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脱氧雪腐烯醇(DON)对牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2475-2483页

作者：孙欢孙克佳姜晓龙刘爱菊马晓菲韩红叶姚大为马毅田树军河北农业大学动物科技学院保定071001 天津市畜牧兽医研究所天津300381 河北省牛羊胚胎技术创新中心保定071001

本试验旨在探究脱氧雪腐烯醇(DON)对牛卵母细胞体外成熟发育的影响及其作用机制。将牛卵丘卵母细胞复合体分别在含DON浓度为0、50、250、500、1000 ng·mL^(-1)的体外成熟培养液中进行体外成熟,检测卵丘细胞扩展程度及第一极体排出率,构... 详细信息

本试验旨在探究脱氧雪腐烯醇(DON)对牛卵母细胞体外成熟发育的影响及其作用机制。将牛卵丘卵母细胞复合体分别在含DON浓度为0、50、250、500、1000 ng·mL^(-1)的体外成熟培养液中进行体外成熟,检测卵丘细胞扩展程度及第一极体排出率,构建DON毒性模型。然后,借助此模型研究DON对卵母细胞的线粒体分布及后续受精卵裂率、囊胚发育率的影响,探究DON对牛卵母细胞体外成熟及后续发育能力的影响;通过检测体外成熟卵母细胞内的氧化相关因子(ROS、GSH)水平和抗氧化基因CAT、GPx4的mRNA表达量,揭示DON影响牛卵母细胞体外发育能力的分子机制。结果表明,250、500 ng·mL^(-1)的DON显著抑制卵母细胞的第一极体排出(Png·mL^(-1)的DON极显著抑制第一极体排出(Png·mL^(-1)的DON显著抑制卵丘卵母细胞扩展(Png·mL^(-1)的DON极显著抑制卵丘细胞扩展(Png·mL^(-1)作为毒性模型(DON组),与不含DON组(对照组)进行比较研究,结果发现,对照组与DON组的线粒体均匀分布比例(60.2%vs.40.0%)存在显著差异(P<0.05);试验组较对照组的受精卵裂率(33.6±3.6%vs.(67.7±2.6)%)及早期囊胚率((0.0±0.0)%vs.(18.3±2.2)%)均显著降低(P<0.05);试验组较对照组,卵母细胞内ROS水平(1.6 vs.1.0)显著升高(P<0.05),GSH相对水平(0.4 vs.1.0)显著降低(P<0.05),抗氧化基因CAT与GPx4的mRNA相对表达量(0.0 vs.1.0;0.6 vs.1.0)显著降低(P<0.05)。以上研究表明,DON对卵母细胞的体外成熟及早期胚胎发育具有抑制作用,其作用机制与DON破坏牛卵母细胞内抗氧化系统平衡相关。

关键词：脱氧雪腐烯醇牛卵母细胞体外成熟

新型冠状病毒肺炎肝功能损害的影响因素分析及其临床意义

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中华消化外科杂志 2020年第4期19卷 360-365页

作者：孙大伟张东田润辉李洋王宇石曹杰唐颖张楠昝涛高岚黄燕珠郑杨吕国悦吉林大学第一医院肝胆胰外科吉林大学肝移植中心长春130021 吉林大学第一医院重症医学科长春130021 吉林大学第一医院心理卫生科长春130021 吉林大学第一医院胸外科长春130021 吉林大学第一医院心血管疾病诊治中心长春130021 吉林大学第一医院神经内科长春130021 吉林大学第一医院呼吸与危重症医学科长春130021 吉林大学第一医院胃肠内科长春130021 华中科技大学同济医学院附属同济医院中法院区神经内科武汉430030

目的探讨新型冠状病毒肺炎(以下简称新冠肺炎)肝功能损害的影响因素及其临床意义。方法采用回顾性病例对照研究方法。收集2020年2月9—27日吉林大学第一医院第5批援鄂医疗队在华中科技大学同济医学院附属同济医院中法院区收治的51例新... 详细信息

