在结直肠癌中异常表达且与预后相关的基因,以期提高其诊疗效果和改善预后生存。方法:利用GEPIA 2.0可视化分析平台对公共数据库中癌及癌旁1034个组织标本数据进行差异表达和预后生存相关mRNA筛选,使用FunRich软件通过韦恩图筛选共同差异基因并进行GO和KEGG富集分析,再通过GEPIA2.0和UALCAN数据库进行关键差异基因的表达和预后验证;接着通过TIMER2.0数据库探索关键基因的表达水平与免疫细胞浸润的相关性;最后通过sTRING数据库在线进一步分析关键基因的蛋白相互作用网络。结果:共筛选到11106个差异表达基因(结肠癌5337个,直肠癌5769个),与二者预后Os及DFs相关的500个基因取交集,筛选出BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、sh3TC2、PTPRM、ZNF154、HOXA4等8个表达差异基因且与预后生存DFs相关。验证后发现BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、PTPRM、ZNF154、HOXA4可能在癌症的不同阶段发挥促癌、抑癌的双重功能;仅sh3TC2在结直肠癌中高表达(Ps显著更短(Ps无统计学差异(P>0.05);其表达水平与肿瘤免疫浸润评估显示结肠癌与CD4+T细胞浸润相关性,最高仅0.124(P=0.013),直肠癌中与免疫细胞浸润相关性无统计学意义(P>0.05);sTRING数据库分析提示sh3TC2与sBF2、LITAF、MTMR2、MTMR2、GDAP1等蛋白相互作用可能性较大。结论:sh3TC2在结直肠癌中高表达,且高表达患者预后DFs更短,有可能是结直肠癌新的潜在诊断和预后DFs判断的标志物;sh3TC2表达水平在结直肠癌中与免疫细胞浸润相关性较弱。

关键词：结直肠癌 sh3TC2 预后生存

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IADPsG标准下妊娠期糖尿病发病率及危险因素调查

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实用医学杂志 2014年第8期30卷 1318-1320页

作者：王璇陈廷美于德纯朱华英徐陈瑜镇江市第四人民医院营养科江苏省212001 镇江市第四人民医院产科江苏省212001

目的:调查国际糖尿病与妊娠研究组(IADPsG)制定的妊娠期糖尿病(GDM)诊断标准下GDM的发病率和GDM发生的危险因素。方法:2012年1-12月在镇江市第四人民医院门诊产前检查的2 973例孕妇使用IADPsG标准进行GDM诊断,同期将100名GDM孕妇与100... 详细信息

目的:调查国际糖尿病与妊娠研究组(IADPsG)制定的妊娠期糖尿病(GDM)诊断标准下GDM的发病率和GDM发生的危险因素。方法:2012年1-12月在镇江市第四人民医院门诊产前检查的2 973例孕妇使用IADPsG标准进行GDM诊断,同期将100名GDM孕妇与100名正常孕妇进行饮食行为习惯的比较,分析GDM发生的危险因素。结果:按照IADPsG诊断标准,GDM发病率为17.1%。口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)时BMI、谷类每天3次以上、营养补充剂每天1次、水果每天大于500g为GDM发生的危险因素。结论:按照IADPsG标准GDM发病率为17.1%,孕期营养过剩或不合理的饮食结构与GDM发生密切相关。

关键词：妊娠期糖尿病 OGTT时BMI 饮食结构

JUP对人口腔鳞状细胞癌生物学特性及预后的影响及机制分析

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临床和实验医学杂志 2020年第9期19卷 906-910页

作者：高庆年王德元穆晓燕格尔木市人民医院口腔科青海格尔木816099 青海藏医院检验科青海西宁810007

目的分析心肌桥粒盘状珠蛋白(JUP)的表达水平对人口腔鳞状细胞癌细胞的相关生物学特性和预后的影响,并对其影响机制进行探讨。方法回顾性抽取2016年12月至2018年12月格尔木市人民医院口腔科收治的65例口腔鳞状细胞癌患者癌组织及距离癌... 详细信息

