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自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑内LINGO-1的表达

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中华医学杂志 2014年第15期94卷 1184-1188页

作者：汪春娟郭守刚屈传强张杰付佩彩唐荣华华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 山东大学附属省立医院神经内科山东省邹平市人民医院神经内科

目的观察自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病后不同时间大脑组织中LINGO-1表达水平的变化。方法将C57／BL6小鼠完全随机化分为EAE模型组（15只）、佐剂组（15只）和对照组（15只），在发病第1、7、14、21、30天取大脑半球组织进行实时定... 详细信息

目的观察自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病后不同时间大脑组织中LINGO-1表达水平的变化。方法将C57／BL6小鼠完全随机化分为EAE模型组（15只）、佐剂组（15只）和对照组（15只），在发病第1、7、14、21、30天取大脑半球组织进行实时定量RT—PCR和Western印迹检测，观察LINGO-1的表达差异。同时应用Western印迹检测不同时间点RhoA、RhoA磷酸化形式（P—RhoA）的变化。结果EAE模型组小鼠发病后第1、7、14天LINGO-1mRNA表达水平是对照组的（4．63±0．25）、（2．72±0．12）和（1．98±0．16）倍（P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05），至第30天时接近于对照组（P〉0．05）；模型组LINGO—1蛋白表达在发病后第1、7、14、21、30天分别为对照组的（2.11±0．15）、（3．15±0．09）、（2．45±0．12）、（1．89±0．17）和（1．21±0．05）倍（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．05）；模型组小鼠p-RhoA蛋白表达也呈上调趋势，在造模成功1、7d上调最明显（P〈0．01）。而RhoA蛋白的表达无明显变化。结论LINGO-1在EAE小鼠脑组织中表达上调并呈-定规律性改变，可能通过RhoA激活抑制髓鞘修复。临床上针对多发性硬化的LINGO-1阻断治疗应在发病后尽早进行。

关键词：脑脊髓炎,自身免疫性,实验性多发性硬化 LINGO-1蛋白

不同类型连接肽对β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响

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食品与生物技术学报 2017年第9期36卷 938-943页

作者：王春娟唐诗涵邬敏辰董运海杭宜岭李剑芳江南大学食品学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重叠... 详细信息

以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重叠PCR技术扩增融合酶基因Auman5A-F-cbm^27和Auman5A-R-cbm^27,分别将Auman5A和融合酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物reAuMan5A、reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的酶学性质。结果表明:该3种β-甘露聚糖酶对角豆胶的K_m值分别为1.7、1.9和0.9 mg/mL。3种酶的最适温度T_(opt)分别为70、65和70℃;reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C在70℃的半衰期t_(1/2)^(70)分别为36 min和124 min,较reAuMan5A的(t_(1/2)^(70)=9 min)延长了3倍和12.8倍。reAuMan5A-R-C具有底物亲和力强、热稳定性高和pH稳定范围广等特点,在食品、饲料、医药和能源等领域有着巨大的应用潜力。

关键词：连接肽 β-甘露聚糖酶融合酶底物亲和力热稳定性

定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质

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食品与生物技术学报 2017年第8期36卷 819-825页

作者：董运海胡蝶邬敏辰唐诗涵王春娟李剑芳江南大学食品学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5A^(G320D)。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码... 详细信息

基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5A^(G320D)。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Gly^(320)的密码子GGT突变为Asp^(320)的GAC,构建出突变酶基因Auman5A^(G320D)。分别将Auman5A和Auman5A^(G320D)在毕赤酵母GS115中进行了表达,分析了表达产物AuMan5A和AuMan5A^(G320D)的酶学性质。结果表明:AuMan5A^(G320D)的最适温度Topt由突变前的65℃提升至70℃,在70℃的半衰期t_(1/2)^(70)由原酶的10 min延长至25 min;AuMan5A^(G320D)的比活性由突变前的351.2 U/mg提高到1 729.1 U/mg,其催化效率(k_(cat)/K_m)是原酶的9.3倍。将Gly^(320)突变为Asp^(320)不仅改善了AuMan5A的温度特性,而且显著提高了该酶的比活性和催化效率。

