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人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达及鉴定

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国际检验医学杂志 2015年第16期36卷 2344-2345,2348页

作者：彭杰雄谭洪陆建国林连成邓兆享林文浩武警广东边防总队医院检验科广东深圳518029 深圳市赛尔生物技术有限公司广东深圳518055

目的利用基因工程方法表达人巨细胞病毒pp65基因片段,并对表达的目的蛋白进行鉴定。方法根据genebank所查的HCMV PP65基因和相关文献选取特异性反应的基因片断,PCR扩增目的基因,将PCR产物切胶回收后与pET-28a载体连接,转化bl21,筛选。... 详细信息

目的利用基因工程方法表达人巨细胞病毒pp65基因片段,并对表达的目的蛋白进行鉴定。方法根据genebank所查的HCMV PP65基因和相关文献选取特异性反应的基因片断,PCR扩增目的基因,将PCR产物切胶回收后与pET-28a载体连接,转化bl21,筛选。对重组质粒进行诱导表达,采用ELISA间接法鉴定纯化的GST/pp65融合蛋白的抗原性进行鉴定。结果目的蛋白经诱导后表达于上清液中,经鉴定目的蛋白具有预期的抗原活性。结论 GST/pp65融合蛋白的获得,为进一步研制以重组蛋白代替传统的全病毒作为检测抗原的新型人巨细胞病毒特异性免疫学检测试剂盒奠定了基础。

关键词：人巨细胞病毒 pGEX-4T-1 质粒表达鉴定

六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肝纤维化作用机制研究

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南京中医药大学学报 2017年第1期33卷 65-68页

作者：王学敏崔亚钦王静石炳烨李新菊河北大学附属医院河北保定071000

目的观察六味地黄丸对四氯化碳(CCl4)小鼠肝纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。方法每周3次腹腔注射CCl_4共6周制备肝纤维化模型,六味地黄丸在CCl_4造模同时灌胃给药。免疫荧光检测α-SMA表达,免疫组化检测巨噬细胞标志物CD68表达,qPCR... 详细信息

目的观察六味地黄丸对四氯化碳(CCl4)小鼠肝纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。方法每周3次腹腔注射CCl_4共6周制备肝纤维化模型,六味地黄丸在CCl_4造模同时灌胃给药。免疫荧光检测α-SMA表达,免疫组化检测巨噬细胞标志物CD68表达,qPCR检测α-SMA、TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达,Western blot检测α-SMA、MCP1和CXCR3。结果造模6周,α-SMA表达显著升高(P<0.01),六味地黄丸显著抑制α-SMA表达(P<0.01);CCl_4造模后CD68主要分布在纤维间隔呈强阳性表达;与正常组相比,模型组TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,六味地黄丸显著降低CD68及促炎症因子、趋化因子的表达(P<0.01)。结论六味地黄丸对CCl_4肝纤维化过程中的巨噬细胞激活有显著抑制作用。

关键词：肝纤维化六味地黄丸巨噬细胞

1-磷酸鞘氨醇及受体1在小鼠肺缺血再灌注损伤中的表达变化和意义

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四川大学学报（医学版） 2018年第6期49卷 891-894页

作者：祝卿周文琴万里金资源张学湖林丽娜四川大学华西第二医院麻醉科出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学) 成都610041 四川大学华西第二医院产科出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041 温州医科大学附属第一医院麻醉科温州325000

目的探讨1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)及其受体1(S1PR1)在肺缺血再灌注损伤(PIRI)肺组织中的表达变化及意义。方法采用无损伤血管夹阻断小鼠左主支气管、左肺静脉和左肺动脉缺血30min,松开血管夹,接受再灌注2h,制作小鼠P... 详细信息

目的探讨1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)及其受体1(S1PR1)在肺缺血再灌注损伤(PIRI)肺组织中的表达变化及意义。方法采用无损伤血管夹阻断小鼠左主支气管、左肺静脉和左肺动脉缺血30min,松开血管夹,接受再灌注2h,制作小鼠PIRI模型(n=8),同时设正常对照组(n=8)和假手术组(n=8),3组小鼠均处死后取肺组织。根据肺组织HE染色、湿/干质量比结果论证模型制作情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中生成S1P的关键限速酶鞘氨醇激酶-1(SphK1)及S1PR1mRNA表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中S1P及S1PR1蛋白含量的变化。结果与正常对照组和假手术组比较,缺血再灌注可导致肺组织病理评分升高,肺干/湿质量比增高,肺组织SphK1和S1PR1mRNA表达升高(P<0.05),肺组织中S1P、S1PR1蛋白含量均明显增加(P<0.05)。结论 PIRI后,肺组织中S1P及S1PR1的表达升高,提示S1P/S1PR1信号通路参与了PIRI的病理生理改变过程,可能是PIRI潜在的治疗靶点。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇 1-磷酸鞘氨醇受体1 肺缺血再灌注

