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5/7型猪细小病毒双重PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1458-1463页

作者：王茂鹏王伟伟李笨李乐天鲁会军金宁一韩硕米志强李昌温州大学病毒学研究所浙江温州325035 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元吉林长春130122 辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110031 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起猪呼吸和繁殖障碍的重要病原体,感染比例逐年上升,现有PPV5和PPV7的检测效率低,故建立针对PPV5/7的多重检测方法,可增加样品利用率,提高检测效率。本研究根据2种病原的保守序列,设计特异性引物... 详细信息

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起猪呼吸和繁殖障碍的重要病原体,感染比例逐年上升,现有PPV5和PPV7的检测效率低,故建立针对PPV5/7的多重检测方法,可增加样品利用率,提高检测效率。本研究根据2种病原的保守序列,设计特异性引物,通过对反应条件和体系优化,建立快速检测PPV5和PPV7双重PCR方法,并对该方法的灵敏性、特异性进行验证。结果显示,建立的双重PCR方法仅对PPV5、PPV7的基因组DNA有特异性扩增,对猫细小病毒(FPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的核酸均无特异性扩增;对病原核酸混合模板的检出下限为10拷贝/μL,与单一PCR检测结果一致。本研究建立一种特异性强、敏感性高的多型PPV双重检测方法,为调查PPV5和PPV7在猪群中的感染情况提供快速检测方法。

关键词：猪细小病毒5型猪细小病毒7型双重PCR

颗粒蛋白前体PGRN通过增强ORFV诱导的自噬促进病毒的复制

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 908-914页

作者：甄瑞雪吕丽君陆慧君刘兴源徐梦实关继羽贺文琦高丰赵魁吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

颗粒蛋白前体(PGRN)是一种分泌型多功能蛋白,具有多种生物学功能,在炎症反应、创伤修复、溶酶体功能、自噬、神经发育等多种生命活动过程中发挥重要作用。课题组前期研究结果证实,ORFV能够诱导OFTu细胞发生自噬,作为细胞自噬的重要调控... 详细信息

颗粒蛋白前体(PGRN)是一种分泌型多功能蛋白,具有多种生物学功能,在炎症反应、创伤修复、溶酶体功能、自噬、神经发育等多种生命活动过程中发挥重要作用。课题组前期研究结果证实,ORFV能够诱导OFTu细胞发生自噬,作为细胞自噬的重要调控分子,PGRN是否参与对ORFV诱导OFTu细胞自噬的调控尚不清楚。本研究首先从转录和蛋白水平上分析PGRN在ORFV感染细胞中的表达变化规律,结果显示,PGRN发生显著上调的时间与ORFV诱导自噬发生的时间一致。进一步研究显示,敲低PGRN能够抑制LC3的型别转换,并使P62表达上调;而体外添加PGRN重组蛋白则促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转换,P62表达下调。以上结果表明,PGRN参与对ORFV诱导细胞自噬的调控。此外,病毒噬斑试验结果显示,PGRN能够促进ORFV复制,且可解除自噬抑制剂对病毒复制的抑制,该结果表明,PGRN能够通过调节ORFV激活的自噬影响病毒的复制。本研究结果将为明确PGRN对ORFV诱导自噬的调控作用及进一步揭示ORFV致病机制奠定基础。

关键词：羊传染性脓疱病毒(ORFV) 颗粒蛋白前体(PGRN) 自噬复制增殖

3例犬皮肤肥大细胞瘤病理学及c-kit免疫组织化学染色研究

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中国兽医学报 2021年第10期41卷 2015-2020页

作者：马莹谢腾熠张竞石俊超高蕊徐荣艺贺文琦高丰陆慧君吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为了对临床送检的3例犬皮肤肿物进行确诊与预后评估,本研究对送检样品制作组织切片,HE染色后在显微镜下可见大量增生的细胞,呈现"煎蛋样"形态,胞浆内含有蓝灰色颗粒物质,符合肥大细胞的特征;进而采用甲苯胺蓝染色,观察到肿瘤细胞胞浆内... 详细信息

为了对临床送检的3例犬皮肤肿物进行确诊与预后评估,本研究对送检样品制作组织切片,HE染色后在显微镜下可见大量增生的细胞,呈现"煎蛋样"形态,胞浆内含有蓝灰色颗粒物质,符合肥大细胞的特征;进而采用甲苯胺蓝染色,观察到肿瘤细胞胞浆内颗粒物质呈蓝紫色的特异性着色,进一步证实其为肥大细胞起源;最后通过c-kit免疫组织化学染色判断免疫表型,可见肿瘤细胞KIT蛋白呈不同标记类型的阳性着色。通过病理学分析及c-kit染色,确定3个病例均为皮肤型肥大细胞瘤(cutaneous mast cell tumor,cMCT)。研究结果不仅可对临床病例的治疗方案设计与预后评估提供参考,而且可为犬肥大细胞瘤的确诊提供可靠的技术方法。