目的探讨新型冠状病毒肺炎(以下简称新冠肺炎)肝功能损害的影响因素及其临床意义。方法采用回顾性病例对照研究方法。收集2020年2月9—27日吉林大学第一医院第5批援鄂医疗队在华中科技大学同济医学院附属同济医院中法院区收治的51例新冠肺炎患者的临床病理资料;男27例,女24例;平均年龄为68岁,年龄范围为36~86岁。所有患者参照《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》进行治疗。观察指标:(1)患者临床资料。(2)肝功能及肝功能损害治疗情况。(3)肝功能损害影响因素分析。正态分布的计量资料以±s表示,偏态分布的计量资料以M(范围)表示。计数资料以绝对数或百分比表示,组间比较采用χ2检验。采用Logistic回归分析进行单因素分析。结果(1)患者临床资料:51例患者中,新冠肺炎普通型21例,重型19例,危重型11例。31例伴有≥1种慢性疾病史,20例无慢性疾病史;13例有饮酒史,38例无饮酒史;7例有肝炎病史,44例无肝炎病史;入院时5例存在感染性休克,5例合并全身炎症反应综合征(SIRS),41例无休克和SIRS。51例患者体质量指数为(24±3)kg/m2、发病至入院时间为(13±5)d、体温为36.5℃(36.0~38.1℃)、心率为82次/min(50~133次/min)、呼吸频率为20次/min(12~40次/min)。51例患者入院24 h内白细胞计数为6.3×109/L(2.2×109/L^21.7×109/L)、肌酐为75μmol/L(44~342μmol/L),B型钠尿肽为214 ng/L(5~32407 ng/L)。(2)肝功能及肝功能损害治疗情况:51例患者丙氨酸氨基转移酶为31 U/L(7~421 U/L),天冬氨酸氨基转移酶为29 U/L(15~783 U/L),γ-谷氨酰转移酶为36 U/L(13~936 U/L),碱性磷酸酶为76 U/L(41~321 U/L),直接胆红素为4.9μmol/L(2.6~14.3μmol/L),间接胆红素为5.8μmol/L(2.6~23.9μmol/L),活化部分凝血活酶时间为37.2 s(30.9~77.1 s),凝血酶原时间为13.9 s(12.5~26.7 s);51例患者上述指标异常比例分别为47.1%(24/51)、47.1%(24/51)、35.3%(18/51)、13.7%(7/51)、7.8%(4/51)、2.0%(1/51)、21.6%(11/51)、19.6%(10/51)。51例患者中普通型、重型、危重型发生肝功能损害分别为10、9、10例。51例患者中22例肝功能正常(其中1例入院24 h后发生呼吸衰竭行机械通气),29例肝功能异常(其中9例入院24 h后发生呼吸衰竭行机械通气),两者比较,差异有统计学意义(χ2=5.57,P<0.05)。(3)肝功能损害影响因素分析。单因素分析结果显示:新冠肺炎临床分型危重型是影响患者发生肝功能损害的相关因素(优势比=10.000,95%可信区间为1.050~95.231,P<0.05)。结论伴有肝功能损害的新冠肺炎患者呼吸衰竭发生率增加。新冠肺炎临床分型危重型是影响患者发生肝功能损害的相关因素。

关键词：新型冠状病毒肺炎肝功能肝功能损害临床分型呼吸衰竭影响因素

甲磺酸仑伐替尼胶囊在中国健康受试者中的生物等效性研究

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药学与临床研究 2023年第4期31卷 289-294页

作者：徐秋芳周雨朦徐丹雷程颢朱叶肖大伟南京正大天晴制药有限公司药理临床中心南京210046 南京高新医院I期临床试验研究部南京210031

目的:研究国产甲磺酸仑伐替尼胶囊在中国健康受试者中的药代动力学特征,评价国产受试制剂(T)与原研参比制剂(R,商品名:乐卫玛■)的生物等效性。方法:采用空腹/餐后、随机、开放、两周期、两序列、双交叉试验设计。空腹试验和餐后试验分... 详细信息

目的:研究国产甲磺酸仑伐替尼胶囊在中国健康受试者中的药代动力学特征,评价国产受试制剂(T)与原研参比制剂(R,商品名:乐卫玛■)的生物等效性。方法:采用空腹/餐后、随机、开放、两周期、两序列、双交叉试验设计。空腹试验和餐后试验分别入组28例健康受试者,男女兼有。入组的受试者随机分配至T-R或R-T给药序列组,每周期单次空腹或餐后口服甲磺酸仑伐替尼胶囊受试制剂或参比制剂4 mg/粒。采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定0~120 h不同采集点的血浆中仑伐替尼浓度。采用Phoenix WinNonlin 8.2软件计算药代动力学参数(C_(max)、t_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)、t_(1/2)),并对主要参数进行生物等效性评价。结果:健康受试者空腹单次口服给药后,受试制剂及参比制剂的C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)的算数平均值分别为70.55和69.89 ng·mL^(-1)、801.3和792.6 h·ng·mL^(-1)、823.6和814.6 h·ng·mL^(-1),几何均值比值及90%CI分别为103.17%(96.52%~110.28%)、101.15%(98.09%~104.30%)和101.10%(98.12%~104.18%);健康受试者餐后单次口服给药后,受试制剂及参比制剂的C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)算数平均值分别为44.82和49.21 ng·mL^(-1)、738.1和747.5 h·ng·mL^(-1)、765.1和777.1 h·ng·mL^(-1),几何均值比值及90%CI分别为90.41%(83.92%~97.42%)、98.81%(96.16%~101.53%)和98.50%(95.94%~101.13%)。不良事件程度轻度,未出现严重不良事件和非预期不良反应。结论:国产甲磺酸仑伐替尼胶囊与参比制剂甲磺酸仑伐替尼胶囊(乐卫玛■)于空腹或餐后状态下给药后,在中国健康受试者体内两制剂生物等效。

