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Effect of Lamb Age and in vitro Culture System of Oocytes on JIVET Technology

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Agricultural Biotechnology 2019年第1期8卷 86-89,92页

作者： Yangyi MAO huidi luo Guanwu ZHANG Zhiwu WANG Peng ZHAO Jun LI Hongyu GUO Shenghua ZHOU Huihui GUO Chunyan LI Institute of Animal Husbandry and Veterinary Shanxi Academy of Agricultural Sciences

[Objectives] This study was conducted to investigate the effects of lamb age and in vitro culture system of oocytes on the results of juvenile in vitro embryo transfer( JIVET). [Methods]Ten Dorper × small-tailed Han lambs aged 5 to 10 weeks were induced to superovulate via i. p. injection of pregnant mare's serum gonadotropin( PMSG). The oocytes were matured in basal maturation solution or modified maturation solution,which was prepared by adding 200 μmol/L cysteine to the basal maturation solution. Then,the oocytes were fertilized in fertilization medium I containing 2% estrus sheep serum( ESS) or fertilization medium II containing 3 mg/ml bull serum albumin( BSA). Finally,the number of oocytes,oocyte maturation rate and cleavage rate of the lambs of different ages were determined. [Results]The average number of oocytes recovered per lamb was( 111. 00 ± 16. 97),( 139. 50 ± 28. 99),( 108. 50 ± 17. 68) and( 42. 00 ± 11. 31) for5-,7-,8-and 10-week-old Dorper × small-tailed Han lambs,respectively. The number of oocytes obtained from 5-,7-and 8-week-old lambs was significantly higher than that from 10-week-old lambs( P 0. 05). The maturation rate of oocytes cultured in modified maturation solution was 3. 64% higher than that in basal maturation solution. The cleavage rate of oocytes in fertilization medium I was very significantly higher than that in fertilization medium II( P < 0. 01). [Conclusions] The results of JIVET can be improved by harvesting oocytes from lambs aged 5-8 weeks,adding a certain amount of cysteine into oocyte maturation solution,and a certain amount of ESS into fertilization medium.

关键词： Juvenile lambs Age Oocytes In vitro culture system JIVET Maturation rate Cleavage rate

Study on In-vitro Production Technology of Embryos from Young Dorper Sheep

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Agricultural Biotechnology 2019年第6期8卷 44-47,113页

作者： huidi luo Yangyi MAO Huihui GUO Li ZHANG Zhiwu WANG Zhijun WANG Jun LI Hongyu GUO Lina XUE Wenqing DANG Institute of Animal Husbandry and Veterinary Shanxi Academy of Agricultural Sciences

This study was conducted to investigate the in-vitro production technology of embryos from young Dorper sheep, so as to provide technical support for the utilization of ovarian follicles in young Dorper sheep. Tests were conducted from the induction of Dorper sheep of 4 to 8 weeks old using follicle stimulating hormone(FSH) and pregnant horse serum(PMSG), collection of oocytes, in-vitro oocyte maturation-fertilization-zygote cultivation and 2-4-cell-stage fertilized ovum transfer. The results showed that 585 oocytes were collected from eight Dorper sheep at the age of 4 and 8 weeks, with an average of 73.13 oocytes/sheep. 346 of the 2-4-cell-stage fertilized eggs were obtained, whose cleavage rate was 59.15%. 77 in-vitro fertilized eggs at 2-4-cell stage were transplanted into 17 recipient sheep, seven of which were pregnant and gave birth to 13 "test-tube sheep" with a conception rate of 41.18%. It is indicated that the hormone induction technique, in-vitro oocyte maturation-fertilization-zygote cultivation technique and 2-4-cell-stage fertilized ovum transfer technique used in this study can serve as effective techniques for the in-vitro production of embryos from Dorper sheep of 4-8 weeks old.

关键词： Young Dorper sheep In-vitro production technology of embryos In-vitro fertilization 2-4-cell fertilized ovum Test-tube sheep

Effects of β-mercaptoethanol Concentrations on Developmental Ability of Oocytes in 6-week-old Dorper Sheep

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Agricultural Biotechnology 2019年第4期8卷 92-95页

作者： Yangyi MAO huidi luo Zhiwu WANG Peng ZHAO Guanwu ZHANG Jun LI Hongyu GUO Li ZHANG Lina XUE Wenqing DANG Institute of Animal Husbandry and Veterinary Shanxi Academy of Agricultural Sciences

