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基于单个B细胞抗体制备技术研制全犬源犬瘟热病毒h.白单克隆抗体

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基于单个B细胞抗体制备技术研制全犬源犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体

作者：穆永河南农业大学

学位级别：硕士

犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）是当前威胁犬科动物健康的重要病原体之一,该病具有较高的发病死亡率,各年龄阶段的犬均是感染对象。疫苗免疫是目前防控CDV感染的有效手段,由于免疫失败等原因造成CDV感染的犬,目前尚无用于该... 详细信息

犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）是当前威胁犬科动物健康的重要病原体之一,该病具有较高的发病死亡率,各年龄阶段的犬均是感染对象。疫苗免疫是目前防控CDV感染的有效手段,由于免疫失败等原因造成CDV感染的犬,目前尚无用于该病治疗的特效药。单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）特异性强、成分均一,作为抗体药物用于临床治疗时疗效显著,当前用于CDV辅助治疗的m Ab主要以鼠源单抗为主。鼠源单抗中的异源用于治疗时可能引起犬机体产生免疫排斥反应或过敏反应,随着人们对宠物犬健康更加关注,不含异源成分的全犬源单克隆抗体将是未来犬用抗体药物研发的主要方向。单个B细胞抗体制备技术是当前制备全人源或动物源单克隆抗体热门技术,目前该技术尚未在犬类上得到应用,因此本研究旨在利用单个B细胞抗体制备技术研制全犬源CDV单克隆抗体,为犬瘟热的治疗和研究提供新型基因工程抗体,以及为后续其他犬类病原体全犬源抗体药物的开发奠定基础。本研究主要包括以下几个方面:1、CDV h.白特异性记忆B细胞的分选与抗体基因的克隆用CDV弱毒苗对两只试验犬进行4次免疫,并对每次免疫后的血清抗体进行效价检测,选择体液免疫应答水平较高的犬分离外周血单个核细胞,并利用生物化h.白和荧光标记的犬CD分子单抗进行标记;通过流式细胞术分选抗原特异性单个记忆B细胞,利用单细胞RT-PCR技术扩增抗体重链和轻链可变区基因,最终从192个表型为CD3-/CD21+/CD27+/Ig G+/CDV h.的单个记忆B细胞中得到64条重链可变区序列（IGh.）、56条Lambda型轻链可变区序列（IGLV）及9条Kappa型轻链可变区序列（IGKV）,其中重轻链配对抗体37对。2、特异性记忆B细胞抗体可变区胚系基因多样性分析B细胞在分化发育过程中抗体基因会发生重排,形成高亲和力的B细胞抗原受体（B cell receptor,BCR）。本研究通过Ig BLASTh.IMGT/V-QUEST对测序得到的抗体重链和轻链可变区的多样性基因（Variable,V）、可变基因（Diversity,D）以及连接基因（Joining,J）的使用及重排情况,以及抗体可变区中互补决定区域（Complementarity determining region,CDR）的氨基酸分布规律进行分析,以此深入了解免疫犬BCR基因多样性形成机制。结果显示,在获得抗体基因中,IGh.胚系基因主要集中在IGh.3-38和IGh.3-19亚族,且IGh.3-38、IGh.2-1与IGh.4-1的组合为优势重排;IGLV胚系基因多样性更加丰富,IGLV1-136亚族为优势亚族,而V-J重排却多发生在IGLV3-21与IGLJ3-1。IGh.-CDR3长度主要由8～17个氨基酸肽组成,而IGLV-CDR3长度集中在11个氨基酸肽。37对配对抗体可变区基因同源进化分析结果显示,抗体重链和轻链基因分别属于多个细胞亚群。3、全犬源单克隆抗体的表达与鉴定构建了17对重链和轻链配对抗体重组表达质粒,以重链和轻链质量比2:3共转染Exip Ch.-S细胞进行抗体表达和纯化;通过Western-blot、SDS-PAGE对抗体表达及纯化情况进行鉴定,并通过ELISA、IFA以及病毒中和试验对m Ab生物学活性进行鉴定。结果显示,17株m Ab均成功表达,其中12株m Ab能被Protein A亲和层析树脂纯化;ELISA结果显示,表达17株m Ab中的10株能识别CDV h.白;IFA结果显示这10株CDV h.白m Ab均能识别转染h.白表达质粒的293细胞以及感染CDV的Vero细胞。综上所述,本研究首次建立了基于单个B细胞抗体制备技术制备全犬源单克隆抗体的技术平台,利用该技术平台筛选到10株CDV h.白特异性单克隆抗体,为后续CDV相关研究奠定了基础,也为全犬源抗体药物开发提供新方法。

