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基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

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中药新药与临床药理 2024年第1期35卷 56-64页

作者：张钟康卢晓南卢震胡佳刘慧珍卢婷尚广彬江西中医药大学中医基础理论分化发展中心江西南昌330004 江西省中医病因生物学重点实验室江西南昌330004 江西中医药大学中医学院江西南昌330004 江西中医药大学临床医学院江西南昌330004

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5... 详细信息

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

关键词：肿节风总黄酮提取物免疫性血小板减少症巨核细胞分化障碍模型人巨核白血病细胞人骨髓基质细胞超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法偏最小二乘法胡萝卜苷迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖

混合式教学法在中医药院校生理实验教学中的实践——以综合性实验动脉血压的调节为例

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中国中医药现代远程教育 2024年第13期22卷 18-21页

作者：卢晓南路千里尚广彬江西中医药大学中医学院江西南昌330004 江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心江西南昌330004

生理学是一门实验性学科,任何一种生理功能的发现及其机制的揭示都是通过科学实验获得的,因此生理学实验是生理学这门课程的重要组成部分。文章以综合性实验动脉血压的调节为例,从教学资源构建、网络预习、课堂教学、课后巩固、拓展与... 详细信息

生理学是一门实验性学科,任何一种生理功能的发现及其机制的揭示都是通过科学实验获得的,因此生理学实验是生理学这门课程的重要组成部分。文章以综合性实验动脉血压的调节为例,从教学资源构建、网络预习、课堂教学、课后巩固、拓展与反思、考核评价几方面探讨了线上线下混合式教学法在生理学实验教学中的应用。该教学法有利于打破生理实验教学资源和课时的制约,有效促进学生自主学习,增进学生学习兴趣,提高实验课效率。

关键词：生理学实验混合式教学综合性实验

Liver metabolomic characteristics in three different rat models of Yin deficiency based on ultra-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry

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Journal of Traditional Chinese Medicine 2023年第2期43卷 274-285页

作者： HU Xingyao LIU Hongning YAN Xiaojun CHEN Zhong FU Liu LIU Ge CHEN Xuan shang guangbin Jiangxi University of Chinese Medicine Research Center for Differention and Development of Traditional Chinese Medicine(TCM)Basic Theory Jiangxi Province Key Laboratory of TCM EtiopathogenisisNanchang 330004China

OBJECTIVE:To investigate the mechanism of Yin deficiency syndrome(YDS) by analyzing the liver metabolomic characteristics of three different Yin deficiency rat models METHODS:Following the TCM etiology,for clinical features and pathological manifestations of modern medicine,three kinds of animal models of Yin deficiency were induced and *** 48 Sprague-Dawley(SD) male rats were randomly divided into blank group,irritation induced model group,Fuzi-Ganjiang induced model group,and thyroxine-reserpine induced model *** successful development of model,the ultraperformance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry was carried out to detect metabolites in each *** metabolites of rat liver were analyzed for the characteristics of their *** pathway enrichment analysis and metabolic network construction were performed through various online databases including Metabolite Biology Role,Human Metabolome Database,MetaboAnalyst,and Kyoto Encyclopedia of Genes and ***:The SD rats in the experimental group showed symptoms like less weight gain,reduced diet and water intake,high body temperature,increased liver and kidney indexes,and abnormal liver and kidney tissue ***,the rats showed high increased levels of serum cyclic adenosine monophosphate,estradiol,alanine transaminase,and aspartate aminotransferase and decreased levels of cyclic guanosinc monophosphate and *** found four key interrelated metabolic pathways in the liver tissue metabolomics,including the biosynthesis of pantothenic acid and coenzyme A,and metabolism of alpha-linolenic acid metabolism,glycerophospholipid metabolism,and ***:The liver and kidney YDS is closely related to the biosynthesis of pantothenic acid and CoA and abnormal metabolism of α-linolenic acid,glycerophospholipid,and sphingolipid in SD rats.

关键词： molecular biology integrative medicine Yin deficiency syndrome syndrome complex

Identification of Complex Constituents in Herba Sarcandrae Using High Speed Accurate Mass Technology

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Identification of Complex Constituents in Herba Sarcandrae U...

