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The thymidylate kinase gene homologues identified from various jujube witches'-broom phytoplasma isolates infecting different jujube cultivars in China

The thymidylate kinase gene homologues identified from vario...

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第三届中国森林保护学术大会

作者： Qicong Xu~(1,2) guozhong tian~(1**) Caili Lin~1 Yong Li~1 Chungen Piao~1 1 Research Institute of Forest Ecology,Environment and Protection,Chinese Academy of Forestry,Beijing 100091,China 2 International Nature Farming Research Center,5632 Hata,Nagano 390-1401,Japan

Thymidylate kinase(TMK,EC 2.***.4.9) that catalyses the transfer of a terminal phosphoryl group from ATP to dTMP,is crucial to both the de novo synthetic and the salvage pathways for pyrimidine *** types of thymidylate kinase genes,tmkX,tmkY and tmkZ(TMK gene),of the phytoplasma associated with jujube witches’-broom disease(JWB) were identified by means of sequence analyses as well as RFLP and SSCP of the specific PCR products in thirty four JWB infected jujube samples collected from different cultivars with diverse geographic origins and resistance to the JWB in *** and tmkY gene sequences were identified in many jujube cultivars from different regions, whereas tmkZ was only found in BJLZ strain infecting an aged dragon jujube from Beijing,which contained tmkX sequence as *** and tmkY have the closest relationship with tmk-a gene (AB010446) in OY-W strain of onion yellows and tmkZ have the closest relationship with one of tmk gene copies in genome of OY-M(AP006628,from 391588 to 392202).Amino acid sequence analyses showed that all the three deduced proteins TMKx,TMKy and TMKz of tmkX,tmkY and tmkZ contained conserved motifs for catalytic *** collected JWB isolates inhabiting different resistanct cultivars against the phytoplasma could be mainly classified into three types,typeX,typeY and typeXY,containing tmkX gene, tmkY gene and both tmkX and tmkY genes,*** portion of typeXY strains were detected than typeX and Y from the collection of JWB *** with mere typeX or typeY sequeces seem to be frequenctly in association with susceptible cultivars,while the typeXY strain was likely to be much related to resistant *** is assumed that the formation and distribution of different tmk genotype clusters among JWB strain population might be related to the phytoplasmal gene duplication and the selection by the infected cultivars and geographical environment as well as the gene recombination due to

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一种适于PCR和LAMP检测的松木中松材线虫DNA快速提取方法

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林业科学 2015年第6期51卷 100-110页

作者：苟大平王曦茁汪来发田国忠朱天辉郭民伟四川农业大学林学院雅安625014 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室北京100091

【目的】本研究旨在探索快速、简便地直接从病木中提取松材线虫DNA的方法。【方法】运用Chelex-100结合异硫氰酸胍蛋白变性缓冲液建立新的高效快速提取微量木块中线虫DNA的方法,并通过普通PCR与环介导等温扩增(LAMP)对提取的DNA进行检... 详细信息

【目的】本研究旨在探索快速、简便地直接从病木中提取松材线虫DNA的方法。【方法】运用Chelex-100结合异硫氰酸胍蛋白变性缓冲液建立新的高效快速提取微量木块中线虫DNA的方法,并通过普通PCR与环介导等温扩增(LAMP)对提取的DNA进行检测验证。【结果】建立了提取线虫DNA的新方法 Chelex-100法,并对影响提取效率的Chelex-100浓度、冻融时间和煮沸时间进行了优化。Chelex-100法最适Chelex-100终浓度为1.5%(W/V),最适冻融时间为5 min,最适煮沸时间为8 min。与传统的CTAB法和蛋白酶K法比较,Chelex-100法提取的DNA得率高,相同条件下,该方法提取的DNA浓度远远大于常规方法。3种方法的OD260/280比值从大到小依次为CTAB法>蛋白酶K法≥Chelex-100法,Chelex-100法的OD260/280值显著低于CTAB法,而略低于或等同于蛋白酶K法,但这并不影响对提取的DNA进行PCR扩增。采用Chelex-100法提取松木中松材线虫的DNA,结合常规的PCR和LAMP检测,检测灵敏度高,特异性强,稳定性好;提取的松材线虫DNA的75倍稀释液再稀释32倍后进行PCR扩增,扩增产物电泳依然有清晰的条带。用新方法提取病木中线虫的DNA后进行检测,所有带病松木样品的检测结果均呈阳性,而健康黑松、马尾松、油松木屑及盘多毛孢样品的检测结果均呈阴性。此外,该提取方法简便快速,20 min内即可完成整个DNA的提取;经济方便,试剂保藏无特殊要求,单个样品提取耗费低于3.5元。【结论】Chelex-100法是一种快速有效的提取松木中松材线虫DNA的方法,此方法结合PCR和LAMP检测技术将进一步提高松材线虫的检测效率、灵敏度和准确性,可为松材线虫的野外检测提供可靠的技术依据。