关键词：犬 CDV h.白单个B细胞抗体制备技术全犬源单克隆抗体

双沟道h.(+)离子注入1550 nm高效率低噪声DFB激光器

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光学学报 2024年第16期44卷 192-197页

作者：邢政穆忠如孙天玉张宝顺中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所纳米加工平台江苏苏州215123

采用具有良好温度特性和高微分增益的AlGaInAs作为量子阱材料并进行有源区优化,通过双沟道和h.离子注入结构来限制电流的横向扩散,制备出1550 nm高效率低噪声单模AlGaInAs/InP分布式反馈(DFB)激光器。室温连续工作模式下,激光器的阈值... 详细信息

采用具有良好温度特性和高微分增益的AlGaInAs作为量子阱材料并进行有源区优化,通过双沟道和h.离子注入结构来限制电流的横向扩散,制备出1550 nm高效率低噪声单模AlGaInAs/InP分布式反馈(DFB)激光器。室温连续工作模式下,激光器的阈值电流小于40 mA,注入电流为200 mA时的斜率效率大于0.35 mW/mA,输出功率大于60 mW,相对强度噪声低于-160 dB/h.,洛伦兹线宽小于200 kh.,该器件具有较高的斜率效率和良好的噪声抑制特性。

关键词：激光器斜率效率相对强度噪声

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新劳动社会的结构

劳动经济与人力资源管理 2000年第8期

作者： h.穆茨

来源：人大复印报刊资料评论

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拟南芥TRX-h.基因的克隆和表达分析

合肥工业大学学报（自然科学版） 2024年第3期47卷 411-416页

作者：穆秀杰张林林韩毅合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥230601

硫氧还蛋白(TRX-h.是一类催化二硫键还原的小分子蛋白,在调控氧化应激响应中发挥重要作用。为了研究硫氧还蛋白的结构及其功能,文章以野生型拟南芥(Arabidopsis th.liana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录-聚合酶链式反应(reverse ... 详细信息

硫氧还蛋白(TRX-h.是一类催化二硫键还原的小分子蛋白,在调控氧化应激响应中发挥重要作用。为了研究硫氧还蛋白的结构及其功能,文章以野生型拟南芥(Arabidopsis th.liana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase ch.in reaction,RT-PCR)技术获得TRX-h.基因的编码序列(coding sequence,CDS),体外构建pET28a(+)-TRX-h.及pET28a(+)-TRX-h.M(第39位和第42位半胱氨酸位点突变)的原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,诱导后经镍柱纯化得到带有6个h.s标签的融合蛋白。通过SDS-PAGE电泳技术检测到14 kDa处的目的条带,与理论值预测一致。运用生物信息学分析得出,TRX-h.基因编码118个氨基酸,相对分子质量为13122.32,理论等电点为5.19,该蛋白的不稳定参数为26.74,属于稳定性蛋白。点突变分析发现,TRX-h.的第39位和第42位半胱氨酸位点决定了该蛋白的催化活性,为进一步探究TRX-h.的蛋白功能和高等植物氧化还原系统的研究提供了新思路。

关键词： TRX-h.基因基因克隆生物信息学分析原核表达

改性硫化钼催化剂协同低温等离子体转化h.(2)S-CO_(2)酸气制合成气的研究

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燃料化学学报（中英文） 2024年第10期52卷 1412-1425页

