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实用低视力学

4-羟基壬稀酸刺激人视网膜微血管内皮细胞的定量蛋白质组学研究

2016年

作者：吴淑英李筱荣

本书分3篇，包括11章。第1篇：视觉与照明，介绍光学基本知识，首次在低视力学科中揭示了1O种眩光对视觉的影响及防护；从光学的角度，阐述了与低视力相关的眼科学特点及生理功能。

ISBN: (纸本)9787543336193

关键词：弱视诊疗

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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汇雅图书（南通市图书馆）

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中华眼底病杂志 2019年第5期35卷 488-493页

作者：肖静张晓敏邵先锋肖梦然杨付花张慧 ea vicki l.李筱荣天津医科大学眼科医院、眼视光学院、眼科研究所天津市视网膜功能与疾病重点实验室300384

目的观察4-羟基壬稀酸(4-HNE)刺激人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增生后蛋白表达变化。方法培养对数生长期hRMECs,并将其分为4-HNE刺激组和阴性对照组。4-HNE刺激组加入浓度分别为5、10、20、50 μmol.l.4-HNE培养基,并据此再分为不... 详细信息

目的观察4-羟基壬稀酸(4-HNE)刺激人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增生后蛋白表达变化。方法培养对数生长期hRMECs,并将其分为4-HNE刺激组和阴性对照组。4-HNE刺激组加入浓度分别为5、10、20、50 μmol.l.4-HNE培养基,并据此再分为不同浓度亚组;阴性对照组加入等体积无水乙醇(4-HNE的溶剂)培养基。刺激细胞24 h后加入CCK-8孵育4 h,检测吸光度[A,旧称光密度(OD)]值。采用基于超滤辅助样品制备酶切方法进行蛋白质谱样本制备,非数据依赖的采集模式采集数据,并对差异表达蛋白结果进行基因注释分析和通路富集分析。结果CCK-8增生分析法结果显示,10、20 μmol.l.4-HNE刺激组A值均高于阴性对照组和5 μmol.l.4-HNE刺激组,差异有统计学意义(F=25.42,Pl.l.4-HNE刺激组之间A值差异无统计学意义(P>0.05);50 μmol.l.4-HNE刺激组A值较阴性对照组低,差异有统计学意义(F=25.42,Pl.l.4-HNE刺激组差异表达倍数大于1.5倍的蛋白118个,差异有统计学意义(Pl.l.4-HNE刺激组血红素氧合酶1、磺胺嘧啶1、热休克蛋白A1B、硫氧还蛋白还原酶1、谷胱甘肽还原酶、三磷酸腺苷(ATP)酶和凝血酶原等蛋白表达增加;载脂蛋白A1和程序性细胞凋亡因子4等表达降低。差异蛋白主要参与氧化应激、细胞解毒、ATP偶联的膜转运等生物学进程。结论4-HNE刺激hRMECs时通过改变氧化应激、细胞解毒相关蛋白、ATP膜偶联等蛋白的表达,共同调控细胞氧化应激和生长状态。

关键词：视网膜血管/细胞学内皮细胞细胞,培养的蛋白质组学 4-羟基壬稀酸

不同超声能量模式在硬核白内障超声乳化吸除术中的应用观察

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中国实用眼科杂志 2008年第1期26卷 41-43页

作者：滕贺李筱荣天津医科大学眼科中心天津300070

目的探讨连续、脉冲、爆破3种超声能量模式在硬核白内障超声乳化吸除术中应用。方法选取晶状体核硬度〉Ⅲ级（l.CSⅡ分级标准）的老年性白内障患者185例（212只眼），随机分为3组，分别采用连续、脉冲、爆破3种超声能量模式行超声乳... 详细信息