饲料中添加发酵大蒜提取物对高脂饮食诱导肝脂肪变性小鼠的影响

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饲料博览 2017年第3期27卷 50-50页

作者： Lee H S Lee S j Yu H j Lee j H Cho H Y

试验旨在探讨植物乳杆菌bl2发酵大蒜提取物(FGE)对高脂饮食(HFD)诱导产生的肝细胞脂肪变性的影响。FGE可提高胰岛素敏感性,降低血脂水平。与非发酵的大蒜提取物(NFGE)相比,饲料中添加FGE可有效降低肝脏脂质水平,减少脂肪肝。FGE的功能... 详细信息

试验旨在探讨植物乳杆菌bl2发酵大蒜提取物(FGE)对高脂饮食(HFD)诱导产生的肝细胞脂肪变性的影响。FGE可提高胰岛素敏感性,降低血脂水平。与非发酵的大蒜提取物(NFGE)相比,饲料中添加FGE可有效降低肝脏脂质水平,减少脂肪肝。FGE的功能的实现主要通过AMPK途径,通过上调PPARα刺激肝脏脂肪分解,抑制肝脏脂肪合成,部分通过下调SREBP-1c、FAS和SCD-1表达实现。FGE通过提高有机硫化合物、环蒜氨酸和SAC的抗氧化活性,显著改善高脂饮食诱导的脂肪变性,改善肝脏氧化还原状态和氧化损伤。试验结果表明,FGE可对非酒精性脂肪肝有预防及治疗作用。

关键词：发酵大蒜脂肪肝抗氧化有机硫化合物

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广东沿岸水域糠虾类三新种

海洋与湖沼 1983年第6期 522-530页

作者：刘瑞玉王绍武中国科学院海洋研究所

广东沿岸水域有丰富的糠虾资源,不仅可供食用,还可利用作为水产养殖海马的活饵。本文报道的3个新种采自广东吴川县沙田和南海北部。现将新种描述如下。纤细刺糠虾(新种) Acanthomysis tenella sp. nov(图1) 正模标本成体雄性,体长5.2mm... 详细信息

广东沿岸水域有丰富的糠虾资源,不仅可供食用,还可利用作为水产养殖海马的活饵。本文报道的3个新种采自广东吴川县沙田和南海北部。现将新种描述如下。纤细刺糠虾(新种) Acanthomysis tenella sp. nov(图1) 正模标本成体雄性,体长5.2mm。标本号K78-li,1978年5月采自广东吴川县沙田。副模标本成体雌性,体长5.2mm。标本号K78p-li,3♂♂,3♀♀。标本采集地点、日期同正模。其他材料 12♂♂,24♀♀,体长4.5—5.2mm,采集地点、时间也与正模相同。成体最大体长5.2mm。

关键词：内肢角膜眼柄糠虾体长基部胸肢腹节尾肢沿岸水域头胸甲腹肢外肢广东

花生光敏色素AhphyA和AhphyB基因的克隆及原核表达研究

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四川农业大学学报 2015年第1期33卷 13-21页

作者：张烨赵术珍王江山夏晗侯蕾任丽王兴军山东省农业科学院生物技术研究中心山东省作物遗传改良与生态生理重点实验室济南250100 山东大学生命科学学院济南250100 开封农林科学研究院河南开封475004

【目的】克隆了花生(Arachis hypogaea L.)的2个光敏色素基因,并对其进行生物信息学分析,构建这2个基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达蛋白,为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。【方法】首先... 详细信息

【目的】克隆了花生(Arachis hypogaea L.)的2个光敏色素基因,并对其进行生物信息学分析,构建这2个基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达蛋白,为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。【方法】首先,根据花生转录组中编码光敏色素A基因与光敏色素B基因的部分序列,以花生叶片中提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE技术对这2个基因的全长ORF序列进行克隆;然后,使用MEGA软件分析花生光敏色素与其他物种中光敏色素的亲缘关系;构建AhphyA、AhphyB的原核表达载体,转化大肠杆菌bl21并诱导蛋白表达。【结果】2个基因全长ORF分别为3378bp和3 456bp,分别编码1 125和1 151个氨基酸的蛋白;其氨基酸序列与大豆的光敏色素A蛋白和光敏色素B蛋白的相似性分别为88%和90%;经SDS-PAGE检测,在大肠杆菌中2个基因均能受IPTG诱导表达产生蛋白。【结论】利用RT-PCR与RACE技术从花生中克隆得到了2个光敏色素基因,成功构建了原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词：花生光敏色素基因克隆原核表达 Arachis hypogaea L.

