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Building multipurpose nano-toolkit by rationally decorating NIR-Ⅱ fluorophore to meet the needs of tumor diagnosis and treatment

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Chinese Chemical Letters 2022年第7期33卷 3478-3483页

作者： Chaoxiang Cui Jiachen Li Jing Fang Yan Zhao Yuqi Zhang Shuyue Ye Anna Wang Yali Feng Qiulian Mao Hongni Qin Haibin Shi State Key Laboratory of Radiation Medicine and Protection School for Radiological and Interdisciplinary Sciences(RAD-X)and Collaborative Innovation Center of Radiation Medicine of Jiangsu Higher Education InstitutionsSoochow UniversitySuzhou 215123China Suzhou Industrial Park Institute of Services Outsourcing Suzhou 215123China

Phototheranostics have attracted tremendous attention in cancer diagnosis and treatment because of the noninvasiveness and promising effectiveness.Developing advanced phototheranostic agents with long emission wavelength,excellent biocompatibility,great tumor-targeting capability,and efficient therapeutic effect is highly desirable.However,the mutual constraint between imaging and therapeutic functions usually hinders their wide applications in biomedical field.To balance this contradiction,we herein rationally designed and synthesized three novel tumor-targeted NIR-Ⅱ probes(QR-2PEG_(321),QR-2PEG_(1000),and QR-2PEG_(5000)) by conjugating three different chain lengths of PEG onto an integrin α_(v)β_(3)-targeted NIR-Ⅱ heptamethine cyanine fluorophore,respectively.In virtue of the essential amphiphilic characteristics of PEG polymers,these probes display various degree of aggregation in aqueous buffer accompanying with differential NIR-Ⅱ imaging and photothermal(PTT) therapeutic performance.Both in vitro and in vivo results have demonstrated that probe QR-2PEG_(5000) has the best NIR-Ⅱ imaging performance with prominent renal clearance,whereas QR-2PEG_(321)possesses excellent photoacoustic signal as well as PTT effect,which undoubtedly provides a promising toolbox for tumor diagnosis and therapy.We thus envision that these synthesized probes have great potential to be explored as a toolkit for precise diagnosis and treatment of malignant tumors.

关键词： Phototheranostics NIR-Ⅱprobe Cyanine fluorophore Photoacoustic imaging Photothermal therapy

校企协同背景下高职院校基因工程技术课程改革探索与实践

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科教导刊 2023年第3期 124-126页

作者：吴凡覃鸿妮谢钰珍张勇苏州工业园区服务外包职业学院江苏苏州215123

文章基于校企协同深入合作之大趋势,围绕职业教育与产业、行业对接的需求,以已有的国家级工程协同创新中心和区域生物医药公共实训基地为支撑,联合省级产教融合型试点企业共建生物医药产业学院,共同开展“基因工程技术”课程改革,通过... 详细信息

文章基于校企协同深入合作之大趋势,围绕职业教育与产业、行业对接的需求,以已有的国家级工程协同创新中心和区域生物医药公共实训基地为支撑,联合省级产教融合型试点企业共建生物医药产业学院,共同开展“基因工程技术”课程改革,通过介绍在课程设计、教学实施、学业评价等方面的具体做法,以期为地方院校相课程改革提供参考,切实提高区域人才培养质量。

关键词：课程改革校企协同课堂生态基因工程

慢病毒载体介导稳定表达Cas9基因的293T细胞系构建及其基因编辑效率验证

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2020年第4期41卷 29-35,45页

作者：覃鸿妮谢钰珍杨晨晨张勇苏州工业园区服务外包职业学院高通量基因测序工程技术研发中心江苏苏州215123 金唯智生物科技有限公司江苏苏州215123

为通过慢病毒感染细胞构建稳定表达CRISPR/Cas9的293T细胞系,实现高效率基因编辑,PCR扩增Cas9基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共感染293FT细胞,48 h后收集病... 详细信息

为通过慢病毒感染细胞构建稳定表达CRISPR/Cas9的293T细胞系,实现高效率基因编辑,PCR扩增Cas9基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共感染293FT细胞,48 h后收集病毒并浓缩纯化测定其病毒滴度,最后用纯化后的病毒感染293T细胞,通过抗性和荧光标记筛选得到稳定表达Cas9的细胞系,并对单克隆细胞进行DNA、RNA特异性和反转录验证。针对ABCG4基因设计sgRNA并构建重组载体感染单克隆细胞,通过DNA特异性和T7E1酶切验证基因敲除效率。结果表明:成功构建了Cas9-pLent慢病毒载体,用构建成功的慢病毒载体对293FT细胞进行慢病毒包装(三质粒系统)并对包装成功的病毒进行了浓缩与纯化,最后通过病毒感染293T细胞,采用荧光观察的方式测定其病毒滴度均在106 TU·mL-1之上。用纯化后的病毒感染293T细胞并通过加药(Puro)进行抗性筛选,筛选出3株能稳定表达Cas9的293T细胞系,目的基因ABCG4的基因编辑功能验证表明其中1株T7E1酶切掉带明显,sgRNA靶向敲除效率较高,该株命名为Cas9-293T-10A。该研究建立了稳定表达Cas9的293T细胞系,可用于目的基因的高效敲除。