This study was conducted to investigate the effects of different concentrations ofβ-mercaptoethanol on the development ability of oocytes in Dorper sheep at the age of 6 *** this study,6 Dorper sheep of 6 weeks old were chosen to induce oocyte collection in vivo by gonadotropin,and A and B grade cumulus oocyte complexes were obtained(COCs)with different concentrations of(0,50,70 and 100μmol/L)ofβ-mercaptoethanol in the mature *** cleavage rate and blastocyst rate were counted after matured oocytes and capacitated sperm were co-incubated and fertilized eggs were *** results showed that compared with the cleavage rate(59.13%)and the blastocyst rate(12.17%)of the control group,the cleavage rates(60.87%,63.48%and 65.22%)and blastocyst rates(14.78%,17.39%and 21.74%)of the test groups I,II and III were higher(P>0.05),and the order was test group III>test group II>test group I>control *** cleavage rate and blastocyst rate of the 100μmol/Lβ-mercaptoethanol group increased by 6.09 percentage points and 9.57 percentage points,*** indicated that the addition of a certain amount ofβ-mercaptoethanol in the mature liquid could improve the developmental ability of oocytes and the quality of fertilized eggs of the 6-week-old Doper *** theβ-mercaptoethanol concentration was within 100μmol/L,the cleavage rate and the blastocyst rate of oocytes were on the *** optimal concentration ofβ-mercaptoethanol in the mature liquid still needs further study.

关键词： β-mercaptoethanol 6-week-old Dorper sheep Oocyte Developmental ability

杜寒绵羊多胎性能候选基因BMPR-1B和BMP15的研究

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中国畜牧兽医 2018年第5期45卷 1312-1318页

作者：郭慧慧李俊罗惠娣牛晋国山西省农业科学院畜牧兽医研究所太原030032

为了从分子水平探讨杜寒绵羊的多胎机制,本试验在山西省某养殖场采集了87只经产杜寒母绵羊的耳组织,选取骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)和骨形态发生蛋白受体1B(bone morphogenetic protein receptor 1B,BMPR-... 详细信息

为了从分子水平探讨杜寒绵羊的多胎机制,本试验在山西省某养殖场采集了87只经产杜寒母绵羊的耳组织,选取骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)和骨形态发生蛋白受体1B(bone morphogenetic protein receptor 1B,BMPR-1B)为候选基因,采用PCR-SSCP、PCR-RFLP法,结合母羊产羔数与所产羊羔初生重,分析其与杜寒绵羊多胎性能的相关性。结果显示,杜寒绵羊的BMPR-1B基因在第746位碱基处发生了A→G突变,检测到3种基因型:AA、AG和GG,A等位基因频率(0.5230)略高于G等位基因(0.4770),A为优势等位基因;AG基因型频率(0.5172)高于GG(0.2184)和AA(0.2644)基因型,AG为优势基因型。χ2适合性检验显示该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态;BMPR-1B基因第864位碱基未发生突变。杜寒绵羊的BMP15基因不存在V31D和S300G位点突变。在该群体中,BMPR-1B基因A746G位点GG、AG基因型个体的产羔数极显著高于AA基因型个体(P0.05)。综上所述,BMPR-1B基因是影响杜寒绵羊繁殖性能的一个主效基因,可以作为分子标记对杜寒绵羊进行辅助育种,初步排除BMP15基因突变对杜寒绵羊多胎性能影响的可能性。

关键词：杜寒绵羊多胎性能 BMPR-1B基因 BMP15基因

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不同产羔数辽宁绒山羊各组织内参基因的筛选

黑龙江畜牧兽医 2022年第11期 1-6页

作者：薛丽娜毛杨毅罗惠娣赵鹏李俊郭慧慧张丽武守艳山西农业大学动物科学学院山西晋中030801 山西农业大学动物医学学院山西晋中030801

为了筛选不同产羔数辽宁绒山羊母羊各组织中稳定表达的内参基因,试验随机选取同期发情后的4岁产单羔和双羔母羊各3只,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、下丘脑、垂体、子宫角、卵巢,取各器官部分组织提取总RNA,检测总RNA浓度和... 详细信息

