检索结果-南通市图书馆

口蹄疫病毒样颗粒诱导表达型载体的构建及其BHK-21细胞池的筛获

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4849-4860页

作者：谭书桢董虎孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 云南省畜牧兽医科学院云南热带亚热带动物病毒重点病实验室云南昆明650224

瞬时表达是目前利用哺乳动物细胞表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白的主流方法。为实现染色体稳定表达FMDV衣壳蛋白并高效组装出病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究构建了piggy Bac(PB)转座-组成... 详细信息

瞬时表达是目前利用哺乳动物细胞表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白的主流方法。为实现染色体稳定表达FMDV衣壳蛋白并高效组装出病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究构建了piggy Bac(PB)转座-组成型表达、PB转座-四环素(tetracycline,Tet)诱导型表达两套质粒。利用荧光蛋白标记技术,验证了质粒的功能。通过抗生素筛选得到了组成型表达P12A3C(WT/L127P)基因的BHK-21细胞池(C-WT、C-L127P)和诱导型表达P12A3C(WT/L127P)基因的BHK-21细胞池(I-WT、I-L127P)。荧光观察和PCR检测证明了绿色荧光蛋白、3C蛋白酶、反向四环素转录激活因子等基因的稳定整合。Western blotting、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)实验证明了细胞池I-L127P具有更强的衣壳蛋白和VLPs生产能力。本研究首次实现了哺乳动物细胞染色体诱导表达FMDV衣壳蛋白,有助于推动哺乳动物生产FMDV VLPs疫苗的技术工艺,也为构建其他蛋白的哺乳动物细胞诱导型表达系统提供了参考。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒质粒构建细胞池诱导表达

口蹄疫病毒自身核酸片段对病毒样颗粒组装的促进作用

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生物工程学报 2020年第10期36卷 2076-2082页

作者：柳海云董虎靳野郭慧琛孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

选取能够与口蹄疫病毒结构蛋白相互作用且有特殊结构的核酸片段5′非翻译区(5′UTR)和内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)作为支架,进行病毒样颗粒组装的研究。通过对组装产物进行粒径、表面电位、凝胶阻滞、核酸... 详细信息

选取能够与口蹄疫病毒结构蛋白相互作用且有特殊结构的核酸片段5′非翻译区(5′UTR)和内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)作为支架,进行病毒样颗粒组装的研究。通过对组装产物进行粒径、表面电位、凝胶阻滞、核酸酶消化、尺寸排阻色谱、透射电镜、圆二色光谱等检测,结果表明,核酸片段5′UTR和IRES能与口蹄疫病毒样颗粒共组装并形成病毒样颗粒。通过统计学分析发现VLPs-5′UTR的75S颗粒的组装效率显著高于单纯VLPs组(P<0.001)和VLPs-IRES(P<0.01),而VLPs-IRES的12S颗粒的组装效率显著高于单纯VLPs组(P<0.0001)和VLPs-5′UTR(P<0.0001),表明口蹄疫病毒自身核酸片段5′UTR更有利于口蹄疫病毒样颗粒的组装。该研究对促进口蹄疫病毒样颗粒组装提出了新的思路和优化策略,有助于病毒样颗粒疫苗的研发。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒 5′非翻译区内部核糖体进入位点尺寸排阻色谱法

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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒构建、表达及鉴定

生物工程学报 2020年第7期36卷 1305-1313页

作者：刘绒欢郭慧琛杜平董虎郭梦楠孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV结构蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通过大肠杆菌表达FMDV结构蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,体外组装得到嵌合OVA257-264肽的病毒样颗粒(VLPOVA)。用动态光散射、透射电镜检测VLPOVA大小和形态,免疫印迹、酶联免疫吸附试验和激光共聚焦显微镜检测短肽的嵌入情况。结果显示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影响蛋白表达和VLPs的组装且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒径比VLPs稍大。