关键词： β-甘露聚糖酶定点突变温度特性比活性催化效率

β-甘露聚糖酶AuMan5A/Af酶学性质的改善与其Asp^(320)的相关性分析

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微生物学报 2016年第2期56卷 301-308页

作者：李剑芳董运海胡蝶王春娟唐诗涵邬敏辰江南大学食品学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

【目的】为改善宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)的酶学性质,本实验室前期将AuMan5A底物结合凹槽内一个7肽(^(316)KSPDGGN^(322))组成的loop替换为烟曲霉5家族β-甘露聚糖酶对应的氨基酸片段(PSPNDHF),得到loop替换突变酶AuMan5A... 详细信息

【目的】为改善宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)的酶学性质,本实验室前期将AuMan5A底物结合凹槽内一个7肽(^(316)KSPDGGN^(322))组成的loop替换为烟曲霉5家族β-甘露聚糖酶对应的氨基酸片段(PSPNDHF),得到loop替换突变酶AuMan5A/Af。为揭示AuMan5A/Af酶学性质显著改善与其Asp^(320)的相关性,定点突变构建突变体AuMan5A/Af^(D320G)。【方法】采用大引物PCR技术将AuMan5A/Af基因(Auman5A/Af)中编码Asp^(320)的密码子GAC突变为Gly^(320)的GGT,构建出突变体基因Auman5A/Af^(D320G),并在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物AuMan5A/Af^(D320G)的酶学性质。【结果】AuMan5A/Af^(D320G)的最适温度T_(opt)为70.0℃,变性温度T_m为71.5℃,介于AuMan5A(T_(opt)=65.0℃,T_m=64.5℃)和AuMan5A/Af(T_(opt)=75.0℃,T_m=76.6℃)之间;在70.0℃的半衰期为40 min,高于AuMan5A的10 min,但较AuMan5A/Af的480 min显著缩短;比活性分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的2.7和0.3倍;催化效率(k_(cat)/K_m)分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的3.9和0.3倍。【结论】将Asp^(320)突变为Gly^(320)显著影响了AuMan5A/Af的酶学性质,证明了Asp^(320)对AuMan5A/Af温度特性改善、比活性和催化效率显著提高的重要作用。

关键词： β-甘露聚糖酶 loop替换定点突变酶学性质

融合β-甘露聚糖酶基因的构建、表达及酶学性质的分析

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食品与生物技术学报 2016年第11期35卷 1135-1141页

作者：王春娟李剑芳唐诗涵董运海邬敏辰江南大学食品学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)是一种仅含催化域(CM)的单结构蛋白。为改善其酶学性质,基于理性设计将海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物结合域(CBM27)融合至Au... 详细信息

宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)是一种仅含催化域(CM)的单结构蛋白。为改善其酶学性质,基于理性设计将海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物结合域(CBM27)融合至Au Man5A的C-端,并采用重叠PCR技术构建融合酶基因Auman5A-cbm27。分别将Auman5A-cbm27和Auman5A在毕赤酵母GS115中进行表达,对重组表达产物re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A进行纯化和酶学性质测定。结果表明,re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A的最适温度均为68℃;两者分别在68和60℃及以下稳定。同时,前者较后者具有更广泛的p H稳定范围。re Au Man5ACBM27对角豆胶的Km值由融合前的1.7 mg/m L降至0.7 mg/m L,表明Au Man5A的底物亲和力得到了提高。

关键词： β-甘露聚糖酶催化域碳水化合物结合域热稳定性底物亲和力

上海市松江区蔬菜中有机磷农药残留的现状研究

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长江蔬菜 2008年第6X期 49-51页

作者：干春娟石国忠汤小弟杨决平上海市松江区食用农产品安全监督中心 201611 上海市松江现代农业园区五厍示范区上海市松江区农业技术推广中心

利用气相色谱法测定了上海市松江区22种蔬菜453份样品中有机磷农药残留量。结果表明,上海市松江区蔬菜中超标率最高的有机磷农药是毒死蜱,超标率为1.8%,主要集中在叶菜类。蔬菜中有机磷农药超标集中在种植散户和农贸市场,蔬菜园艺场和... 详细信息

利用气相色谱法测定了上海市松江区22种蔬菜453份样品中有机磷农药残留量。结果表明,上海市松江区蔬菜中超标率最高的有机磷农药是毒死蜱,超标率为1.8%,主要集中在叶菜类。蔬菜中有机磷农药超标集中在种植散户和农贸市场,蔬菜园艺场和种植大户的蔬菜合格率达100%。