关键词：松材线虫 DNA提取 Chelex-100

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犬种布鲁菌病病原学和遗传特征分析

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中华地方病学杂志 2016年第10期35卷 707-712页

作者：田国忠郑敏崔步云朴东日赵鸿雁李兰玉姜海李军延中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布鲁菌病室北京102206 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所北京100050

目的分析相对封闭群体中犬种布鲁菌病的病原学和遗传特征.方法对北京一个实验动物基地饲养的犬进行布鲁菌病检测,包括血清学实验[试管凝集法（TAT）]、菌株鉴定（噬菌体实验和生化检测方法）.采集犬组织（肝、脾和睾丸）标本进行病理... 详细信息

目的分析相对封闭群体中犬种布鲁菌病的病原学和遗传特征.方法对北京一个实验动物基地饲养的犬进行布鲁菌病检测,包括血清学实验[试管凝集法（TAT）]、菌株鉴定（噬菌体实验和生化检测方法）.采集犬组织（肝、脾和睾丸）标本进行病理组织学检查,对菌株进行基因特征分析[16S rRNA基因测序、荧光定量PCR（RT-PCR）检测血液标本核酸DNA、基因组DNA多位点序列分型（MLST）、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析、多位点可变数目串联重复序列（MLVA）分析和IS711插入序列Southern杂交分析].结果 51.25％（41/80）的比格犬血清中存在高滴度（≥1：50）的犬种布鲁菌抗体.80份血液样本的RT-PCR核酸检测全部阳性.病犬肝、脾和睾丸组织中发现有明显的病变和病菌样细胞.血液组织分离出10株细菌,经生化检测和噬菌体实验证实为犬种布鲁菌.对菌株16S rRNA基因测序分析,结果与数据库中犬种布鲁菌完全吻合.MLST、PFGE和IS711插入序列Southern杂交分析10株菌株,基因型完全相同.MLVA分析发现,10株菌株分为2个不同的基因型.结论通过血清学、细菌学、组织学、16S rRNA基因测序、MLST、PFGE、MLVA和IS711插入序列Southern杂交全面分析一起犬种布鲁菌病爆发疫情,经MLVA分析发现,犬种布鲁菌在自然环境中,进化为两个相对稳定的MLVA基因型.

关键词：犬种布鲁杆菌基因分析

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布鲁氏菌疫苗株与标准株的比较

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中华流行病学杂志 2014年第5期35卷 613-614页

作者：王娜肖培田国忠姜海朴东日赵鸿雁孙岩赵娜呼和巴特尔崔步云内蒙古农业大学呼和浩特010018 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所呼和浩特010018

布鲁氏菌鉴定需要标准株作为对照，标准株具有高致病性。本研究对牛、羊、猪种生物Ⅰ型的标准株（544A、16M、1330S）与疫苗株（S19、M5、S2）进行比较，探索疫苗株作为对照菌株用于鉴定的可能性。

关键词：布鲁氏菌标准株疫苗株

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海沙瑞林对慢性心力衰竭大鼠心交感神经重构的影响

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解剖学杂志 2020年第2期43卷 94-98,116,F0002页

作者：王艺全周春雪李梅秀田国忠佳木斯大学解剖学教研室佳木斯154007

目的:探讨海沙瑞林对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心交感神经重构的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、心力衰竭组(HF组)和海沙瑞林干预组(HF+Hx组),应用冠状动脉结扎法制作CHF大鼠模型,HF+Hx组大鼠连续4周尾静... 详细信息

目的:探讨海沙瑞林对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心交感神经重构的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、心力衰竭组(HF组)和海沙瑞林干预组(HF+Hx组),应用冠状动脉结扎法制作CHF大鼠模型,HF+Hx组大鼠连续4周尾静脉注射海沙瑞林100μg·kg^-1·d^-1,其他3组注射等量的生理盐水。超声心动图测量左心室功能;H-E染色及Masson染色观察各组大鼠心肌病理结构变化;免疫组织化学和免疫印迹检测脑钠肽(BNP)、神经生长因子(NGF)、酪氨酸羟化酶(TH)和生长相关蛋白43(GAP43)表达。结果:海沙瑞林干预升高CHF大鼠左室射血分数,改善左心室功能,减轻HF组心肌损伤结构病理改变,降低心肌细胞内BNP表达,增加NGF、TH和GAP43表达,差异均具有统计学意义。结论:CHF大鼠存在心交感神经重构,海沙瑞林通过改变心交感神经重构,改善心功能和CHF的预后可能是其实现心保护的机制之一。

