人用狂犬病疫苗(Vero细胞)宿主残余DNA qPCR检测方法的建立及验证

作     者：刘利强 包小华 周慧明 曾智 刘建华 张海平 迟宝琦 汪树生 刘大维 LIU Liqiang;BAO Xiaohua;ZHOU Huiming;ZENG Zhi;LIU Jianhua;ZHANG Haiping;CHI Baoqi;WANG Shusheng;LIU Dawei

作者机构：吉林农业大学吉林长春130118 中国人民解放军联勤保障部队第964医院吉林长春130000 吉林惠康生物药业有限公司吉林长春130000 长春百克生物科技股份公司吉林长春130012 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第6期

页      面：707-713页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：吉林省科技发展计划(20200404119YY) 

主　　题：人用狂犬病疫苗 Vero细胞 残余DNA 实时荧光定量聚合酶链反应 

摘      要：目的建立能够进行定性及定量分析的人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液宿主残余DNA检测的qPCR法,并进行验证。方法用Vero细胞DNA定量国家标准品建立qPCR标准曲线,磁珠法提取Vero细胞残余DNA。对该方法进行专属性、重复性、中间精密度、准确度及耐用性验证,并确立线性范围及定量限。用该方法对3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液残余DNA进行定量分析及片段大小定性分析。结果采用qPCR法检测Vero细胞DNA定量国家标准品,标准曲线相关系数(R^(2))均0.99,DNA检测范围为0.3 pg/mL~30 ng/mL。该方法专属性、重复性好,中间精密度、准确度及耐用性验证中,样品检测结果的相对标准偏差(RSD)均154 bp的片段占52%~63%。结论建立的方法专属性、重复性、中间精密度、耐用性好,可快速、准确地进行残余DNA的定性及定量分析,对人用狂犬病疫苗(Vero细胞)生产过程中和最终产品残余DNA含量的检测及控制具有重要意义。