目的探讨连续、脉冲、爆破3种超声能量模式在硬核白内障超声乳化吸除术中应用。方法选取晶状体核硬度〉Ⅲ级（l.CSⅡ分级标准）的老年性白内障患者185例（212只眼），随机分为3组，分别采用连续、脉冲、爆破3种超声能量模式行超声乳化白内障吸出联合后房型人工晶状体植入术，观察术中实际超声过程中平衡液的用量、超声乳化晶状体核的实际超声能量（actual.power，AP）、有效超声时间（effect phaco time，EPT），和累积能量复合参数（accumul.ted energy compl.x parameter，AECP），比较术后角膜内皮细胞丢失率及角膜切口热灼伤状况。结果爆破组实际超声过程中平衡液的用量远远低于脉冲及连续组，差异显著有统计学意义（P〈0．05）。爆破组AP与脉冲组相比无统计学意义（P＞0．05），EPT、AECP明显低于脉冲组（P〈0．05）。AP、EPT、AECP均明显低于连续组（P〈0．05）。术后l.爆破组角膜内皮细胞密度高于脉冲及连续组，角膜内皮细胞丢失率明显低于脉冲及连续组，差异有统计学意义（P〈0．05）。全部3组病人术后均无角膜切口热灼伤。结论爆破模式在处理硬核白内障时可显著减少实际超声中平衡液的使用量，降低术中EPT和累计超声能量，从而减轻对眼内组织的损伤，提高了手术效率，是一种更为优化利用能量的模式。

关键词：超声乳化白内障吸出术超声能量模式爆破模式硬核白内障

高糖条件下人视网膜微血管周细胞的定量蛋白组学研究

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中华实验眼科杂志 2019年第9期37卷 707-712页

作者：肖梦然张晓敏邵先锋肖静杨付花张慧 vicki l.1} 李筱荣天津医科大学眼科医院眼视光学院眼科研究所天津市视网膜功能与疾病重点实验室300384

目的利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化,为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点。方法将HRMPCs分为对照组和高糖组,分别用葡萄糖浓度为25 mmol.l.35 mmol.l.D... 详细信息

目的利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化,为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点。方法将HRMPCs分为对照组和高糖组,分别用葡萄糖浓度为25 mmol.l.35 mmol.l.DMEM培养基培养48 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组HRMPCs活性。提取各组细胞的蛋白并进行酶切,得到肽段,取2μg肽段进行飞行时间质谱(TOF-MS)检测,质谱的采集模式为数据依赖性(DDA),对得到的蛋白表达信息进行生物信息学分析。结果高糖组的HRMPCs数量较对照组明显减少,且高糖组的部分细胞出现体积变小、变形等改变。CCK-8实验结果显示,高糖组HRMPCs吸光度(A 450)值为0.75±0.04,明显低于对照组的0.91±0.05,差异有统计学意义(t=5.784,P=0.000 2)。本研究共鉴定到1 972个可定量蛋白,其中差异蛋白有54个(差异倍数>1.5)。相比于对照组,高糖组细胞中上调的差异蛋白有13个,包括CTNNB1、CTBP2等,下调的差异蛋白有41个,包括SQSTM1、HMGCS1等。这些差异蛋白主要参与了三羧酸循环、有氧呼吸等生物学过程。结论高糖刺激HRMPCs会改变多种蛋白的表达,进而影响细胞的呼吸作用和ATP的生成,最终导致周细胞的缺失。

关键词：糖尿病视网膜病变蛋白组学人视网膜微血管周细胞

组织蛋白酶l.制剂经线粒体途径抑制氧化应激诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡

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中华眼底病杂志 2024年第5期40卷 379-386页

作者：何珍寇振宇东莉洁李筱荣天津医科大学眼科医院、眼视光学院、眼科研究所、国家眼耳鼻喉疾病临床医学研究中心天津市分中心、天津市视网膜功能与疾病重点实验室天津300384

目的观察组织蛋白酶(CTS)l.制剂对视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的作用及其对线粒体氧化应激的影响。方法体外培养的人RPE细胞分为正常组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+CTSl.制剂组。H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+CTSl.制剂组置... 详细信息