肿节风总黄酮对化疗所致血小板减少模型小鼠骨髓SDF-1和CXCR-4表达的影响

BCEIA2013分析仪器应用技术报告会

作者： Guoliang Xu Yu Lei Ting Liu Qiyun Zhang guangbin shang Xiaoyan Xu Ping Du Yongming Xie Xilan Tang Key Laboratory of Modern Preparation of TCM Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine

It is well accepted, that traditional Chinese medicines(TCM) achieve efficacy based on synergy of multi-components, even some lower level components may play an important role in mechanism of actions. Therefore, it is crucial to develop an effective, comprehensive and reliable analytical method for identification of active constituents of TCM. This poster we described: Targeted and non-targeted workflows for identifying complex components of Herba Sarcandrae using TripleTOF 5600+ system. Ninety-seven compounds including 53 previously reported compounds and 44 newly identified / tentatively characterized compounds represent the largest dataset of compounds identified in Herba Sarcandrae plant *** combination of high scan rate speed, highly sensitive accurate mass, and rapid chromatographic separations, and powerful software based workflows enabled the identification of many novel compounds. Accurate mass technology has been proved to be a powerful tool in structure characterization

关键词：

来源： cnki会议评论

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中药新药与临床药理 2018年第4期29卷 433-437页

作者：卢晓南张洁严小军徐国良尚广彬江西中医药大学中医基础理论分化发展中心江西南昌330004

目的利用阿糖胞苷建立化疗所致血小板减少症小鼠模型,研究肿节风总黄酮对模型小鼠外周血小板数目以及骨髓微环境中基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体趋化因子受体4(CXCR-4)表达的影响。方法将60只KM小鼠按血小板数目随机分为正常对照组... 详细信息

目的利用阿糖胞苷建立化疗所致血小板减少症小鼠模型,研究肿节风总黄酮对模型小鼠外周血小板数目以及骨髓微环境中基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体趋化因子受体4(CXCR-4)表达的影响。方法将60只KM小鼠按血小板数目随机分为正常对照组,阿糖胞苷模型组,醋酸泼尼松龙组(10.0 mg·kg^(-1)),肿节风总黄酮高、中、低剂量组(94.5,63.0,31.5 mg·kg^(-1))。采用腹腔注射阿糖胞苷建立化疗所致血小板减少症小鼠模型,同时给予相应药物干预。动态检测外周血小板数量,实验结束时检测骨髓中巨核细胞状况,免疫组化检测骨髓中SDF-1及其受体CXCR-4的表达。结果与正常组比较,模型组外周血小板数量、巨核细胞数目及多倍体比例均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组都能显著提升外周血小板数目和巨核细胞数目(P<0.01),同时肿节风总黄酮高、中剂量组还可以提高多倍体巨核细胞所占比例(P<0.01);肿节风总黄酮高、中剂量组可显著促进骨髓中SDF-1以及巨核细胞中相应受体CXCR-4的表达(P<0.01,P<0.05)。结论肿节风总黄酮能显著提升阿糖胞苷诱导的血小板减少症模型小鼠外周血小板数目,其作用机制可能与增加骨髓中SDF-1及其受体CXCR-4的表达,从而促进巨核细胞增殖、分化和形成血小板有关。

关键词：化疗所致血小板减少症肿节风总黄酮巨核细胞基质细胞衍生因子1 趋化因子受体4

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代谢组学在中医证型中的应用探析

世界科学技术-中医药现代化 2021年第4期23卷 1242-1250页

作者：胡星遥刘红宁严小军张洁尚广彬江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心/江西省中医病因生物学重点实验室南昌330004

代谢组学是系统生物学的组成部分,能准确的反映出生物体实时的代谢情况。中医证型是中华民族传统医学的产物,是疾病发展阶段的病理概括。中医的现代化离不开中医证型的标准化研究,而中医五脏疾病分类可以探索中医分型辨证中较为客观的... 详细信息

