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基于新的CRISPR/Cas9技术实现斑马鱼LHX9基因的快速编辑及对F0突变体性腺发育的初筛

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现代生物医学进展 2020年第1期20卷 14-18页

作者：王楠朱惠朱文娇张昌润沈也雷董梅宋怀东乔洁上海交通大学医学院附属第九人民医院内分泌科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院中心实验室上海200011 上海市南洋模范中学上海200030

目的:CRISPR/Cas9系统在斑马鱼的反向遗传学中的到了广泛应用,但突变基因的表型观察往往需要在突变鱼系的F1中进行,费时较长。LHX9作为lim家族的一种转录因子,在胚胎早期的泌尿生殖嵴中有广泛分布;且LHX9基因敲除的小鼠存在性腺发育不... 详细信息

目的:CRISPR/Cas9系统在斑马鱼的反向遗传学中的到了广泛应用,但突变基因的表型观察往往需要在突变鱼系的F1中进行,费时较长。LHX9作为lim家族的一种转录因子,在胚胎早期的泌尿生殖嵴中有广泛分布;且LHX9基因敲除的小鼠存在性腺发育不良。本研究拟通过一种新的CRISPR/Cas9基因编辑技术,采用四条sgRNA对LHX9基因进行VASA转基因斑马鱼的基因敲除,以观察该基因缺陷对斑马鱼性腺发育的影响。方法:利用新的CRISPR/Cas9技术,设计四条针对斑马鱼LHX9基因3号外显子的20bp的sgRNA,通过非克隆体外转录得到靶位点的四条sgRNA。将以上靶位点的四条sgRNA与Cas9核酸酶蛋白同时注射入单细胞期的斑马鱼胚胎内,利用PCR鉴定突变型类型和突变比例。通过对LHX9基因突变体的VASA转基因斑马鱼进行荧光观察,发现LHX9基因缺陷的斑马鱼性腺发育的情况。结果:靶向Exon 3的四条sgRNA可成功编辑斑马鱼LHX9基因,敲除效率高达82%,Sanger测序发现产生10种不同的移码突变类型。通过该方法对VASA转基因斑马鱼的LHX9基因进行编辑,发现LHX9基因突变导致dph6的的斑马鱼原始生殖细胞增殖和迁移受到影响。结论:基于4条sgRNA注射的CRISPR/Cas9技术,可以快速地产生具有突变表型的G0斑马鱼,具有应用潜力。LHX9基因敲除导致原始生殖细胞的发育和迁移受到影响,提示该基因参与了斑马鱼早期性腺的发育。

关键词： CRISPR/Cas9 LHX9 斑马鱼基因编辑

幽门螺杆菌处理前后HepG2细胞蛋白质双向电泳图谱的差异分析

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肿瘤防治杂志 2005年第21期12卷 1609-1614页

作者：张艳范学工陈仁肖志强冯雪萍田雪飞陈朝晖中南大学湘雅医院传染科中南大学湘雅医院医学实验研究中心卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室湖南长沙410008

目的:利用蛋白质组学方法,识别并鉴定幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,***)处理HepG2细胞后差异表达的蛋白质,为进一步探讨幽门螺杆菌对肝细胞的病理作用机制奠定基础。方法:运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离***处理前后HepG2细胞的... 详细信息

目的:利用蛋白质组学方法,识别并鉴定幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,***)处理HepG2细胞后差异表达的蛋白质,为进一步探讨幽门螺杆菌对肝细胞的病理作用机制奠定基础。方法:运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离***处理前后HepG2细胞的总蛋白质,用图象分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(massspectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定差异蛋白质。结果:鉴定出12种差异表达蛋白质,这些蛋白质包括整合素β1、蛋白激酶Cα、PINCH蛋白、Ras相关蛋白Rab37、lim同源盒蛋白Lhx1、HLAⅠ类抗原、血管抑制素和金属蛋白酶抑制因子2等。这些差异蛋白质涉及基因表达调控、细胞免疫、细胞生长和信号传导等众多关键事件。结论:***处理前后HepG2的蛋白质组具有差异,这些差异表达的蛋白质可能参与了***对肝细胞的病理作用过程,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究***与人类肝脏疾病的关系。

关键词：幽门螺杆菌 HepG2 双向凝胶电泳基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱蛋白质组比较

25%粉锈宁WP防治鸡蛋花黄锈病及其毒力研究

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草原与草坪 2014年第1期34卷 59-63页

作者：杜小姣杨秉建叶光明李博黄慧青文沛玲深圳市日昇园林绿化有限公司深圳518000

2013年6~7月,惠州鸡蛋花苗圃感染了黄锈病,发病率为93.33%,平均病情指数70.01；用0.1406 g/（10 m2）粉锈宁 WP 对锈病不同梯度病情指数进行防治,试验结果显示：防治效果与病情指数呈负相关关系（r =-96.93%）；用等比系列剂量进行防治... 详细信息

2013年6~7月,惠州鸡蛋花苗圃感染了黄锈病,发病率为93.33%,平均病情指数70.01；用0.1406 g/（10 m2）粉锈宁 WP 对锈病不同梯度病情指数进行防治,试验结果显示：防治效果与病情指数呈负相关关系（r =-96.93%）；用等比系列剂量进行防治试验,用几率值法的计算步骤求得 ED50=0.511（g）,其95%可信限为0.240~0.627 g,毒力回归方程为 y =5.5129＋1.7579 x ,据此,模拟了不同病情和不同防效的适宜用药量。

关键词：粉锈宁 WP 鸡蛋花黄锈病毒力