目的分析心肌桥粒盘状珠蛋白(JUP)的表达水平对人口腔鳞状细胞癌细胞的相关生物学特性和预后的影响,并对其影响机制进行探讨。方法回顾性抽取2016年12月至2018年12月格尔木市人民医院口腔科收治的65例口腔鳞状细胞癌患者癌组织及距离癌组织病灶2 cm左右的癌旁组织标本为研究对象。定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测口腔鳞状细胞癌患者癌组织及癌旁组织中JUPmRNA的表达情况。构建JUP干扰(对照组:未感染细胞组;shNC组:无关序列片段对照组;shJUP组:JUP沉默慢病毒组)和过表达(对照组:未感染细胞组;NC组:空载体对照组;JUP过表达组:过表达组)载体,包装成慢病毒,感染人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞,建立该基因沉默和过表达的稳转细胞株,并通过qRT-PCR和Western blot分别检测JUP在基因和蛋白水平上的表达情况。CCK-8和细胞划痕实验分别检测两种稳转细胞株的增殖、迁移以及侵袭能力。利用K-M曲线数据库资料分析JUP的表达与口腔鳞状细胞癌病人的预后相关性。结果 JUP基因在口腔鳞状细胞癌中的表达量较癌旁组织显著降低(P sh NC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113,其增殖能力无显著差异(P> 0. 05);与对照组细胞(shNC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113(shJUP),其细胞凋亡能力明显降低(P <0. 05);与对照组(NC)相比,划痕愈合实验显示,外源性导入JUP的Tca8113细胞其迁移、侵袭能力显著下降(P <0. 05);K-M曲线结果显示低表达JUP与人口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。结论 JUP的低表达与口腔鳞状细胞癌病人的转移密切相关,且与口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。

关键词：人口腔鳞状细胞癌 JUP 生物学特性预后

体外不同神经母细胞瘤细胞对锰、甲硫氨酸及叶酸敏感性差异比较

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营养学报 2019年第1期41卷 68-73页

作者：蔡海青徐怡璐肖德强唐深李习艺陆彩玲广西医科大学公共卫生学院南宁530021 广西医科大学基础医学院南宁530021

目的研究不同种属来源的神经母细胞瘤细胞,即sK-N-sh、N2a细胞对微量营养素(锰、甲硫氨酸及叶酸)敏感性的差异。方法以0、0.125、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0及10.0mmol/L MnCl_2·4H_2O分别处理人神经母细胞瘤细胞(sK-N-sh)、小鼠神... 详细信息

目的研究不同种属来源的神经母细胞瘤细胞,即sK-N-sh、N2a细胞对微量营养素(锰、甲硫氨酸及叶酸)敏感性的差异。方法以0、0.125、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0及10.0mmol/L MnCl_2·4H_2O分别处理人神经母细胞瘤细胞(sK-N-sh)、小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)24 h,采用Alamar Blue检测细胞存活率,计算不同细胞的半数致死浓度(halfinhibitconcentration,IC50);0、10、15、20mg/L甲硫氨酸及0、4、8、32mg/L叶酸分别处理sK-N-sh、N2a细胞24h及1-7d,采用Alamar Blue检测细胞活性及增殖率。结果与对照组比较,0～10.0mmol/LMnCl_2·4H_2O处理的sK-N-sh、N2a细胞存活率均明显降低,且0.5～10.0 mmol/L MnCl_2·4H_2O处理sK-N-sh组的细胞存活率明显低于N2a细胞组(均PsK-N-sh及N2a细胞的IC50分别为1.0、2.9mmol/L。与对照组比较,10～20mg/L甲硫氨酸处理sK-N-sh、N2a细胞活性均明显升高,且N2a细胞活性较sK-N-sh细胞高(PsK-N-sh、N2a细胞损伤,且sK-N-sh细胞对锰敏感性更高于N2a细胞;甲硫氨酸可以促进sK-N-sh、N2a神经细胞活性及增殖,且N2a细胞活性及增殖作用明显高于sK-N-sh细胞;叶酸对这两株细胞均具有促进增殖作用,但不同细胞应答无差异。[营养学报,2019,41(1):68-73]