代谢组学是系统生物学的组成部分,能准确的反映出生物体实时的代谢情况。中医证型是中华民族传统医学的产物,是疾病发展阶段的病理概括。中医的现代化离不开中医证型的标准化研究,而中医五脏疾病分类可以探索中医分型辨证中较为客观的规律。代谢组学的整体性、系统性、动态性与中医理论的整体观、辨证观高度契合。近年来,利用代谢组学技术在中医证型中的研究已经取得了一定的成效,并且研究的角度和深度不断扩展。故本文旨在探讨代谢组学与中医证型的关联,并从中医临床疾病证型、中医证型动物模型等角度分析代谢组学的应用进展,以期代谢组学在中医学领域的研究能更好的服务于临床。

关键词：代谢组学中医证型代谢标志物中医动物模型

养阴化瘀解毒方通过PI3K/Akt信号通路调控低氧环境下结肠癌细胞的自噬和凋亡

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中国实验方剂学杂志 2023年第20期29卷 45-53页

作者：陈宣刘红宁尚广彬柳歌胡佳张钟康严小军江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心/江西省中医病因生物学重点实验室南昌330004

目的:观察不同氧浓度环境对结肠癌细胞增殖、自噬的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨养阴化瘀解毒方在低氧环境下对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法:HCT-116细胞分为常氧组、1%低氧组、5%低氧组,通过细... 详细信息

目的:观察不同氧浓度环境对结肠癌细胞增殖、自噬的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨养阴化瘀解毒方在低氧环境下对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法:HCT-116细胞分为常氧组、1%低氧组、5%低氧组,通过细胞增殖与毒性检测(MTS)法检测细胞存活率,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察不同氧浓度下细胞自噬荧光表达情况;在5%低氧微环境下用养阴化瘀解毒方干预HCT-116细胞,分为正常组、空白血清组、养阴化瘀解毒方组(养阴化瘀解毒方含药血清5%、15%、25%);通过MTS法计算各组细胞的抑制率;单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测各组自噬细胞率的变化;利用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同组自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)、泛素结合蛋白(p62)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和通路蛋白磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)表达情况。结果:与常氧组比较,1%、5%低氧组细胞存活率均明显上升,以5%低氧组细胞存活率提升幅度最大(P<0.01);与常氧组比较,1%、5%低氧组细胞自噬荧光强度均明显增强,且以5%低氧环境下MDC染色自噬荧光表达最强;低氧环境下,与空白血清组比较,养阴化瘀解毒方组(15%、25%)细胞抑制率明显提高、自噬细胞率降低、细胞凋亡率升高(P<0.01);养阴化瘀解毒方组(15%、25%)Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05);与养阴化瘀解毒方组(5%)比较,养阴化瘀解毒方组(25%)Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05);与空白血清组比较,养阴化瘀解毒方组(5%、15%、25%)LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01);养阴化瘀解毒方组(15%、25%)p62蛋白表达升高(P<0.01);与养阴化瘀解毒方低剂量组比较,养阴化瘀解毒方组(25%)p62蛋白表达升高(P<0.05);与空白血清组比较,养阴化瘀解毒方组(25%)促凋亡蛋白BNIP-3、Bax表达升高,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01);与养阴化瘀解毒方组(5%)比较,养阴化瘀解毒方组(25%)Bax蛋白表达上升(P<0.05);与空白血清组比较,养阴化瘀解毒方组(15%、25%)低氧因子HIF-1α表达降低(P<0.01);养阴化瘀解毒方组(25%)p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt表达上升(P<0.05,P<0.01);与养阴化瘀解毒方中剂量比较,养阴化瘀解毒方组(25%)p-Akt/Akt表达上升(P<0.05)。结论:低氧微环境能明显促进结肠癌细胞自噬及增殖,发挥细胞保护作用,养阴化瘀解毒方在5%低氧环境下能明显抑制结肠癌细胞自噬和增殖,并促进细胞凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：结肠癌低氧微环境养阴化瘀解毒方增殖自噬凋亡

广藿香对营养性肥胖大鼠的降脂作用的转录组学研究

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中药药理与临床 2019年第6期35卷 87-92页

作者：朱静严小军孙慧娟胡星遥张洁尚广彬江西中医药大学江西省中医病因生物学重点实验室南昌330004

目的:利用RNA-Seq技术对广藿香干预的营养性肥胖大鼠的肝脏进行转录组学测序,探究其降脂效果与作用机制。方法:24只雄性SD大鼠,按体重随机分成8只正常对照组、16只高脂饲料诱导组。饲养4周营养性肥胖造模成功后,将高脂饲料诱导组按体重... 详细信息