关键词：口蹄疫病毒嵌合型病毒样颗粒 OVA257-264 VP3

N-乙酰基吡唑啉衍生物和二苯醚基N-乙酰基双吡唑啉衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

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有机化学 2015年第9期35卷 1985-1990页

作者：张应鹏谭伟杨云裳孙世琪郭慧琛兰州理工大学石油化工学院兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730050

合成了7个N-乙酰基吡唑啉化合物2a^2g和7个新型的二苯醚基N-乙酰基双吡唑啉化合物4a^4g,通过核磁共振谱、元素分析和质谱对合成化合物进行了结构表征.并且用3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法... 详细信息

合成了7个N-乙酰基吡唑啉化合物2a^2g和7个新型的二苯醚基N-乙酰基双吡唑啉化合物4a^4g,通过核磁共振谱、元素分析和质谱对合成化合物进行了结构表征.并且用3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法测试了它们对人肺腺癌细胞(A549)、人非小细胞肺癌细胞(H1299)和乳癌细胞(MCF-7)三类癌细胞株的体外抗肿瘤活性.结果显示,所合成的化合物对癌细胞有一定抑制作用,其中3,3'-(4,4'-二苯醚基)双[1-乙酰基-5-(3,4-亚甲基二氧苯基)-2-吡唑啉](4e)对A549,H1299和MCF-7三类癌细胞株具有较好的抗肿瘤活性,半数抑制浓度(IC50)分别为16.91,10.09,10.97μmol/L.

关键词： N-乙酰基吡唑啉 N-乙酰基双吡唑啉二苯醚抗肿瘤

电沉积Ni-P-Si_3N_4复合镀层的摩擦学特性

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天津大学学报 1997年第2期30卷 245-250页

作者：张会臣郭鹤桐天津大学应用化学系天津

通过摩擦磨损试验、Ｘ射线衍射分析和电子探针分析等，研究电沉积Ｎｉ－Ｐ－Ｓｉ３Ｎ４复合镀层的摩擦磨损机理及其与结构和力学特性的关系．结果表明，在干摩擦条件下，复合镀层中的Ｓｉ３Ｎ４微粒能有效降低摩擦副之间的粘着脱落和犁... 详细信息

通过摩擦磨损试验、Ｘ射线衍射分析和电子探针分析等，研究电沉积Ｎｉ－Ｐ－Ｓｉ３Ｎ４复合镀层的摩擦磨损机理及其与结构和力学特性的关系．结果表明，在干摩擦条件下，复合镀层中的Ｓｉ３Ｎ４微粒能有效降低摩擦副之间的粘着脱落和犁沟效应；在油润滑条件下，复合镀层中Ｓｉ３Ｎ４微粒起到支承载荷作用，同时有利于边界润滑膜的形成，避免粘着磨损．

关键词：复合镀层电沉积耐磨性能摩擦磨损镍合金

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A型塞尼卡病毒的分离鉴定及生物学特性研究

病毒学报 2018年第5期34卷 555-563页

作者：郭笑然韩世充张小丽孙世琪马小军郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疾病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

本文报道了对分离自湖北地区的A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)CH-HB-2017毒株进行鉴定和生物学特性研究。全基因序列分析显示,该分离株与国内毒株CH-HN-2017、CH-HNSL-2017、CH-FJ-2017和美国毒株USA-IA44952-2015、USA-IA44662-2015和USA-SD41901-2015的同源性高。该SVA可在猪肾传代细胞(IBRS-2)和猪睾丸细胞(Swine testis cells,ST)中复制增殖,感染后都能产生CPE,通过病毒一步生长曲线、蚀斑试验和定量PCR等试验表明,该毒株对IBRS-2细胞更易感,病毒滴度更高。本实验成功分离到1株SVA流行毒株,并研究了该毒株的生物学特性,为深入研究该病毒奠定基础。

关键词： A型塞尼卡病毒(SVA) 分离鉴定生物学特性

口蹄疫病毒氨基酸改造对其病毒样颗粒稳定性的影响

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生物工程学报 2021年第7期37卷 2435-2442页

作者：李璐莹董虎卢渊录王苗苗孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 长江大学动物科学学院湖北荆州434025