关键词：犬皮肤型肥大细胞瘤甲苯胺蓝染色 c-kit免疫组织化学染色

DEK蛋白在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理的关系

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现代医药卫生 2016年第19期32卷 2951-2953页

作者：粟连秀张兆明陆惠军韦翠容广西医科大学第八附属医院广西贵港537100

目的探讨DEK蛋白在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用组织芯片和快捷免疫组织化学Max Vision TM法检测185例结直肠癌及癌旁正常黏膜组织中DEK蛋白表达情况。结果 DEK蛋白在结直肠癌中的表达阳性率为86.49%(160/185),... 详细信息

目的探讨DEK蛋白在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用组织芯片和快捷免疫组织化学Max Vision TM法检测185例结直肠癌及癌旁正常黏膜组织中DEK蛋白表达情况。结果 DEK蛋白在结直肠癌中的表达阳性率为86.49%(160/185),明显高于正常结肠黏膜组织[64.86%(120/185)],差异有统计学意义(P<0.001)。DEK蛋白表达与肿瘤临床分期及浸润深度有关,临床分期越晚、肿瘤浸润越深,DEK蛋白表达越高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DEK蛋白在结直肠癌的发生、发展中起着重要作用。

关键词：结直肠肿瘤免疫组织化学 DEK 组织芯片

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犬骨骼血管肉瘤的影像学及病理形态学分析

中国兽医学报 2022年第4期42卷 740-744页

作者：高蕊张海涛石俊超张竞马莹徐荣艺贺文琦陆慧君吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所吉林长春130062 吉林省辉南县农业农村局吉林通化135100

1只4岁龄雄性贵宾犬,因左后肢肿胀跛行入院就诊。影像学检查,发现左后肢膝关节间隙不对称、远端骨皮质不连续等异常,遂进行生检手术并送病理学检查。病理组织学观察可见大部分正常骨组织结构消失,骨髓腔内有大量异常增殖的肿瘤细胞向骨... 详细信息

1只4岁龄雄性贵宾犬,因左后肢肿胀跛行入院就诊。影像学检查,发现左后肢膝关节间隙不对称、远端骨皮质不连续等异常,遂进行生检手术并送病理学检查。病理组织学观察可见大部分正常骨组织结构消失,骨髓腔内有大量异常增殖的肿瘤细胞向骨组织浸润,肿瘤细胞多排列成管腔结构,管腔内有红细胞存在,细胞异型性较高,有多核细胞出现,有丝分裂常见。免疫组织化学染色结果表明,肿瘤区域血管内皮细胞特异性标记物CD31及Factor Ⅷ染色均呈阳性,证明该肿瘤是血管内皮细胞来源。结合临床病例情况及病理学诊断结果,确诊为血管肉瘤。该研究结果不仅为临床病例治疗方案的制定及预后评估提供参考,而且对骨骼发生血管肉瘤病例的病理诊断提供重要依据。

关键词：犬骨血管肉瘤病理组织学免疫组织化学 CD31 FactorⅧ

Spontaneous resolution and absolute chiral induction of 3d-4f heterometal-organic frameworks from achiral precursors

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Science China Chemistry 2021年第10期64卷 1698-1702页

作者： Manting Chen Zuochang Chen huijun Chen lu Xu Xiangjian Kong Lasheng Long Lansun Zheng Collaborative Innovation Center of Chemistry for Energy Materials State Key Laboratory for Physical Chemistry of Solid SurfacesDepartment of ChemistryCollege of Chemistry and Chemical EngineeringXiamen UniversityXiamen 361005China

The asymmetric assembly and spontaneous resolution of chiral heterometal-organic frameworks from achiral precursors remain a great challenge. Herein, we report the formation and spontaneous resolution of three-dimensional(3 D) chiral 3 d-4 f heterometal-organic frameworks from achiral ligands in the presence of lactic acid enantiomers as chiral inducers. In the absence of a chiral inducer, the reactants randomly generated both enantiopure crystals in equal measure. However, enantiopure lactic acid induced asymmetric resolution to achieve single chiral crystallization. DFT theoretical calculations showed that the absolute chiral resolution of the enantiomers is due to the difference in the interactions between the two enantiomeric Λ/Δ-[Fe L_(3)]^(3-)units and the chiral inducer.