作者：冯文爽宇文晓萌穆晓亮赵璐房克功中国科学院山西煤炭化学研究所煤炭高效低碳利用全国重点实验室山西太原030001 中国科学院大学北京100049

以低温等离子体和催化剂耦合法将h.(2)S和CO_(2)混合酸气一步转化为合成气,既完成了两者清洁化处理,又实现了资源化利用,是一条制备合成气的新路线。本研究采用铜、锌为助剂对硫化钼催化剂改性,显著提升了其催化h.(2)S-CO_(2)制合成气... 详细信息

以低温等离子体和催化剂耦合法将h.(2)S和CO_(2)混合酸气一步转化为合成气,既完成了两者清洁化处理,又实现了资源化利用,是一条制备合成气的新路线。本研究采用铜、锌为助剂对硫化钼催化剂改性,显著提升了其催化h.(2)S-CO_(2)制合成气反应性能。结合多种分析表征手段对比两种助剂引入后对硫化钼催化剂结构、组成、形貌、化合价态等物化特征的影响。通过控制低温等离子体放电条件,深入探究了两种助剂对低温等离子体下催化转化h.(2)S和CO_(2)酸气制合成气的反应性能影响规律和关键因素。研究发现,引入铜、锌助剂后,硫化钼活性相粒径减小且分散度高,提供了更多活性位点。同时也增强了对h.(2)S和CO_(2)分子吸附强度,从而更利于h.(2)S和CO_(2)分子的吸附活化,揭示出低温等离子体与改性硫化钼催化剂协同反应的构效关联。有关理论研究丰富拓展了低温等离子体-催化协同理论,并为改性硫化钼材料的合成提供借鉴。

关键词：硫化氢二氧化碳合成气改性MoS_(2)催化剂低温等离子体

艺术家的主权:关于法律格言和文艺复兴艺术理论的批注

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中世纪与文艺复兴研究 2024年第1期 129-151页

作者：恩斯特·h.康托洛维茨刘寅(译) 不详浙江大学历史学院

文艺复兴的诗歌和艺术理论与中世纪法学家的专业学说之间存在很强的可类比性。“艺术模仿自然”是亚里士多德的格言。然而,中世纪还有使此学说获得传播的文学渠道,即罗马法。根据中世纪罗马法和教会法注释传统,立法者因为“依据职权”... 详细信息

文艺复兴的诗歌和艺术理论与中世纪法学家的专业学说之间存在很强的可类比性。“艺术模仿自然”是亚里士多德的格言。然而,中世纪还有使此学说获得传播的文学渠道,即罗马法。根据中世纪罗马法和教会法注释传统,立法者因为“依据职权”模仿自然被视为艺术家。属灵的或世俗的立法者这一主权职位“依据职权”而获得能力和特权。基于对等比较,诗人--最终是艺术家全体--“依据天赋”而享有个体性的且纯粹属人的能力和特权。身为人--强调意义上的“人”--变成了一项职权。

关键词：文艺复兴艺术理论艺术家中世纪罗马法教会法彼特拉克

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典型喀斯特流域重金属污染评价及来源解析

典型喀斯特流域重金属污染评价及来源解析

作者：穆地金贵州师范大学

学位级别：硕士

在全球范围内,随着工业的不断发展,重金属污染不断增加,人类面临着水和土壤资源在数量和质量方面的巨大威胁。与其他地区相比,中国西南喀斯特地区水文环境复杂,土壤资源短缺,生态环境脆弱,且具有高重金属地球化学背景,对重金属污染更为... 详细信息