关键词： CRISPR/Cas9 慢病毒载体细胞系基因编辑

全球性想并且局部地行动: 在国际竞技场的中国人的地理学者的声音

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Journal of Geographical Sciences 2016年第8期26卷 1001-1018页

作者： ZHU Hong WEI hongni School of Geography and Planning Sun Yat-sen University Guangzhou 510275 China School of Geography South China Normal University Guangzhou 510631 China

With the help of the mapping software Citespace and based on analysis of international human geographers＇ journal outputs in terms of countries of residence, institutions, journals and key topics, this article demonstrates Chinese scholars＇ contributions to both top and regional journals in the field. The analysis shows that Anglophone geographers have been leading the development of human geography. It also demonstrates that human geographers have taken a more micro and dynamic perspective to explain environmental and social phenomena, rather than a macro and narrative approach. Scholars tend to focus more on daily life, with research topics such as home, food, body and other micro-material matters. The analysis further finds that emotional geography, geography of embodiment, food geography as well as non-representational theory have drawn increasing attention from researchers. People＇s perceptions of nature have been constructed through the development and negotiation of social relations. As China becomes more visible internationally in the context of a highly globalized and mobile world, increasing numbers of Chinese geographers have become involved in research on human geography. Some representative scholars and institutions, especially those based in Hong Kong, act as academic leaders by articulating their own voices to tell the unique Chinese story internationally through the publication of their research.

关键词： Citespace analysis globalization research dissemination China

基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建PD-L1-GFP报告基因HT29细胞株

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山东理工大学学报（自然科学版） 2024年第2期38卷 67-72页

作者：谢钰珍覃鸿妮吴凡孙曙光孟丽君苏州工业园区服务外包职业学院生物科技学院江苏苏州215123 江苏省精准诊疗药物创制工程研究中心(苏州大学) 江苏苏州215000 苏州东岭生物技术有限公司江苏苏州215123

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术在PD-L1基因的特定位置敲入绿色荧光蛋白(GFP)序列,构建含有PD-L1-GFP报告基因的结肠癌细胞(HT29)稳定细胞株。根据CRISPR-Cas9靶点设计原则,针对PD-L1基因终止密码子设计两对sgRNA,退火形成... 详细信息

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术在PD-L1基因的特定位置敲入绿色荧光蛋白(GFP)序列,构建含有PD-L1-GFP报告基因的结肠癌细胞(HT29)稳定细胞株。根据CRISPR-Cas9靶点设计原则,针对PD-L1基因终止密码子设计两对sgRNA,退火形成双链后连接至Lenti-V2空载质粒中,转化培养后提取质粒并测序验证。对于正确的Lenti-V2-sgRNA重组质粒,T7E1酶切验证其基因编辑效率。根据靶点位置设计左同源臂+GFP+右同源臂序列合成Donor片段,双酶切后连接至pUC19,重组载体转化扩增后同样进行质粒提取和测序验证。将验证成功的Lenti-V2-sgRNA和pUC19-donor-GFP共转染HT29细胞,荧光显微镜检测GFP表达情况,菌落PCR及基因测序验证GFP报告基因的靶向插入效果。经酶切和测序鉴定,靶向编辑PD-L1的Cas9载体Lenti-V2-gRNA和含GFP基因的Donor质粒pUC19-donor-GFP构建成功。两个重组质粒转染HT29细胞后,显微观察、多克隆验证、单克隆筛选及鉴定结果显示,GFP成功转入HT29细胞并进行了表达,经有限稀释法筛选出的单克隆细胞荧光均一,且与对照组相比,阳性细胞克隆的基因组PCR均检测到特异条带,表明在PD-L1终止密码子前成功插入了GFP片段,细胞株构建成功。通过基因编辑技术成功构建了稳定表达PD-L1-GFP报告基因的HT29结肠癌细胞株,建立了一个可以直观在细胞上观察PD-L1是否表达以及表达的强弱程度的系统,为后期体内外筛选调控PD-L1的上游新靶点及药物奠定了基础。