关键词：慢性心力衰竭海沙瑞林交感神经大鼠

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Tilting-Twisting-Rolling: a pen-based technique for compass geometric construction

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Science China(Information Sciences) 2017年第5期60卷 246-251页

作者： Fei LYU Feng tian guozhong DAI Hongan WANG State Key Laboratory of Computer Science Institute of Software Chinese Academy of Sciences School of Digital Media and Design Arts Beijing University of Posts and Telecommunications Beijing Key Lab of Human-Computer Interaction Institute of Software Chinese Academy of Sciences

This paper presents a new pen-based technique, Tilting-Twisting-Rolling, to support compass geometric construction. By leveraging the 3D orientation information and 3D rotation information of a pen, this technique allows smooth pen action to complete multi-step geometric construction without switching task *** from a user study show this Tilting-Twisting-Rolling technique can improve user performance and user experience in compass geometric construction.

关键词： Tilting-Twisting-Rolling pen-based tool virtual compass geometry construction interaction

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不同方法提取血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌核酸的比较

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疾病监测 2022年第7期37卷 964-966页

作者：杨晓雯刘佳音张宇范玉田国忠赵鸿雁朴东日姜海中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 包头医学院公共卫生学院内蒙古包头014040

目的比较不同提取方法对血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌检出率的影响。方法将定量检测的灭活菌液/基因组DNA梯度添加至含抗凝血的血培养瓶中,选择不同的方法提取核酸,利用荧光定量检测其含量。结果磁珠法和裂解法最低能检测添加10~2 CF... 详细信息

目的比较不同提取方法对血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌检出率的影响。方法将定量检测的灭活菌液/基因组DNA梯度添加至含抗凝血的血培养瓶中,选择不同的方法提取核酸,利用荧光定量检测其含量。结果磁珠法和裂解法最低能检测添加10~2 CFU/mL的灭活菌液以及10-3 ng/μL的基因组DNA;离心柱法无法检测未经红细胞裂解液处理的添加10~6 CFU/mL的灭活菌液以及10 ng/μL的基因组DNA,经红细胞裂解液处理后也只能检测到添加10~4 CFU/mL的灭活菌液以及1 ng/μL的基因组DNA的模拟样品。结论红细胞裂解液处理模拟样品能够增加核酸的提取量,裂解法提取效果最好,其次是磁珠法,再次是离心柱法。本研究为疑似布鲁氏菌病样品血培养物的核酸检测提供了方法参考,为提高布鲁氏菌病的诊断率提供了新的思路。

关键词：布鲁氏菌核酸提取血培养

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布鲁氏菌病患者血液中布鲁氏菌与临床症状和抗体水平关联性研究

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疾病监测 2023年第4期38卷 432-435页

作者：包桂英陈俊杰张天承朴东日赵鸿雁姜海范玉田国忠内蒙古自治区通辽市蒙医研究所内蒙古自治区通辽028000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206

目的应用巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌DNA,分析其与临床症状和抗体水平之间的关系。方法对门诊就诊患者进行个案调查,包括临床症状、既往史、接触史、用药史等。布病可疑患者,采集血液,分离血清... 详细信息

目的应用巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌DNA,分析其与临床症状和抗体水平之间的关系。方法对门诊就诊患者进行个案调查,包括临床症状、既往史、接触史、用药史等。布病可疑患者,采集血液,分离血清,进行血清试管凝集试验(SAT),检测布鲁氏菌抗体,按照《布鲁氏菌病诊断》(WS269-2019)进行布病临床诊断。同时对患者抗凝全血进行细菌DNA提取,应用巢式PCR方法检测血液中布鲁氏菌DNA。对不同症状、抗体水平血液中布鲁氏菌细菌数之间的关系进行统计学分析。结果118例布病患者中,男性78例,女性40例。患者的临床症状主要有发热、乏力、头痛、胸背酸痛、腰痛、四肢酸痛、关节肌肉疼痛、出汗、失眠和睾丸痛等。118例布病患者血液标本中,布鲁氏菌DNA阳性率为63.56%(75/118),布鲁氏菌细菌数中位数(MED)为7拷贝/mL血液,四分位数(IQR)为2~17拷贝/mL血液。118例布病患者中,SAT检测阳性率为38.14%(45/118)。118例布病患者中,新发病例和复诊病例分别占55.08%(65/118)和44.92%(53/118),新发病例和复诊病例血液中布鲁氏菌DNA阳性率分别为72.31%(47/65)和52.83%(28/53)。47例新发病例血液标本中布鲁氏菌细菌数MED为3拷贝/mL血液,IQR为2~26拷贝/mL血液;28例复诊病例血液标本中布鲁氏菌细菌数MED为4拷贝/mL血液,IQR为2~12拷贝/mL血液。结论巢式PCR方法检测布病疑似患者血液中布鲁氏菌DNA,有助于布鲁氏菌感染或血清抗体阴性患者的诊断,血液中布鲁氏菌DNA的检测和血清学检查相结合可以有效地诊断布病。