目的观察组织蛋白酶(CTS)l.制剂对视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的作用及其对线粒体氧化应激的影响。方法体外培养的人RPE细胞分为正常组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+CTSl.制剂组。H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+CTSl.制剂组置于含400μmol.l.H_(2)O_(2)的培养基孵育24 h;H_(2)O_(2)+CTSl.制剂组同时加入10μmol.l.CTSl.制剂。正常组为常规培养细胞。建模后24 h进行后续实验。流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应检测细胞中CTSl.达水平;MitoSOX荧光探针检测细胞中线粒体超氧化物表达水平;MitoTracker染色观察线粒体形态,定量分析线粒体平均面积、形状因子、分支节点。两组间比较采用双尾Student t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果与正常组比较,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(t=3.307,P=0.0297);细胞中CTSl.达水平升高(t=19.950、6.916、14.220,Pl.制剂组CTSl.达水平、细胞凋亡率、细胞线粒体超氧化物水平显著降低,差异有统计学意义(t=11.940、4.718、16.680,Pl.制剂组细胞线粒体呈细长椭圆形或杆状;H_(2)O_(2)组细胞线粒体失去其连续轮廓与完整形态。4组细胞线粒体评价面积、形状因子、分支节点比较,差异有统计学意义(F=251.700、34.010、60.500,Pl.达升高;CTSl.制剂可抑制H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞凋亡,降低线粒体超氧化物水平,有效恢复线粒体形态。

关键词：组织蛋白酶l 视网膜色素上皮细胞细胞凋亡氧化应激线粒体细胞实验

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中华眼底病杂志 2014年第5期30卷 504-508页

作者：田芳东莉洁周玉王飞张晓敏李筱荣天津医科大学眼科医院天津医科大学眼科研究所天津医科大学眼视光学院 300384

目的观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57Bl.6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western bl.t）检... 详细信息

目的观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57Bl.6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western bl.t）检测各组小鼠视网膜组织中PSF的表达.7日龄C57Bl.6J小鼠48只随机分为正常组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组,各组均为12只.除正常组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）％的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型.12日龄时,OIR rAAV-PSF治疗组小鼠玻璃体腔注射病毒滴度为5×10^13pfu/ml.rAAV-PSF重组载体2μI; OIR rAAV治疗组小鼠玻璃体腔注射相同病毒滴度的单纯rAAV载体2μ***模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;Western bl.t检测视网膜中VEGF蛋白表达含量.结果正常组小鼠视网膜PSF蛋白表达与rAAV-PSF注射组比较,差异有统计学意义（F=16.05,P=0.001）,与rAAV注射组比较,差异无统计学意义（F=16.05,P=0.890）.正常组、OIR模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组突破内界膜的视网膜新生血管内皮细胞核数比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.007）;rAAV-PSF治疗组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.002）;OIR rAAV治疗组与OIR模型组差异无统计学意义（F=101.00,P=0.550）.各组视网膜VEGF蛋白表达比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.005）,OIR模型组与OIR rAAV-PSF治疗组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.001）;OIR模型组与OIR rAAV组差异无统计学意义（F=13.20,P=0.071）.结论 rAAV-PSF玻璃体腔注射可以抑制OIR小鼠视网膜VEGF表达,从而抑制其新生血管生成.

关键词：视网膜新生血管化/预防和控制多聚嘧啶区结合蛋白质/药物作用动物实验

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表皮生长因子对晶体上皮细胞增殖影响的研究

中华眼科杂志 1999年第4期35卷 283-286,I014页

作者：王娟李筱荣张晓红孙慧敏袁佳琴天津医科大学世界人工晶体中国天津培训中心

目的评价表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）对晶体上皮细胞增殖的影响。方法在培养的牛和人晶体上皮细胞中添加ＥＧＦ，甲基噻唑基四唑（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，Ｍ... 详细信息