为了筛选不同产羔数辽宁绒山羊母羊各组织中稳定表达的内参基因,试验随机选取同期发情后的4岁产单羔和双羔母羊各3只,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、下丘脑、垂体、子宫角、卵巢,取各器官部分组织提取总RNA,检测总RNA浓度和纯度后合成cDNA,设计U6、ACTβ、B2M、18S rRNA、GAPDH、RPLPO内参基因引物,检测各引物的特异性和扩增效率,采用实时荧光定量PCR方法检测6个常见内参基因在以上组织中的表达情况,通过geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFin-der软件综合筛选出稳定表达的内参基因,并用geNorm软件分析最佳内参基因个数。结果表明:提取到的总RNA浓度和纯度较高,设计的引物特异性和扩增效率(96.53%~107.23%)较好,各内参基因在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中均大量表达,且表达水平存在差异,Ct值在8.18~17.61之间。经geNorm、NormFinder、BestKeeper软件筛选发现不同产羔数辽宁绒山羊母羊性腺轴组织和全部组织中最稳定的内参基因不同,可能是软件算法不同造成的;经geNorm软件分析,最佳内参基因个数均为2个。经RefFinder软件分析在下丘脑中最稳定的内参基因组合是RPLPO和B2M基因,垂体中最稳定的内参基因组合是RPLPO和U6基因,卵巢中最稳定的内参基因组合是RPLPO和GAPDH基因,子宫角中最稳定的内参基因组合是GAPDH和18S rRNA基因。说明在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中及性腺轴下丘脑、垂体、卵巢、子宫角各组织中最稳定的内参基因的组合分别为是U6和RPLPO,RPLPO和B2M,RPLPO和U6,RPLPO和GAPDH,GAPDH和18S rRNA。

关键词：不同产羔数辽宁绒山羊母羊性腺轴表达量内参基因筛选

不同日粮对育肥羔羊产肉性能、胴体品质及复胃发育的影响

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饲料工业 2021年第7期42卷 21-26页

作者：毛杨毅罗惠娣赵鹏李俊郭宏宇王宏浩薛丽娜李希山西农业大学动物科学学院山西太原030032

试验旨在研究不同日粮对育肥羔羊的产肉性能、胴体品质和复胃发育的影响,为羔羊育肥和优质羔羊肉的生产提供技术参考。试验采用单因子随机分组设计,将80只2.5月龄16 kg左右蒙系断奶公羔按体重分为两组,每组40只羔羊,在同一羊舍分栏饲喂... 详细信息

试验旨在研究不同日粮对育肥羔羊的产肉性能、胴体品质和复胃发育的影响,为羔羊育肥和优质羔羊肉的生产提供技术参考。试验采用单因子随机分组设计,将80只2.5月龄16 kg左右蒙系断奶公羔按体重分为两组,每组40只羔羊,在同一羊舍分栏饲喂,预试期15 d,试验期153 d。试验组羔羊饲喂精粗比为66.***.33.50的自制全混合日粮,对照组羔羊饲喂全精料日粮(养殖户自配日粮)。试验结束后对体重大的60只羔羊(30只/组)进行屠宰,测定其产肉性能和复胃发育指标。结果显示,对照组育肥羔羊的干物质采食量极显著高于试验组(P0.05),但对照组的GR值和尾重高于试验组,去尾屠宰率和后腿肉重低于试验组;试验组瘤胃、网胃、瓣胃的各项发育指标和胃重量指数均高于对照组,皱胃则低于对照组,但两组间差异不显著(P>0.05)。由此可见,适宜精粗比的全混合日粮符合育肥羔羊消化特点,育肥效益好;用全精料日粮育肥羔羊,采食量大,营养过剩,生产的羔羊肉脂肪多,在一定程度上影响羔羊的胴体品质及胴体分割加工利用率。

关键词：全混合日粮全精料日粮育肥羔羊产肉性能胴体品质复胃发育

饲粮组成对育肥羔羊肠道微生物菌群结构的影响

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畜牧与兽医 2022年第2期54卷 27-35页

作者：李希毛杨毅罗惠娣赵鹏李俊周胜花郭慧慧王宏浩山西农业大学动物科学学院山西太原030032

为研究饲粮组成改变对育肥羔羊肠道菌群结构及多样性的影响,选择生长发育良好、体重相近的2月龄蒙系公羔羊76只,随机分成2组,每组38只,分别饲喂不同的饲粮,对照组为精料+苜蓿饲粮,处理组为精料+全株玉米青贮+苜蓿+花生秧的全混合饲粮,... 详细信息