在全球范围内,随着工业的不断发展,重金属污染不断增加,人类面临着水和土壤资源在数量和质量方面的巨大威胁。与其他地区相比,中国西南喀斯特地区水文环境复杂,土壤资源短缺,生态环境脆弱,且具有高重金属地球化学背景,对重金属污染更为敏感。因此,系统研究喀斯特流域重金属污染、来源及风险对喀斯特地区重金属污染防治有重要意义。本研究以西南地区一典型喀斯特流域为研究对象,分析测试流域水体、沉积物、土壤和基岩中的9种重金属（Cr、Mn、Ni、Cu、Zn、As、Cd、Sb、Pb）和相关物理化学参数,以及测试沉积物、土壤和基岩中重金属的地球化学形态。通过多元统计分析研究流域水体、沉积物和土壤重金属特征;采用单因子污染指数法、水质指数法、地积累指数法和内梅罗指数法研究流域重金属污染情况;使用受体模型解析各介质中重金属的来源,并将来源解析结果与风险评价结合,评价特定来源重金属的生态风险和健康风险;使用多元统计分析研究喀斯特水体重金属的影响因素。主要结果如下:（1）在研究时段内,该典型喀斯特流域旱季和雨季的水体均呈弱碱性特征,雨季的As、Cd、Pb和旱季的As是影响水质的主要元素,并主要分布在流域上游。流域表层沉积物p h.碱性,沉积物中Cd、As、Zn的平均含量均高于喀斯特地区水系沉积物背景值,并且As（27.69%）和Cd（12.17%）的可交换态相对较高。在分布上,表层沉积物重金属主要在下游沉积环境中富集,沉积柱芯的重金属整体表现出自下而上增加的趋势。流域土壤主要呈酸性,土壤中As和Cd的平均含量分别是区域土壤背景值的2.1倍和2.8倍。土壤重金属与基岩重金属相比,土壤中Cr、Mn、Cu、Zn、Cd、Sb、Pb表现出明显的富集性。金属形态上,土壤中As（34.74%）和Cd（16.15%）的可交换态均较高。土壤中Cd、Sb、Pb在流域南部人类活动密集区较为富集,其余金属在流域上游工业区附近以及下游的浓度较高。（2）喀斯特流域水体、沉积物和土壤重金属可能的来源能被绝对主成分得分—多元线性回归模型（APCS-MLR）更好地识别并量化。在流域水体中,旱季和雨季均主要受3种类型的来源影响。在旱季,自然源对Cr、Ni、Cu的贡献率大于80.71%;工业废弃物排放源对Zn、As、Cd的贡献率大于63.47%;金属冶炼排放源对Mn、Sb、Pb的贡献率大于46.92%。在雨季,工业废弃物排放源对Cu、Zn、As、Cd、Pb的贡献率大于51.22%;金属冶炼排放源对Mn、Ni、Sb的贡献率大于53.06%;Cr（74.33%）主要来源于自然。在沉积物中,金属冶炼和自然的混合源对Cr、Mn、Ni、Zn、Sb、Pb的贡献率在57.19%-98.76%之间;工业废弃物排放源对As、Cd的贡献率分别为83.10%、82.50%;交通运输、金属冶炼和自然的混合源主要贡献了Cu（83.90%）。在土壤中,自然和工业的混合源对Cr、Mn、Ni、Cu、Zn、As的贡献率在76.45%—99.60%之间;自然和采矿的混合源对Cd、Sb、Pb的贡献率在46.34%—82.76%之间。（3）在研究时段内,单因子污染指数表明,旱季流域92.86%的水体未受重金属污染,7.14%的水体受到轻度As污染;雨季26.67%的水体受轻度到重度污染,其中6.67%的水体的As和Cd为重度污染。内梅罗指数表明,旱季7.14%的样品处于轻度污染;雨季6.67%的样品处于重度污染,13.33%的样品处于轻度污染。水质指数表明,旱季所有水样和雨季93%的水样均为优质水,雨季6.67%的水样为不可饮用水。单因子污染指数表明,流域表层沉积物中Cd为重度污染水平,As和Zn为轻度污染。表层沉积物的内梅罗指数在1.41-71.60之间,即所有表层沉积物样品均受到不同程度重金属污染,其中72.73%的样品为重度污染。单因子污染指数表明,流域土壤主要受中度Cd和As污染。土壤重金属内梅罗指数在0.92-6.79之间,其中21.95%的土壤为重度污染水平,主要分布在上游工业园区和南部人类活动密集区附近,另有21.95%的土壤处于中度污染,53.66%的土壤处于轻度污染。（4）在研究时段内,流域旱季的水体重金属对成人有中等致癌风险;雨季的水体重金属对人体有较高非致癌风险,对儿童和成人具有中等至高致癌风险。在雨季,水体重金属对儿童和成人的非致癌风险（52.57%、52.42%）和致癌风险（48.80%、48.66%）主要来自工业废弃物排放源;在旱季,水体重金属对儿童和成人的非致癌风险（49.40%、47.20%）主要受工业废弃物排放源影响,致癌风险（64.89%、67.26%）主要来自自然源。流域45.45%的沉积物样品中的Cd有极高生态风险。另外,综合生态风险评价表明,分别有36.36%、18.18%、18