关键词： chirality spontaneous resolution chirality induction heterometal-organic framework achiral precursors

脂滴相关蛋白Rab18对猪血凝性脑脊髓炎病毒复殖和转运的影响

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 774-780页

作者：韦寒露母少倩田轶涵邱瑞召陆慧君兰云刚李姿高丰贺文琦吉林大学动物医学学院吉林长春130062

通过分子克隆技术、RNAi技术及共聚焦显微镜技术检测Rab18蛋白对猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine haemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)复殖和转运的影响。PCR技术扩增目的基因Rab18,将其插入pCMVC-EGFP质粒中,构建野生型Rab18-EGFP过表达质粒;利用点突变盒子定点突变Rab18-EGFP,构建活化型Rab18和失活型Rab18过表达质粒。将成功构建的Rab18过表达质粒或者Rab18siRNA转染小鼠神经瘤母细胞(neuro-2a cells)后接种PHEV,通过Western blot和qPCR检测PHEV蛋白和基因表达。结果显示,活化型Rab18促进PHEV的增殖和释放,失活型Rab18抑制PHEV的增殖;敲低Rab18后PHEV增殖及病毒的胞外释放受到抑制;利用共聚焦显微技术观察到PHEV、Rab18和LDs在细胞质中有明显共定位,且PHEV感染后Rab18与脂肪-甘油三酯-脂肪酶(ATGL)的共定位增强。结果表明,Rab18通过脂质代谢中LDs形成相关途径调控PHEV复殖与转运。

关键词：猪血凝性脑脊髓病毒 Rab18 脂滴胞内运输

Ⅱ型登革病毒重组亚单位候选疫苗构建及免疫原性分析

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中国兽医学报 2024年第11期44卷 2386-2392页

作者：王龙龙于宁李霄张赫鲁会军长春理工大学生命科学技术学院中国农业科学院长春兽医研究所

登革病毒(dengue virus, DENV)引发的疾病严重威胁着人类的生命健康，我国尚无对应的有效疫苗，本研究拟制备出1种针对Ⅱ型DENV的重组亚单位候选疫苗。以Ⅱ型DENV EDⅢ基因为目的基因，构建重组真核表达质粒并转染至悬浮细胞中表达目的... 详细信息

登革病毒(dengue virus, DENV)引发的疾病严重威胁着人类的生命健康，我国尚无对应的有效疫苗，本研究拟制备出1种针对Ⅱ型DENV的重组亚单位候选疫苗。以Ⅱ型DENV EDⅢ基因为目的基因，构建重组真核表达质粒并转染至悬浮细胞中表达目的蛋白，筛选合适的免疫剂量来免疫小鼠，进行免疫原性分析。成功构建出DENV重组真核表达载体，转染至HEK-293F表达目的蛋白，大小约为15 kDa。以铝盐为佐剂与不同剂量的重组蛋白混合免疫小鼠，分析免疫原性，首次免疫后第35天时，3个蛋白免疫组小鼠血清中特异性抗体水平明显高于佐剂组和PBS组，10μg D2EDⅢ蛋白组和20μg D2EDⅢ蛋白组特异性抗体水平分别是5μg D2EDⅢ蛋白组的1.43和1.56倍，抗体分型偏向于IgG1,表明本研究制备的Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗主要提高体液免疫应答，但3个蛋白免疫组之间IgG1抗体水平差异并不显著。综合免疫效果及疫苗成本，每只小鼠最佳目的蛋白免疫剂量确定为10μg。本研究制备了1种Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗，为DENV的预防提供参考。

关键词：登革病毒重组亚单位候选疫苗免疫原性

广西PRRSV分离株Y12018全基因组扩增和遗传进化分析

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中国兽医学报 2021年第5期41卷 877-882页

作者：王政解长占于成东于桐李亭玉李金凤孟媛鲁会军金宁一张雪梅延边大学农学院吉林延吉133002 军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为监测广西地区猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,本研究从广西某猪场采集样本成功分离获得PRRSV毒株并命名为Y12018,并参考扩增全长所需的10对特异性引物对其全基因组序列分段扩增后连接,为进一步鉴定Y12018毒株,将N... 详细信息

为监测广西地区猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,本研究从广西某猪场采集样本成功分离获得PRRSV毒株并命名为Y12018,并参考扩增全长所需的10对特异性引物对其全基因组序列分段扩增后连接,为进一步鉴定Y12018毒株,将Nsp2与GP5等序列分别与参考毒株进行对比,分析该分离株与国内外典型毒株的遗传进化关系从而探究其基因组来源。结果显示,Y12018毒株基因组全长为15 017 bp(除去polyA尾),与NADC30毒株遗传关系最为接近,全基因组同源性为94.4%;Nsp2同源性为96.8%,与NADC30相比缺失的2个氨基酸,对应VR-2332为587~588位点;GP5同源性为93.5%,对应氨基酸序列有31个位点发生改变;其余各开放阅读框的同源性为92.9%~97.1%;遗传演化分析结果表明分离株Y12018属于类NADC30毒株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株遗传进化分析序列分析