关键词： PD-L1 CRISPR/Cas9 报告基因 GFP

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汉语词汇化研究的发展历程

上海师范大学学报（哲学社会科学版） 2009年第5期38卷 106-112页

作者：刘红妮复旦大学中文系上海200433

词汇化是语言演变的重要方面,关于汉语词汇化研究概况还有很大的不足。从先秦迄今,汉语词汇化研究的发展历程可以分为启蒙和萌芽、准备和过渡、探索和前进、正式产生和蓬勃发展四个阶段。汉语词汇化研究的发展历程表明,现代语言学研究... 详细信息

词汇化是语言演变的重要方面,关于汉语词汇化研究概况还有很大的不足。从先秦迄今,汉语词汇化研究的发展历程可以分为启蒙和萌芽、准备和过渡、探索和前进、正式产生和蓬勃发展四个阶段。汉语词汇化研究的发展历程表明,现代语言学研究一定要重视对潜在的传统文化的传承,在注重古今结合的基础上,也要重视中外结合、洋为中用。

关键词：汉语词汇化语言演变

利用CRISPR/Cas9技术构建能克隆难度序列的Stbl2^(TM)菌株

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2022年第5期43卷 87-93,100页

作者：覃鸿妮谢亦潇汤淑伟薛高旭谢悦张勇苏州工业园区服务外包职业学院生物科技学院江苏苏州215123 金唯智生物科技有限公司江苏苏州215123 瑞特佰生物科技有限公司江苏苏州215123

Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效... 详细信息

Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效率。针对2个基因分别设计sgRNA,构建含有sgRNA的质粒pTarget-fhuA和pTarget-pcnB,分别将2个质粒与pCas9-Red质粒转入Stbl2^(TM)菌株中,经菌落PCR和测序验证基因正确编辑后再将2个外源质粒消除,并将2 kb的线粒体基因组序列作为外源基因,转入菌株进行最终的功能验证。结果表明:fhuA基因被成功敲除103 bp,pcnB基因被成功敲除802 bp,将高拷贝pUC57质粒转入基因编辑后的Stbl2^(TM)菌株,可明显降低质粒的拷贝数,且能正确克隆线粒体基因难度序列。该研究构建的菌株可作为后续克隆难度序列的感受态使用,还可为难度序列的基因克隆提供借鉴方法。

关键词： CRISPR/Cas9技术 Stbl2^(TM)菌株 fhuA基因 pcnB基因

连-介兼类词“由于”的历时演变及其路径--兼谈“由于”与“因为”的异同

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语文研究 2022年第4期 31-39页

作者：刘红妮上海师范大学人文学院上海200234

“由于”在现代汉语中是一个连-介兼类词。历史上“由于”原本是“动词+介词”的跨层结构,先词汇化为因果连词,又从连词语法化为介词。文章探讨了“由于”的跨层词汇化和语法化再演变的演变路径及其动因、机制,还从词汇化和语法化角度... 详细信息

“由于”在现代汉语中是一个连-介兼类词。历史上“由于”原本是“动词+介词”的跨层结构,先词汇化为因果连词,又从连词语法化为介词。文章探讨了“由于”的跨层词汇化和语法化再演变的演变路径及其动因、机制,还从词汇化和语法化角度简要探讨了“由于”和“因为”的异同。

关键词：连-介兼类词由于演变路径跨层词汇化语法化因为

双胎妊娠合并糖尿病孕妇饮食管理体验和需求的质性研究

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护理研究 2022年第24期36卷 4491-4494页

作者：高红妮山西省儿童医院(山西省妇幼保健院) 山西030006

目的:了解双胎妊娠合并糖尿病孕妇饮食管理的体验及实际需求,以期为临床饮食干预提供依据。方法:采用目的抽样法选取太原市某三级甲等医院12例双胎妊娠合并糖尿病孕妇为研究对象,采用现象学研究方法对其进行半结构式访谈,根据Colaizzi7... 详细信息

目的:了解双胎妊娠合并糖尿病孕妇饮食管理的体验及实际需求,以期为临床饮食干预提供依据。方法:采用目的抽样法选取太原市某三级甲等医院12例双胎妊娠合并糖尿病孕妇为研究对象,采用现象学研究方法对其进行半结构式访谈,根据Colaizzi7步分析法分析资料。结果:双胎妊娠合并糖尿病孕妇妊娠期饮食管理的体验包括饮食控制效果不佳、担心会导致并发症、社会支持很重要;饮食管理需求包括入院前希望得到有针对性的饮食指导、希望了解相关疾病的科普知识、希望数字网络平台发布更多科学知识。结论:了解双胎妊娠合并糖尿病孕妇饮食管理体验及需求有助于调节孕妇负性情绪,多途径进行饮食管理,满足孕妇实际需求。

关键词：双胎妊娠妊娠期糖尿病饮食管理体验需求质性研究