高糖条件下人视网膜微血管周细胞的定量蛋白组学研究

作     者：肖梦然 张晓敏 邵先锋 肖静 杨付花 张慧 Vicki LEa 李筱荣 Xiao Mengran;Zhang Xiaomin;Shao Xianfeng;Xiao Jing;Yang Fuhua;Zhang Hui;Vicki LEa;Li Xiaorong

作者机构：天津医科大学眼科医院眼视光学院眼科研究所天津市视网膜功能与疾病重点实验室300384 

出 版 物：《中华实验眼科杂志》 (Chinese Journal Of Experimental Ophthalmology)

年 卷 期：2019年第37卷第9期

页      面：707-712页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81870675) 

主　　题：糖尿病视网膜病变 蛋白组学 人视网膜微血管周细胞 

摘      要：目的利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化,为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点。方法将HRMPCs分为对照组和高糖组,分别用葡萄糖浓度为25 mmol/L和35 mmol/L的DMEM培养基培养48 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组HRMPCs活性。提取各组细胞的蛋白并进行酶切,得到肽段,取2μg肽段进行飞行时间质谱(TOF-MS)检测,质谱的采集模式为数据依赖性(DDA),对得到的蛋白表达信息进行生物信息学分析。结果高糖组的HRMPCs数量较对照组明显减少,且高糖组的部分细胞出现体积变小、变形等改变。CCK-8实验结果显示,高糖组HRMPCs吸光度(A 450)值为0.75±0.04,明显低于对照组的0.91±0.05,差异有统计学意义(t=5.784,P=0.000 2)。本研究共鉴定到1 972个可定量蛋白,其中差异蛋白有54个(差异倍数1.5)。相比于对照组,高糖组细胞中上调的差异蛋白有13个,包括CTNNB1、CTBP2等,下调的差异蛋白有41个,包括SQSTM1、HMGCS1等。这些差异蛋白主要参与了三羧酸循环、有氧呼吸等生物学过程。结论高糖刺激HRMPCs会改变多种蛋白的表达,进而影响细胞的呼吸作用和ATP的生成,最终导致周细胞的缺失。