关键词：布鲁氏菌病症状布鲁氏菌布鲁氏菌抗体巢式聚合酶链式反应

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幽门下动脉的解剖观测及临床意义

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解剖与临床 2006年第4期11卷 223-225,228页

作者：沈雷钟震亚田国忠王守安李艳君齐齐哈尔医学院解剖教研室黑龙江齐齐哈尔161042 佳木斯大学基础医学院局解教研室

目的:为幽门毗邻部位病变的诊治或手术提供解剖学资料。方法:采用红色乳胶液经动脉灌注和防腐处理的尸体标本,解剖观测幽门下动脉的起始类型及分支分布情况。结果:(1)幽门下动脉主要起源于胃十二指肠动脉(51.6%)或胃网膜右动脉(29.0%);... 详细信息

目的:为幽门毗邻部位病变的诊治或手术提供解剖学资料。方法:采用红色乳胶液经动脉灌注和防腐处理的尸体标本,解剖观测幽门下动脉的起始类型及分支分布情况。结果:(1)幽门下动脉主要起源于胃十二指肠动脉(51.6%)或胃网膜右动脉(29.0%);(2)幽门下动脉双干起始占55.0%,单干起始占45.0%;(3)幽门下动脉与胃网膜右动脉在幽门下端构成浆膜下吻合。结论:在胃手术处理胃网膜右动脉时,应在幽门下动脉起点的远端结扎胃网膜右动脉,以防止幽门附近残胃血供匮乏。

关键词：幽门下动脉临床应用

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五种布鲁菌血清学检测方法对比分析

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中华预防医学杂志 2016年第2期50卷 175-178页

作者：王淑云刘熹荣蓉赵鸿雁赵赤鸿朴东日赵娜姜海田国忠王桂琴崔步云山西医科大学微生物免疫室太原030001 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室实验室管理处山西医科大学微生物免疫教研室中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布病室

目的分析5种检测人的布鲁菌病的血清学方法的特异性和敏感性。方法于2013年1—12月，在内蒙古自治区的4个自治旗（察右后旗、科右中旗、林西县和四子王旗）进行调查。调查对象纳入标准：以养殖牛羊和屠宰为职业，伴有发热、乏力、关节... 详细信息

目的分析5种检测人的布鲁菌病的血清学方法的特异性和敏感性。方法于2013年1—12月，在内蒙古自治区的4个自治旗（察右后旗、科右中旗、林西县和四子王旗）进行调查。调查对象纳入标准：以养殖牛羊和屠宰为职业，伴有发热、乏力、关节痛等布鲁菌病疑似症状，年龄为25—55岁。对疑似患者清晨空腹采集静脉血3-5ml，共采集236份样品。分别采用平板凝集试验（PAT）、虎红平板凝集试验（RBPT）、标准试管凝集试验（SAT）、ELISA和免疫胶体金法（GICA）等5种血清学检测方法进行布鲁菌抗体测定，以SAT为“金标准”，分析RBPT、PAT、ELISA和GICA法的敏感性和特异性。结果SAT法阳性患者136例（57．6％），PAT法阳性患者150例（63．6％），RBPT法阳性患者159例（67．4％），ELISA法阳性患者143例（60．6％），GICA法阳性患者147例（62．3％），不同检测方法检测布鲁菌抗体阳性率差异无统计学意义（x^2=0．52，P=0．264）。以SAT法为“金标准”，PAT、RBPT、ELISA和GICA法的灵敏度分别为97．7％（133／136）、98．5％（134／136）、94．8％（129／136）和94．1％（128／136），特异度分别为70．0％（70／100）、75．0％（75／100）、86．0％（86／100）和81．0％（81／100），符合率分别为86．0％（203／236）、88．5％（209／236）、91．1％（215／236）和88．5％（209／236）。结论ELISA与GICA法在诊断人布鲁菌病中特异性和敏感性都较高，并且两种方法均快速；现场检测可以采用GICA法，大样本检测适宜用ELISA法。

关键词： ELISA 布鲁杆菌属敏感性与特异性

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