目的:利用RNA-Seq技术对广藿香干预的营养性肥胖大鼠的肝脏进行转录组学测序,探究其降脂效果与作用机制。方法:24只雄性SD大鼠,按体重随机分成8只正常对照组、16只高脂饲料诱导组。饲养4周营养性肥胖造模成功后,将高脂饲料诱导组按体重和血清甘油三酯(TG)含量随机平均分为模型组、广藿香3 g/kg组。给药4周后,取血清检测TG、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量,取动物肝脏进行RNA提取,测序筛选差异基因,进行GO功能注释和KEGG富集分析,并进行Western Blot验证。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体重、Lee’s指数、TG、CHOL、LDL-C含量显著升高,与模型对照组比较,广藿香3 g/kg组大鼠体重有降低趋势,大鼠血清中的TG含量明显下降。测序及KEGG富集分析显示,与模型对照组相比,广藿香3 g/kg组胰岛素信号通路中Fasn、Ppp1r3b基因显著下调,Socs2基因明显上调,Western Blot检测的蛋白表达与转录组基因表达分析结果相一致。结论:芳香化湿药物广藿香对营养性肥胖大鼠的降脂作用,可能是调控胰岛素信号通路中Fasn、Socs2、Ppp1r3b相关基因和蛋白表达来发挥作用。

关键词：广藿香营养性肥胖大鼠 RNA-Seq 转录组学富集分析

肿节风总黄酮对细胞共培养体系中巨核细胞分化、成熟的影响

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中药新药与临床药理 2019年第11期30卷 1277-1283页

作者：卢晓南孙慧娟朱静胡星遥严小军尚广彬江西中医药大学中医学院江西南昌330004 江西中医药大学中医基础理论分化发展中心江西南昌330004

目的研究肿节风总黄酮对细胞共培养体系中巨核细胞分化、成熟的影响。方法通过体外分离培养SD大鼠骨髓基质细胞和巨核细胞,构建共培养体系模拟骨髓微环境,加入兔抗大鼠血小板血清(APS)建立巨核细胞分化障碍模型,以肿节风总黄酮高、中、... 详细信息

目的研究肿节风总黄酮对细胞共培养体系中巨核细胞分化、成熟的影响。方法通过体外分离培养SD大鼠骨髓基质细胞和巨核细胞,构建共培养体系模拟骨髓微环境,加入兔抗大鼠血小板血清(APS)建立巨核细胞分化障碍模型,以肿节风总黄酮高、中、低剂量(7.80、3.90、1.95μg·mL^-1)进行干预。分别采用瑞氏-吉姆萨染色、流式细胞术检测各组共培养体系中巨核细胞的多倍体化程度、细胞表面标志物CD61表达量,以及基质细胞凋亡情况;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血小板生成素(TPO)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、转化因子-β1(TGF-β1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量。结果与正常组比较,APS模型组共培养体系中巨核细胞多倍体数目、CD61表达量以及TPO、SDF-1、VCAM-1含量均明显降低(P<0.01),TGF-β1含量明显上调(P<0.05),基质细胞凋亡率显著提高(P<0.01)。与APS模型组比较,肿节风总黄酮高、中、低剂量组能显著增加共培养体系中TPO的含量(P<0.01);肿节风总黄酮高、中剂量组能显著提高巨核细胞多倍体数目及SDF-1含量(P<0.05,P<0.01);肿节风总黄酮高剂量组能显著提高CD61表达量(P<0.05),降低共培养体系中基质细胞的凋亡率及TGF-β1含量(P<0.05,P<0.01)。结论肿节风总黄酮能促进共培养体系中巨核细胞的分化、成熟,可能与其改善共同培养体系中基质细胞状态和分泌功能,影响微环境中促巨核细胞分化的细胞因子含量关系密切。

关键词：细胞共培养肿节风总黄酮骨髓基质细胞巨核细胞分化成熟