关键词：仑伐替尼中国健康受试者药代动力学生物等效性高效液相色谱-串联质谱

超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱法定性、定量分析爆炸残留物中6种有机炸药

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理化检验（化学分册） 2023年第2期59卷 160-165页

作者：蔺大伟夏庆兵邵凯张冠男郑佳佳李秀云李文海孙红雷泰安市公安局刑事科学技术研究所泰安271000 公安部物证鉴定中心北京100038

用50%(体积分数)丙酮溶液浸泡后的擦拭棉球擦取检材上的爆炸残留物,加入5 mL丙酮,超声1 min,离心5 min。上清液于常温挥发至0.2 mL以下,用甲醇稀释至1 mL,过0.22μm有机相滤膜。滤液进入超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱仪,按照... 详细信息

用50%(体积分数)丙酮溶液浸泡后的擦拭棉球擦取检材上的爆炸残留物,加入5 mL丙酮,超声1 min,离心5 min。上清液于常温挥发至0.2 mL以下,用甲醇稀释至1 mL,过0.22μm有机相滤膜。滤液进入超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱仪,按照优化的仪器工作条件定性、定量分析其中的6种有机炸药三硝基甲苯(TNT)、硝化甘油(ng)、太安(PETN)、奥克托金(HMX)、黑索金(RDX)和特屈儿(CE)。以ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱为固定相,以不同体积比乙腈-甲醇混合溶液(体积比1∶1)和含0.5 mmol·L^(-1)氯化铵的5.0 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱。在用大气压化学电离(APCI)源电离后,利用全扫描/数据依赖二级扫描(Full MS/ddMS2)模式建立含有母离子精确质量数、二级碎片离子精确质量数和保留时间等信息的筛查列表,用于6种目标物的快速筛查和确证。以全扫描所得母离子作为定量离子,进行外标法定量。结果表明,6种有机炸药的质量浓度分别在10.0~1 000μg·L^(-1)(TNT、ng、HMX和RDX)和20.0~2 000μg·L^(-1)(ng和PETN)内与对应的峰面积呈线性关系,检出限分别为5.0μg·L^(-1)(TNT)、8.0μg·L^(-1)(CE、HMX和RDX)和15.0μg·L^(-1)(ng和PETN)。对空白棉球进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为56.6%~117%,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.40%~6.9%。方法用于一起实际案例的分析,定性筛查出了TNT。

关键词：超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱法有机炸药爆炸残留物

IL-2联合IL-15提高肾母细胞瘤患儿外周血NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

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中华小儿外科杂志 2018年第5期39卷 345-350页

作者：石秦林林涛沈炼桔刘丰张德迎陆鹏刘星何大维李旭良魏光辉重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室、儿童泌尿生殖发育与组织工程重点实验室 400014

目的观察肾母细胞瘤（WT）患儿外周血NK细胞经IL-2、ILd5扩增后对肾母细胞瘤SK-NEP-1的杀伤作用.方法以8例WT患儿作为病例组,8例健康体检儿童作为对照组.采集每例外周血4 ml,按Fieoll法分离外周血单个核细胞（PBMC）,流式细胞仪检测... 详细信息