关键词：锰甲硫氨酸叶酸神经母细胞瘤细胞活性及增殖

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我国不同年代玉米自交系茎秆性状演替规律

植物遗传资源学报 2021年第1期22卷 157-164页

作者：王凯欣程子萌杨艺涵张德贵李新海史利玉北京农学院植物科学技术学院北京102206 中国农业科学院作物科学研究所北京100081

茎秆是玉米植株重要的组成部分,与植株倒伏、籽粒产量密切相关。研究我国玉米茎秆性状变化趋势,探讨不同年代茎秆性状演变规律,为我国玉米抗倒伏及高产品种选育提供参考。本研究以20世纪60-90年代65个代表性玉米自交系为材料,调查植株... 详细信息

茎秆是玉米植株重要的组成部分,与植株倒伏、籽粒产量密切相关。研究我国玉米茎秆性状变化趋势,探讨不同年代茎秆性状演变规律,为我国玉米抗倒伏及高产品种选育提供参考。本研究以20世纪60-90年代65个代表性玉米自交系为材料,调查植株茎高、穗位高、茎节数、穗位节、茎粗、茎秆含水量、茎秆含糖量7个茎秆性状,及其衍生的穗位系数(穗位高/茎高)和穗节系数(穗位节/茎节数),基于最佳线性无偏估计值,开展性状相关性分析及不同年代自交系茎秆性状演变规律研究。结果显示,玉米自交系间茎秆性状差异显著;不同年代的茎秆性状时代特征不明显;随着年代的更替,玉米茎高、穗位高、茎节数、穗位节呈下降趋势;20世纪60-90年代穗位高改良效果显著;80年代左右玉米茎秆粗细育种目标由粗壮型调整为纤细型,可能与合理密植、提高单产的育种目标有关;90年代,玉米茎秆含水量降低3个百分点,下降显著。总之,抗倒伏研究一直是我国玉米育种的重要研究方向,且穗位高改良效果显著,玉米茎节数、穗位节将成为玉米抗倒伏及高产研究中新的重要关注点,研究结果对玉米抗倒伏及高产育种具有重要的指导意义。

关键词：茎秆茎节穗节玉米自交系

在肝癌细胞sK-Hep1中沉默sTAT3基因增强sorafenib疗效的初步研究

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中国生物工程杂志 2017年第12期37卷 8-13页

作者：谢琳娜曾燕华柯伙钊何文胜郑敏林德馨福建生物工程职业技术学院食品与生物工程系福州350003 福建医科大学基础医学院福州350108

目的:研究sTAT3在肝癌细胞sK-Hep1对sorafenib抗性中的作用,并探讨sTAT3基因沉默在增强sorafenib肝癌疗效中的作用。方法:应用基于shRNA的基因沉默技术在肝癌细胞sKHep1中敲减sTAT3;用CCK8法检测细胞的生长情况与对sorafenib的敏感性;... 详细信息

目的:研究sTAT3在肝癌细胞sK-Hep1对sorafenib抗性中的作用,并探讨sTAT3基因沉默在增强sorafenib肝癌疗效中的作用。方法:应用基于shRNA的基因沉默技术在肝癌细胞sKHep1中敲减sTAT3;用CCK8法检测细胞的生长情况与对sorafenib的敏感性;蛋白印迹法(Western blot)检测sTAT3、p-sTAT3(Y705)、p-sTAT3(s727)以及其下游蛋白的表达变化。结果:成功构建了sTAT3敲减的细胞株sK-Hep1-sh sTAT3。该细胞中sTAT3蛋白表达降低,细胞增殖明显受到抑制。sorafenib的处理下调了sTAT3的磷酸化水平及其下游蛋白Mcl-1和Cyclin D1的表达。sTAT3基因敲减的sK-Hep1细胞,对sorafenib的敏感性增强。结论:基于shRNA的sTAT3基因沉默能明显抑制sK-Hep1细胞增殖,提高细胞对sorafenib的敏感性,有望成为提高sorafenib抗肝癌疗效的一种新手段。