用重组DNA和免疫学技术定位研究抗人C3单克隆抗体的抗原识别点

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北京大学学报(医学版) 1988年第1期 15-18页

作者：马大龙,吴励,劳者歌,庞建,孙英,龙振洲,R. Burger,M. j. Sessler,T. F. Meyer 北京医科大学免疫学教研室北京医科大学免疫学教研室北京医科大学免疫学教研室北京医科大学免疫学教研室北京医科大学免疫学教研室北京医科大学免疫学教研室西德海德尔堡大学免疫研究所西德海德尔堡大学免疫研究所西德海德尔堡马克斯-普朗克研究所

利用DNA重组技术分离人补体C3α链cDNA的3个重叠(overlapping)克隆并在大肠杆菌中表达出不同的人C3α链片段。Western 印迹法表明,多克隆和单克隆抗人C3抗体H215与它们均呈阳性反应。为进行人C3α链的亚克隆化,构建了新的表达质粒载体pE... 详细信息

利用DNA重组技术分离人补体C3α链cDNA的3个重叠(overlapping)克隆并在大肠杆菌中表达出不同的人C3α链片段。Western 印迹法表明,多克隆和单克隆抗人C3抗体H215与它们均呈阳性反应。为进行人C3α链的亚克隆化,构建了新的表达质粒载体pECL1-3,获ReC3-H2cDNA亚克隆。并在大肠杆菌中表达出小片段人C3。多克隆抗人C3抗体与ReC3H2呈阳性反应,而单抗H215则阴性。结合酶图谱分析和免疫学测定,证明H215的抗原识别点位于C3α链C末端约120个氨基酸的区域内。

关键词：单克隆抗体克隆化 C3 DNA 免疫学基础医学定位研究

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供体及受体基因型对小鼠同种胰岛移植的影响

中华器官移植杂志 1985年第3期6卷 107-109页

作者：祝希媛 D.E.R. Sutherlancl M.W.Steffers C.E.Morrow P.F.Gores j.S.Najaran F.H.Bach 北京市临床医学研究所病理生理研究室美国明尼苏达大学医学院

文献报道,在仅有组织相容复合体第一类抗原(H-2k、H-2k+D)不同的小鼠间进行胰岛移植会产生排斥,但在仅有第二类抗原(H-2I)不同的小鼠间移植,则很少排斥。某些品系小鼠间的同种胰岛移植排斥率很低。这种种现象的产生是由于受体的特异性... 详细信息

文献报道,在仅有组织相容复合体第一类抗原(H-2k、H-2k+D)不同的小鼠间进行胰岛移植会产生排斥,但在仅有第二类抗原(H-2I)不同的小鼠间移植,则很少排斥。某些品系小鼠间的同种胰岛移植排斥率很低。这种种现象的产生是由于受体的特异性免疫反应低下,还是由于供体的免疫原性差,抑或两者均有关?为了研究供体及受体基因型对胰岛移植的影响,我们用不同品系的同源小鼠(Congenic mouse)进行了配对供体与受体相互的胰岛移植,观察了排斥反应发生的情况。材料和方法一、小鼠:采用jackson动物实验中心及明尼苏达大学医学院小鼠饲养室的同源小鼠。其品系为:B10·A,B10·AQR,B10·A(2R),B10·G,B10·BR及C57bl/6。它们的基因型见(表1)

关键词：供体受体基因型小鼠同种胰岛移植的影响

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上颌尖牙-侧切牙唇侧易位的分步牵引治疗

口腔医学研究 2017年第7期33卷 754-757页

作者：顾郁嘉张卫兵张玺于剑南王林赵春洋南京医科大学口腔医学研究所南京医科大学附属口腔医院正畸科江苏南京210029

目的:探讨应用锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)定位、诊断,指导上颌尖牙-侧切牙唇侧易位的分步牵引治疗。方法:选取在南京医科大学附属口腔医院正畸科矫治的上颌尖牙-侧切牙唇侧易位的青少年患者22例,计26颗尖牙,获取其... 详细信息

目的:探讨应用锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)定位、诊断,指导上颌尖牙-侧切牙唇侧易位的分步牵引治疗。方法:选取在南京医科大学附属口腔医院正畸科矫治的上颌尖牙-侧切牙唇侧易位的青少年患者22例,计26颗尖牙,获取其治疗前的CBCT数据,根据其易位特征分为5类,并依据分类制定矫治方案,模拟矫治步骤与施力的方向,指导临床治疗。结果:19颗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和部分Ⅳ类易位尖牙牵引复位,3颗Ⅳ、Ⅴ类易位尖牙牵引替代拔除的切牙,2颗Ⅳ类尖牙维持易位,2颗Ⅴ类尖牙被拔除。结论:CBCT辅助上颌唇侧易位尖牙分类,指导治疗方案的制定,提高治疗成功率。

关键词：尖牙侧切牙易位分步牵引 CBCT