目的观察肾母细胞瘤（WT）患儿外周血NK细胞经IL-2、ILd5扩增后对肾母细胞瘤SK-NEP-1的杀伤作用.方法以8例WT患儿作为病例组,8例健康体检儿童作为对照组.采集每例外周血4 ml,按Fieoll法分离外周血单个核细胞（PBMC）,流式细胞仪检测、分选两组PBMC中CD3＋ CD16＋ CD56＋ NK细胞;另采集病例组和对照组外周血4 ml,分离PBMC后,分两组进行培养[IL-2（100 U/ml）培养组、IL-2（100 U/ml）联合IL-15（10 ng/ml）培养组],流式细胞仪检测、分选培养后CD3-CD16＋ CD56＋ NK细胞.CCK8法检测在不同效靶比（E∶T分别为5∶1、10∶1、20∶1）（效应细胞：NK细胞;靶细胞：SK-NEP-1）情况下,WT患儿外周血NK细胞经IL-2、IL-15扩增后对SK-NEP-1细胞的杀伤作用.western blot检测培养前、IL-2培养组、IL-2联合IL-15组CD3-、CD16＋、CD56＋、NK细胞中TNF-α及TNF-β表达情况.结果病例组和对照组采用IL-2联合IL-15扩增后的NK细胞比例分别增加[（7.3±2.4）％比（21.2±3.2）％],[（4.5±1.6）％比（10.1±3.4）％];数量分别增多（70.60±22.5）,（30.12±33.16）倍,（P＜0.05）.E∶T为10∶1、20∶1时,与单用IL-2扩增比较,IL-2联合IL-15扩增组的NK细胞对肾母细胞瘤细胞的杀伤作用均增强[（16.3±2.1）比（10.5±1.6）]、[（23.9±3.2）比（13.7±2.5）],（P＜0.05）.病例组患儿外周血CD3 CD16＋ CD56＋ NK细胞采用IL-2联合IL-15培养后TNF-α和TNF-β的表达量,较IL-2组、培养前,均显著增加（P＜0.05）.结论 IL-2联合IL-15能够提高患儿外周血NK细胞的比例及数量,增加其分泌TNF的能力,从而提高其对肿瘤的杀伤作用.

关键词：肾母细胞瘤自然杀伤性细胞白细胞介素2 白介素15 儿童

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思茅松SSR-PCR反应体系优化研究

西南林业大学学报（自然科学） 2018年第5期38卷 34-37页

作者：王大玮保云莹唐红燕段安安蔡年辉许玉兰周军李思广西南林业大学云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室云南昆明650224 云南林业职业技术学院云南昆明650224 普洱市林业科学研究所云南普洱665099 云南省林业科学院云南昆明650201

以思茅松杂交亲本JG1号基因组DNA为模板,利用正交设计实验对影响SSR-PCR反应体系的主要因子进行了优化,建立了一套最佳思茅松SSR-PCR反应体系。结果表明:在25μL最佳反应体系中,各组分最佳含量分别为Mg^(2+) 2.0 mmol/L、DNA 60 ng、引... 详细信息

以思茅松杂交亲本JG1号基因组DNA为模板,利用正交设计实验对影响SSR-PCR反应体系的主要因子进行了优化,建立了一套最佳思茅松SSR-PCR反应体系。结果表明:在25μL最佳反应体系中,各组分最佳含量分别为Mg^(2+) 2.0 mmol/L、DNA 60 ng、引物0.50μmol/L、Taq DNA聚合酶0.25U、dNTP 0.20 mmol/L。利用11份个体对此SSR反应体系进行验证,获得扩增谱带清晰且多态性较好,证明该体系稳定可靠。

关键词：思茅松 SSR-PCR 反应体系优化

激活瞬时受体电位香草醛亚家族1改善平滑肌源性泡沫细胞形成机制研究

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中华老年心脑血管病杂志 2020年第1期22卷 66-69页

作者：尹延伟石进孙倩倩陈大伟赵发国杨芬宋琛李文平李金花空军特色医学中心神经内科北京100142 北京卫戍区第九离职干部休养所

目的探讨瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)在血管平滑肌细胞(VSMC)泡沫化过程中的作用及可能的机制。方法将野生型C57BL/6J雄性小鼠来源主动脉VSMC不加任何试剂刺激作为对照组,另将野生型C57BL/6J雄性小鼠和Toll样受体(TLR4)基因敲除(T... 详细信息