关键词：喀斯特流域重金属高地球化学背景污染评价来源解析

Bi7Fe2Ti2O17Cl的可控制备及其光催化性能研究

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Bi7Fe2Ti2O17Cl的可控制备及其光催化性能研究

作者：穆志超盐城工学院

学位级别：硕士

半导体光催化技术具有高效、绿色、经济、环保等优势,是解决能源危机和环境污染问题最具应用前景的技术之一。传统光催化剂（例如Ti O、Zn O等）带隙较宽,只能对太阳光谱约5%的紫外光进行响应,太阳光利用率低,限制了在能源和环境领域的... 详细信息

半导体光催化技术具有高效、绿色、经济、环保等优势,是解决能源危机和环境污染问题最具应用前景的技术之一。传统光催化剂（例如Ti O、Zn O等）带隙较宽,只能对太阳光谱约5%的紫外光进行响应,太阳光利用率低,限制了在能源和环境领域的广泛应用。Sillén-Aurivillius型铋（Bi）基卤氧化物因其独特的电子结构和晶体结构、合适的带隙、优异的化学稳定性等优点,在光催化领域受到普遍关注。然而,传统Bi基卤氧化物光催化材料因载流子分离效率低、表界面动力学缓慢和导电性差等问题,严重影响了其光催化活性。为了解决上述问题,本论文以Sillén-Aurivillius型半导体材料BiFeTiOCl为模板,通过缺陷工程、形貌工程、表面电荷调控等策略,强化光生载流子的分离和传输,揭示光催化机制机理,具体研究内容如下:通过超声波辅助技术在BiFeTiOCl材料中引入了氧空位。研究表明,在超薄BiFeTiOCl纳米片中,氧空位形成了施主能级,有效降低了光催化剂带隙,拓宽了光谱响应范围,增强了光吸收性能。最终,BiFeTiOCl的光催化CO还原和降解罗丹明B（Rh.B）的效率分别提高了2.16倍和3.87倍。捕获实验表明空穴（h.和超氧自由基（·O）是光催化氧化还原反应中的主要活性物种。能带结构分析表明,超薄BiFeTiOCl纳米片具有更负的导带,更易产生·O,进而提高材料的光催化性能。为提高光生载流子的分离效率,采用一步煅烧法将BiFeTiOCl与BiOCl进行耦合,构建BiOCl/BiFeTiOCl复合材料。对比不同质量比的复合材料,发现质量比为5%的BiOCl/BiFeTiOCl复合材料展现出最佳的光催化性能。优异的光催化性能归因于特殊的S型异质结构,有助于光生电子和空穴的分离和转移,同时增强了光吸收能力。ESR证实,催化过程中的主要活性物种是BiOCl的价带上产生的光生空穴和BiFeTiOCl的导带上产生的超氧自由基。这项工作旨在通过Bi基卤氧化物提供一种新的异质结构,以提高BiFeTiOCl的光催化活性。金属Ag团簇能够降低了BiFeTiOCl中氧空位形成能。通过光还原技术将金属Ag团簇负载BiFeTiOCl纳米片上,并成功引入氧空位。含有5 wt%Ag团簇掺杂的Ag/BiFeTiOCl纳米片光催化性能最佳。氧空位导致材料费米能级上移,同时在带隙中引入了缺陷能级,减小带隙,从而提高了材料的光吸收能力。负载的Ag团簇在BiFeTiOCl纳米片表面引发了局域表面等离子体共振（SPR）效应,显著增强了可见光的吸收能力。此外,Ag团簇在催化过程中充当电子陷阱,促进了光生载流子的分离和迁移。这项工作旨在通过金属团簇改性光催化材料,以获得高光催化活性。

关键词： Sillén-Aurivillius卤氧化物光催化技术氧空位异质结 Ag团簇