病毒样颗粒(Viruslikeparticles,VLPs)的稳定性是目前影响口蹄疫VLPs疫苗质量的主要因素。为进一步提升口蹄疫VLPs疫苗的质量,基于口蹄疫病毒三维空间结构,通过动力学分析软件设计并筛选出3个氨基酸改造位点。经点突变试剂盒成功制备出... 详细信息

病毒样颗粒(Viruslikeparticles,VLPs)的稳定性是目前影响口蹄疫VLPs疫苗质量的主要因素。为进一步提升口蹄疫VLPs疫苗的质量,基于口蹄疫病毒三维空间结构,通过动力学分析软件设计并筛选出3个氨基酸改造位点。经点突变试剂盒成功制备出上述3种突变型重组质粒,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21菌株后经体外诱导表达,Ni离子层析柱纯化后,SDS-PAGE结果证明3种氨基酸突变不影响目标蛋白的表达。体外组装获得的3种突变型VLPs稳定性研究结果发现,内部疏水性侧链氨基酸的引入使VLPs的形态变得更加均一(N4017W),且其稳定性比其他两种VLPs明显提高。结果表明,衣壳内部疏水性作用力有助于VLPs的形成且有助于维持衣壳的稳定性,为提高VLPs疫苗质量提供了新的研究思路,有助于推进VLPs疫苗的发展。

关键词：病毒样颗粒三维构象突变体稳定性同源建模口蹄疫病毒

不同粒径口蹄疫病毒样颗粒-ZIF-8复合物诱导小鼠的体液免疫效果分析

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4837-4848页

作者：李家俊王俊张韵滕志东董虎郭慧琛孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室口蹄疫国家参考实验室甘肃兰州730046 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为进一步提高口蹄疫(foot-and-mouthdisease,FMD)病毒样颗粒(virus-likeparticles,VLPs)疫苗的免疫效果,本研究采用仿生矿化方法,将Zn2+和2-甲基咪唑按照不同浓度配比制备了不同粒径的FMDV VLPs-沸石咪唑骨架-8(zeolitic imidazolate framework-8,ZIF-8)复合物,以探究尺寸效应对免疫效果的影响。结果显示,成功制备出3种不同粒径的FMDV VLPs-ZIF-8,粒径分别约为70、100、1000 nm。细胞毒性和组织病理学试验表明,3种复合物均具有良好的生物安全性。小鼠免疫试验表明,3种复合物均能明显提高中和抗体和特异性抗体水平,并且随着复合物体积的减小,其免疫效果也随之增强。本研究表明,ZIF-8包封FMDV VLPs可显著增强其免疫效果,且具有尺寸依赖性。

关键词：沸石咪唑骨架-8 口蹄疫病毒样颗粒佐剂尺寸效应

可逆识别Cu^(2+)的吡唑啉荧光猝灭型探针及其在PK-15细胞成像中的应用

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有机化学 2016年第6期36卷 1401-1406页

作者：张应鹏尤彩霞杨云裳刘小育郭慧琛董玉莹兰州理工大学石油化工学院兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730050

设计合成了1-(2-羟基苯基)-4-(9-蒽基)-3-苯并噻唑基吡唑啉(P1),通过紫外吸收和荧光光谱法研究了化合物与金属离子的识别特性,并研究了其在PK-15活细胞中进行荧光显微成像实验.研究结果表明荧光探针P1能快速、高选择、可逆地识别Cu^(2+)... 详细信息

设计合成了1-(2-羟基苯基)-4-(9-蒽基)-3-苯并噻唑基吡唑啉(P1),通过紫外吸收和荧光光谱法研究了化合物与金属离子的识别特性,并研究了其在PK-15活细胞中进行荧光显微成像实验.研究结果表明荧光探针P1能快速、高选择、可逆地识别Cu^(2+),细胞毒性实验和荧光免疫分析实验证明,所制备的荧光探针具有很好的生物相容性和低毒性.

关键词：吡唑啉荧光探针铜离子识别 PK-15活细胞