为研究饲粮组成改变对育肥羔羊肠道菌群结构及多样性的影响,选择生长发育良好、体重相近的2月龄蒙系公羔羊76只,随机分成2组,每组38只,分别饲喂不同的饲粮,对照组为精料+苜蓿饲粮,处理组为精料+全株玉米青贮+苜蓿+花生秧的全混合饲粮,试验期122 d,其中预试期20 d。试验结束后,每组随机选取4只羔羊屠宰并采集小肠及盲肠内容物,通过16S rDNA测序技术分析其菌群结构变化。结果显示:饲粮改变对羔羊肠道微生物在Alpha多样性指标上无显著性影响(P>0.05)。在门水平上,处理组相比对照组小肠的变形菌门(Proteobacteria)比例降低,放线菌门(Actinobacteria)比例升高(P>0.05);在属水平上,处理组小肠的双歧杆菌属(Bifidobacterium)和盲肠的普雷沃氏菌属(Prevotella;)相对丰度较对照组升高,但差异均不显著(P>0.05)。综上所述,饲粮组成改变对育肥羔羊肠道微生物菌群产生了一定的影响,适量改变饲粮中中性洗涤纤维(NDF)的比例有促进育肥羔羊小肠中双歧杆菌属和盲肠中普雷沃氏菌属等有益细菌增殖的趋势,对提高育肥羔羊总体养分的消化利用有益。

关键词：肠道菌群育肥羔羊 16S rDNA

WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞的表达及功能研究

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畜牧兽医学报 2020年第1期51卷 74-82页

作者：薛丽娜毕锡麟王锴党文庆韩琦罗惠娣曹宁贤吕丽华山西农业大学动物科技学院太谷030801 山西省农业科学院畜牧兽医研究所太原030032 山西省畜禽繁育工作站太原030001

旨在探究WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞(GCs)中的表达及功能。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,免疫组化技术检测WNT2蛋白在卵泡中的表达定位;qRT-PCR及Western blot技术检测其在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达差异;siRNA沉默... 详细信息

旨在探究WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞(GCs)中的表达及功能。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,免疫组化技术检测WNT2蛋白在卵泡中的表达定位;qRT-PCR及Western blot技术检测其在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达差异;siRNA沉默GCs中的Wnt2基因后,qRT-PCR技术检测Wnt2基因及参与经典WNT信号通路关键基因CTNNB1的相对表达量,并测定GCs凋亡情况。结果表明:1)WNT2蛋白在绵羊卵泡内膜细胞、颗粒细胞以及卵丘细胞内均有表达。2)qRT-PCR及Western blot结果基本一致,均表明Wnt2 mRNA及蛋白在不同发育阶段卵泡颗粒细胞表达差异显著(P<0.05),且在大卵泡颗粒细胞内表达量显著高于中卵泡颗粒细胞(P<0.05),中卵泡颗粒细胞内表达量显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.05)。3)基因沉默后,沉默组Wnt2和CTNNB1的表达量均显著低于无义序列siRNA组(NC组)以及空白对照组(P<0.05),而Wnt2基因沉默组细胞凋亡率显著高于其他两组(P<0.05)。综上表明,WNT2是通过WNT2/CTNNB1信号通路促进绵羊卵泡颗粒细胞生物学功能的。

关键词：绵羊卵泡颗粒细胞 WNT2 Wnt/β-catenin信号通路

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特克赛尔羊JIVET技术研究

畜牧与兽医 2018年第7期50卷 14-17页

作者：毛杨毅罗惠娣李希赵鹏李俊吴苏君王志武张冠武郭宏宇田晖山西省农业科学院畜牧兽医研究所

探讨特克赛尔羊JIVET（juvenile in vitro embryo technology）技术,为优种绵羊JIVET技术体系完善提供技术支撑。试验对4-8周龄特克赛尔羊超数排卵,采用活体采卵的方法及对卵母细胞的体外成熟—受精—受精卵培养—受精卵移植的方法进行... 详细信息

探讨特克赛尔羊JIVET（juvenile in vitro embryo technology）技术,为优种绵羊JIVET技术体系完善提供技术支撑。试验对4-8周龄特克赛尔羊超数排卵,采用活体采卵的方法及对卵母细胞的体外成熟—受精—受精卵培养—受精卵移植的方法进行特克赛尔羊JIVET技术研究。结果显示：4只4-8周龄特克赛尔羊获得可用卵母细胞296枚,平均74枚/只;获得2-4细胞期受精卵205枚,卵裂率为69.26%,平均获2-4细胞期受精卵51.25枚/只;将66枚2-4细胞期受精卵移植给11只受体羊,6只羊受孕,生产11只羔羊,受胎率为54.55%。研究表明,本试验方法可作为特克赛尔羊JIVET技术研究的方法。

关键词：特克赛尔羊 JIVET技术体外受精 2-4细胞期受精卵试管羊