目的探讨瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)在血管平滑肌细胞(VSMC)泡沫化过程中的作用及可能的机制。方法将野生型C57BL/6J雄性小鼠来源主动脉VSMC不加任何试剂刺激作为对照组,另将野生型C57BL/6J雄性小鼠和Toll样受体(TLR4)基因敲除(TLR4-/-)雄性小鼠来源主动脉VSMC使用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)80μg/ml刺激72h,建立oxLDL细胞模型,依次作为oxLDL组、辣椒素组(造模前预先用辣椒素50μmol/ml刺激VSMC 12h)和TLR4-/-组,每组5例。采用油红O染色观察VSMC内脂质聚积情况;检测VSMC内胆固醇、TRPV1、TLR4蛋白及炎性因子白细胞介素6(IL-6)和TNF-α表达。结果与对照组比较,oxLDL组VSMC泡沫化程度、胆固醇水平明显升高,TLR4及其介导的IL-6[(44.03±3.76)ng/L vs (25.64±4.84)ng/L]、TNF-α表达[(155.64±13.32)ng/L vs (89.86±9.18)ng/L]明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与oxLDL组比较,辣椒素组VSMC中TRPV1蛋白表达明显上调,同时伴随VSMC泡沫化程度、胆固醇水平、TLR4及其介导的IL-6、TNF-α表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活TRPV1可通过干扰TLR4介导的炎性反应抑制VSMC泡沫化。

关键词：瞬时受体电位通道肌,平滑,血管泡沫细胞

国产DNATyper19^TM试剂盒对常见生物检材的适用性研究

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刑事技术 2018年第4期43卷 341-344页

作者：杨乐刘宏伟龚政王大伟刘磊齐朝阳张建哈尔滨市公安局哈尔滨150010 公安部物证鉴定中心北京市现场物证检验工程技术研究中心北京100038

目的测试国产DNATyper19^(TM)试剂盒对各类常见生物检材的适用性。方法应用DNATyper19^(TM)试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒对血斑、精斑、唾液斑、肌肉、软骨等各类常见生物检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、图谱完整性等方面... 详细信息

目的测试国产DNATyper19^(TM)试剂盒对各类常见生物检材的适用性。方法应用DNATyper19^(TM)试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒对血斑、精斑、唾液斑、肌肉、软骨等各类常见生物检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、图谱完整性等方面进行分析。同时,从灵敏度、对混合DNA样本的检验能力等方面对DNATyper19^(TM)试剂盒作评估。结果 620例生物检材经DNATyper19^(TM)试剂盒检验均获得完整清晰的谱带和稳定的分型结果,与IdentifilerTM Plus试剂盒在15个共有基因座上分型结果完全相同,未检见等位基因丢失现象。DNATyper19^(TM)试剂盒对0.0625ng阳性DNA样本能获得全部STR基因座分型,具有一定的微量DNA和混合DNA样本的检验能力。结论国产DNATyper19^(TM)试剂盒适用于各类常见生物检材,在日常案件检验中具有较高的应用价值。

关键词： DNATyper19^TM试剂盒 IdentifilerTMPlus试剂盒生物检材适用性

人用狂犬病疫苗(Vero细胞)宿主残余DNA qPCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 707-713页

作者：刘利强包小华周慧明曾智刘建华张海平迟宝琦汪树生刘大维吉林农业大学吉林长春130118 中国人民解放军联勤保障部队第964医院吉林长春130000 吉林惠康生物药业有限公司吉林长春130000 长春百克生物科技股份公司吉林长春130012

目的建立能够进行定性及定量分析的人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液宿主残余DNA检测的qPCR法,并进行验证。方法用Vero细胞DNA定量国家标准品建立qPCR标准曲线,磁珠法提取Vero细胞残余DNA。对该方法进行专属性、重复性、中间精密度、准确... 详细信息

目的建立能够进行定性及定量分析的人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液宿主残余DNA检测的qPCR法,并进行验证。方法用Vero细胞DNA定量国家标准品建立qPCR标准曲线,磁珠法提取Vero细胞残余DNA。对该方法进行专属性、重复性、中间精密度、准确度及耐用性验证,并确立线性范围及定量限。用该方法对3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液残余DNA进行定量分析及片段大小定性分析。结果采用qPCR法检测Vero细胞DNA定量国家标准品,标准曲线相关系数(R^(2))均>0.99,DNA检测范围为0.3 pg/mL~30 ng/mL。该方法专属性、重复性好,中间精密度、准确度及耐用性验证中,样品检测结果的相对标准偏差(RSD)均ng/剂,符合《中国药典》三部(2020版)相关标准;残余DNA>154 bp的片段占52%~63%。结论建立的方法专属性、重复性、中间精密度、耐用性好,可快速、准确地进行残余DNA的定性及定量分析,对人用狂犬病疫苗(Vero细胞)生产过程中和最终产品残余DNA含量的检测及控制具有重要意义。

关键词：人用狂犬病疫苗 Vero细胞残余DNA 实时荧光定量聚合酶链反应