目的评价表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）对晶体上皮细胞增殖的影响。方法在培养的牛和人晶体上皮细胞中添加ＥＧＦ，甲基噻唑基四唑（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）法测定细胞增殖情况以及抗ＥＧＦ受体（ＥＧＦｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）抗体对ＥＧＦ作用的影响。结果ＥＧＦ浓度为１０１～１０２μｇ／Ｌ对牛眼晶体上皮细胞增殖有促进作用，其中浓度为１０μｇ／Ｌ作用３天达到最大促增殖效果；ＥＧＦ浓度为１～１０２μｇ／Ｌ对人晶体上皮细胞增殖有促进作用，浓度为１０２μｇ／Ｌ具有最大促增殖效果。抗ＥＧＦＲ抗体浓度＞０５ｍｇ／Ｌ时特异性阻断ＥＧＦ对人晶体上皮细胞增殖的促进作用，浓度为３ｍｇ／Ｌ时阻断率达８１％。结论ＥＧＦ可促进晶体上皮细胞增殖，并提示人晶体上皮细胞表面存在特异性ＥＧＦＲ，ＥＧＦ与其受体结合后可促进细胞增殖，对白内障术后后囊混浊的发生发挥作用。

关键词：晶体上皮细胞白内障后囊混沌表皮生长因子

苯丙氨酸促进人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞高效分化的研究

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中华眼底病杂志 2015年第1期31卷 57-61页

作者：吴一湘杨春波于敏李筱荣天津医科大学眼科医院天津医科大学眼科研究所天津医科大学眼视光学院 300384

目的观察苯丙氨酸对胚胎干细胞（ESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞定向分化诱导效率的影响.方法 H1人ESC（hESC）分为对照组和实验组,以mTeSR培养基常规培养.细胞克隆过度融合后对照组以撤除碱性成纤维细胞生长因子、含10％ knockout... 详细信息

目的观察苯丙氨酸对胚胎干细胞（ESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞定向分化诱导效率的影响.方法 H1人ESC（hESC）分为对照组和实验组,以mTeSR培养基常规培养.细胞克隆过度融合后对照组以撤除碱性成纤维细胞生长因子、含10％ knockout血清替代物的培养基诱导hESC自主分化至第7周.实验组从第3周开始在诱导培养基中添加0.2 mmol.l.丙氨酸培养至第7周.观察两组细胞形态学变化;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测人类配对盒基因6（Pax6）、小眼球相关转录因子（MITF）、RPE65、酪氨酸酶（tyrosinase）、Wnt配体（Wnt3a）、淋巴样增强因子-1（l.f1）、转录因子7（Tcf7）基因mRNA的表达;蛋白免疫印迹法（Western bl.t）检测MITF、RPE65蛋白的表达;流式细胞技术（FCM）检测RPE65阳性细胞比例.Sprague Dawl.y大鼠12只,随机分为对照组和治疗组;单眼内路法视网膜下腔注射,对照组注射2 μl.1倍磷酸盐缓冲液,治疗组注射2 μl.化的hESC-RPE.治疗后6周行视网膜电图（ERG）检查,观察暗适应3.0 a-b波振幅.结果诱导分化第7周,实验组出现大量肉眼可见的色素团块,明显多于对照组.色素化区域内可见多边形蜂窝状排列的单层细胞,胞质充满色素颗粒.RT-PCR检测结果显示,实验组Pax6、MITF、RPE65、tyrosinase（t=39.44、26.14、31.28、77.24）、Wnt3a、l.f1、Tcf7（t=46.11、27.69、17.42）mRNA表达量高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）.Western bl.t检测结果显示,实验组MITF、RPE65蛋白表达量高于对照组.FCM检测结果显示,实验组、对照组RPE65阳性比例分为（18.91±1.76）％、（0.88±0.09）％;实验组RPE65阳性比较明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）.ERG检查结果显示,治疗组大鼠暗适应3.0 a-b波振幅较对照组显著提高,差异有统计学意义（t=7.543,P＜0.01）.结论苯丙氨酸显著提高hESC向RPE定向诱导效率.hESC诱导来源的RPE细胞视网膜下移植能改善视网膜变性模型动物视功能.