关键词：肝癌 sorafenib sTAT3 基因沉默

p300/p53/smad3通路参与人心房成纤维细胞衰老相关心房纤维化

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中国病理生理杂志 2021年第1期37卷 18-26页

作者：赖颖瑜高小燕周慧珊李昕王钊煜彭德威饶芳邓春玉南方医科大学药学院广东广州510515 广东省心血管病研究所心内科广东省人民医院医学研究部广东省医学科学院广东广州510080 华南理工大学医学院广东广州510006

目的:探究p300在人心房成纤维细胞(HAFs)衰老相关心房纤维化中的作用及其可能机制。方法:采用组织贴块法从人左心耳组织中分离HAFs并进行传代培养建立细胞衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(sA-β-Gal)活性以比较P3和P7代细胞衰老程... 详细信息

目的:探究p300在人心房成纤维细胞(HAFs)衰老相关心房纤维化中的作用及其可能机制。方法:采用组织贴块法从人左心耳组织中分离HAFs并进行传代培养建立细胞衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(sA-β-Gal)活性以比较P3和P7代细胞衰老程度的不同。Western blot实验比较不同代数(P3、P7和P11)细胞的p300、p53和smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白表达水平。高代数(P7)细胞给予不同浓度(6、9和12μmol/L)的p300抑制剂姜黄素处理或转染p300 shRNA质粒敲减p300的表达,低代数(P3)细胞转染p300过表达质粒,分别观察p53和smad3等衰老和纤维化相关因子蛋白水平的变化。结果:随着HAFs传代,衰老细胞增加,伴随p300、p53、p21、p16、p-smad3、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)和纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)水平的升高(PshRNA质粒后,高代数(P7)细胞的p53和smad3等衰老和纤维化相关因子的蛋白水平减少(Psmad3的蛋白水平明显增加(Ps衰老相关纤维化,其机制可能是通过激活p53/smad3通路实现的。

关键词： p300蛋白人心房成纤维细胞细胞衰老纤维化 p53/smad3信号通路

干扰MH-s细胞株β-catenin表达的shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定

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中华疾病控制杂志 2015年第9期19卷 922-925页

作者：王欣王延让杨德一杨雪莹刘静张明天津市疾病预防控制中心职业病预防控制所天津300011 天津医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系天津300070

目的针对β-catenin基因构建短发夹RNA(short harpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,鉴定β-catenin基因干扰效率,并检测其对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-s功能的影响。方法设计并构建5个针对β-catenin基因的shRNA干扰载体。实验分为空白细胞对照... 详细信息

目的针对β-catenin基因构建短发夹RNA(short harpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,鉴定β-catenin基因干扰效率,并检测其对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-s功能的影响。方法设计并构建5个针对β-catenin基因的shRNA干扰载体。实验分为空白细胞对照组(MH-s)、二氧化硅诱导组(silica)、病毒干扰组(silica+LV-shβ-catenin)、病毒对照组(silica+LV-shβ-catenin-NC)4组,realtime-PCR检测各组细胞β-catenin基因mRNA的表达水平,ELIsA检测各组细胞培养上清中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的分泌情况。结果二氧化硅诱导后,与silica组和silica+LV-shβ-catenin组比较,silica+LV-shβ-catenin-NC组β-catenin mRNA的表达率降低(均有Psilica+LVshβ-catenin-NC组TGF-β1、IL-6和TNF-α的分泌减少(均有PshRNA慢病毒载体能够有效抑制经二氧化硅诱导的MH-s细胞株β-catenin基因表达,并抑制TGF-β1、IL-6和TNF-α的分泌,为体内矽肺纤维化的分子机制研究奠定基础。

关键词： RNA 慢病毒属细胞因子类