关键词：蔬菜农药残留松江

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基于空域和DWT域特征的工程图隐写分析

制造技术与机床 2010年第9期 47-49页

作者：刘昌鑫欧阳春娟郭鸣唐卫东井冈山大学计算机科学系江西吉安343009

提出从梯度能量特征入手,加上Fraid的小波系数高阶统计量,提取72维特征。分类器采用支持向量机(SVM),仿真实验结果表明,提出的算法能够区分AutoCAD图形中是否含有隐藏信息。

关键词：工程图梯度能量高阶统计量隐写分析

NT-3基因修饰OECs-NSCs-复合细胞支架自体移植治疗脑出血的实验研究

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中华医学杂志 2014年第19期94卷 1483-1487页

作者：汪春娟杨锦珊林华伟付佩彩郭守刚唐荣华华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 山东医学高等专科学校山东大学附属省立医院神经内科济南250021

目的观察神经营养因子-3（NT-3）基因修饰嗅鞘细胞-神经干细胞（OECs-NSCs）复合细胞支架自体移植对脑出血大鼠运动功能的影响.方法建立Wistar大鼠尾状核脑出血模型,完全随机化分为A组：NT-3基因修饰的OECs-NSCs-复合细胞支架移植组;... 详细信息

目的观察神经营养因子-3（NT-3）基因修饰嗅鞘细胞-神经干细胞（OECs-NSCs）复合细胞支架自体移植对脑出血大鼠运动功能的影响.方法建立Wistar大鼠尾状核脑出血模型,完全随机化分为A组：NT-3基因修饰的OECs-NSCs-复合细胞支架移植组;B组：NT3-OECs-NSCs-复合细胞移植组;C组：支架移植组;D组：空白对照组.各组移植后第1、3、7、14和30天进行运动神经功能评分,并经免疫组织化学染色及荧光染色鉴定移植细胞在大鼠脑内的生存、分布及分化情况.结果 A、B组在移植后第7、14、30天神经功能评分分别为（2.12 ±0.12、1.50±0.11、0.52±0.08）、（2.10±0.16、1.79±0.09、0.91±0.10）明显低于C、D组;C组与D组间差异无统计学意义（P＞0.05）.在第14天和第30天,A组评分明显低于B组（P ＜0.05,P＜0.01）.免疫组织化学方法证实A组移植后存活的NSCs数量较多、向损伤区迁徙的细胞较多.结论 NT-3基因修饰OECs-NSCS-复合细胞支架移植治疗能显著改善脑出血大鼠的运动功能,且移植的NSCs具有较强的存活、迁移及分化能力.

关键词：嗅鞘细胞神经干细胞脑出血神经营养因子-3

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竹虫蛋白肽的制备及其活性研究

食品工业 2023年第7期44卷 97-102页

作者：朱静静王艳萍唐川惠早春娟德宏职业学院德宏678400

以竹虫为研究对象、肽得率为指标,研究碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶4种不同的酶对竹虫蛋白肽得率的影响,并确定胰蛋白酶为最佳提取酶;利用单因素试验和响应面优化工艺,最终得出竹虫蛋白肽的最佳制备工艺:加酶量80 mg/g... 详细信息

以竹虫为研究对象、肽得率为指标,研究碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶4种不同的酶对竹虫蛋白肽得率的影响,并确定胰蛋白酶为最佳提取酶;利用单因素试验和响应面优化工艺,最终得出竹虫蛋白肽的最佳制备工艺:加酶量80 mg/g、温度45℃、时间120 min、pH 10.0。在此优化试验条件下,竹虫蛋白多肽得率的预测值为326.277 mg/g,实际值则为320.215 mg/g,与模型预测值吻合。根据竹虫蛋白肽的抗氧化活性研究发现,不同分子量段的竹虫多肽都具有抗氧化活性,其中MW<5 kDa的竹虫蛋白肽的抗氧化活性最强,并且竹虫蛋白肽能促进小鼠肺成纤维细胞的增殖。因此,此工艺不仅可推广应用于竹虫蛋白肽产业化生产的备选工艺,也能提高竹虫的利用价值。

关键词：竹虫蛋白肽工艺抗氧化小鼠肺成纤维细胞增殖