关键词：苯丙氨酸/药物作用胚胎干细胞细胞分化视网膜色素上皮

增生型糖尿病视网膜病变微创玻璃体切割手术后新生血管性青光眼的危险因素分析

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中华眼底病杂志 2021年第1期37卷 15-20页

作者：范小娥柯屹峰任新军李筱荣天津医科大学眼科医院、眼视光学院、眼科研究所天津市视网膜功能与疾病重点实验室天津市眼科学与视觉科学国际联合研究中心300384

目的分析增生型糖尿病视网膜病变(PDR)25G玻璃体切割手术(PPV)后发生新生血管性青光眼(NVG)的危险因素。方法回顾性病例研究。2017年1月至2018年12月在天津医科大学眼科医院首次行PPV治疗的PDR合并玻璃体积血(VH)患者340例340只眼纳入... 详细信息

目的分析增生型糖尿病视网膜病变(PDR)25G玻璃体切割手术(PPV)后发生新生血管性青光眼(NVG)的危险因素。方法回顾性病例研究。2017年1月至2018年12月在天津医科大学眼科医院首次行PPV治疗的PDR合并玻璃体积血(VH)患者340例340只眼纳入研究。其中,男性185例,女性155例;平均年龄(55.79±10.82)岁。患者平均糖尿病病程(13.01±7.70)年;平均空腹血糖(7.55±2.15)mmol.l.合并冠心病19例,合并脑梗死20例。所有患眼均行最佳矫正视力(BCVA)、眼压、间接检眼镜、彩色眼底照相等检查。BCVA检查采用国际标准Snel.en视力表进行,并将结果换算为最小分辨角对数(l.gMAR)视力记录。患眼平均l.gMARBCVA2.04±0.73,平均眼压(15.45±2.93)mmHg(1 mmHg=0.133kPa)。VH持续时间3周〜6个月,平均时间(2.98±1.46)个月。340只眼中,Ⅳ期93只眼(27.35%),Ⅴ期107只眼(31.47%),Ⅵ期116只眼(34.12%);伴牵引性视网膜脱离(TRD)83只眼。所有患眼均行25G标准经睫状体平坦部三通道PPV。57只眼手术前3d行玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗,234只眼手术中剥除内界膜,262只眼同时行白内障超声乳化手术,141只眼手术完毕时行玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗。手术后随访至少12个月,平均随访时间(10.80±5.79)个月。以裂隙灯显微镜或房角镜检查发现虹膜和(或)房角存在新生血管且眼压〉21mmHg者诊断为NVG。采用Kapl.n-Meier法和Cox单因素、多因素回归分析手术前基线因素、眼部因素、手术因素与手术后NVG发生的关系。结果340只眼中,PPV后发生NVG者66只眼(19.41%);发生NVG的时间为手术后6〜335 d,平均时间为(98.00±5.79)d。PPV后第3、6、12个月,NVG发生风险比分别为11.50%、15.29%、20.75%。单因素Cox分析结果表明,年龄、合并冠心病或脑梗死疾病等手术前基线因素对手术后发生NVG有影响(Pl.gMAR BCVA、手术前眼压等眼部因素对手术后发生NVG无影响(P>0.05);联合白内障超声乳化手术、手术中剥除内界膜、手术前3d玻璃体腔注射抗VEGF药物等手术因素对手术后发生NVG有影响(P<0.05)。将Cox单因素分析有意义的变量纳入多因素Cox比例风险模型进行分析,逐步回归探索手术后NVG的影响因素。结果显示,年龄、合并冠心病或脑梗死、联合白内障超声乳化和手术中内界膜剥除是手术后发生NVG的独立风险预测因素(P<0.05)。结论低龄、合并冠心病或脑梗死、联合白内障超声乳化手术是PDR患者PPV后发生NVG的危险因素,手术中剥除内界膜可减少NVG的发生。

关键词：糖尿病视网膜病变青光眼,新生血管性玻璃体切除术危险因素