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Characterization of SARS-CoV-2-specific antibodies in COVID-19 patients reveals highly potent neutralizing IgA

Signal Transduction and Targeted Therapy 2021年第2期6卷 254-256页

作者： Weihong Zeng Huan Ma chengchao ding Yunru Yang Yong Sun Xiaoxue Huang Weihuang He Yan Xiang Yong Gao Tengchuan Jin Division of Life Sciences and Medicine Department of Obstetrics and GynecologyThe First Afliated Hospital of USTCUniversity of Science and Technology of ChinaHefeiAnhuiChina Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale CAS Key Laboratory of Innate Immunity and Chronic DiseaseDivision of Life Sciences and MedicineSchool of Basic Medical SciencesUniversity of Science and Technology of ChinaHefeiAnhuiChina Division of Life Sciences and Medicine Department of Pulmonary and Critical Care MedicineThe First Affliated Hospital of USTCUniversity of Science and Technology of ChinaHefeiAnhuiChina Division of Life Sciences and Medicine Department of Infectious DiseasesThe First Affliated Hospital of USTCUniversity of Science and Technology of ChinaHefeiAnhuiChina Anhui Center for Disease Control and Prevention(Anhui CDC) HefeiAnhuiChina Kangrun Biotech LTD GuangzhouGuangdongChina Department of Microbiology Immunology and Molecular GeneticsUniversity of Texas Health Science Center at San AntonioSan AntonioTXUSA CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science Chinese Academy of ScienceShanghaiChina

Dear Editor,The coronavirus disease 2019(COVID-19),caused by the Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2(SARS-CoV-2),is an ongoing threat to public *** to the presence of neutralizing antibodies in convalescent patients,convalescent plasma transfusion has been tested as a promising therapy for severe COVID-19 patients.12 We and others previously found a surprisingly early serum lgA antibody response in the COVID-19 ***,the relative contribution of the lgA antibody towards virus neutralization with respect to other antibody isotypes is unknown.

关键词： patients antibodies transfusion

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弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备

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食品科学 2016年第23期37卷 141-146页

作者：丁承超谢曼曼曾海娟刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找Gen Bank获得20株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20株弧... 详细信息

弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找Gen Bank获得20株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20株弧菌Ompk基因序列;利用原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK,纯化OmpK后制备兔多克隆抗体;采用酶联免疫吸附分析法和蛋白质印迹法(Western-blotting)分别检测抗体效价和特异性。系统进化树和基因序列比对结果显示Ompk基因在弧菌中高度保守,核苷酸序列相似性在77%以上;原核表达系统成功表达了弧菌OmpK,蛋白经纯化后成功制备的兔多抗效价达1∶16 000;Western-blotting实验证实抗体具有很好的特异性;OmpK多克隆抗体在弧菌中普遍存在免疫交叉性。因此,弧菌Ompk基因序列分析及其抗体研制,不仅为弧菌快速免疫学检测提供可能性,也为以OmpK为靶点的水产疫苗研制奠定了基础。

关键词：弧菌 Ompk 原核表达纯化多克隆抗体免疫学检测

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菜籽粕发酵脱毒效果模糊评判

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中国粮油学报 2016年第3期31卷 96-100页

作者：方洁徐浩魏芬李菁楠丁承超刘武康丁之恩安徽农业大学合肥230036 安徽工商职业学院合肥230036

为了有效降低或脱除菜籽粕中抗营养因子含量,增强安全性,以菜籽粕为原料,就单菌、混菌及二次发酵方式开展发酵脱毒研究。以植酸、硫苷、芥子碱和异硫氰酸酯含量为考核指标,在此基础上建立模糊综合评判模型。结果表明:混菌发酵和二次发... 详细信息

为了有效降低或脱除菜籽粕中抗营养因子含量,增强安全性,以菜籽粕为原料,就单菌、混菌及二次发酵方式开展发酵脱毒研究。以植酸、硫苷、芥子碱和异硫氰酸酯含量为考核指标,在此基础上建立模糊综合评判模型。结果表明:混菌发酵和二次发酵脱毒综合效果较好,在混菌发酵中,硫苷、异硫氰酸酯、植酸和芥子碱的降解率分别达到75.12%、82.47%、87.56%、56.00%;在二次发酵中硫苷、异硫氰酸酯、植酸和芥子碱的降解率分别达到76.87%、78.57%、82.58%、68.00%。此外,模糊综合评价结果显示:二次发酵粕在等级评价中,达到I级水平,脱除抗营养因子效果最好。

关键词：菜籽粕脱毒单菌发酵混菌发酵二次发酵模糊综合评价

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inlA和inlB基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌侵袭HT29结肠癌细胞的影响

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食品科学 2016年第23期37卷 166-172页

作者：刘武康陈国薇吴嫚丁承超谢曼曼刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A和i... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A和inl B基因双缺失菌株,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测其主要毒力基因表达的变化,并以HT29结肠癌细胞为对象,研究inl A和inl B基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响。结果表明基因的缺失对其生长能力没有影响,但多个毒力基因的表达发生了不同程度的变化,同时发现inl A和inl B基因的缺失使LM侵袭HT29结肠癌细胞的能力显著下降(P<0.05)。本研究成功构建LM的inl A和inl B基因双缺失菌株,并初步研究了基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响,为深入研究内化素Inl A和Inl B在LM入侵宿主细胞过程中的具体作用提供了支持。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌内化素基因敲除 Realtime-PCR 侵袭细胞

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单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析

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食品科学 2017年第22期38卷 48-53页

作者：曾海娟刘武康谢曼曼丁承超董庆利刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基... 详细信息

在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析。结果显示,37℃摇床培养6 h后,缺失株的菌浓度显著低于EGDe Δact AΔinl B(P<0.001),培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,缺失株的sig B基因表达水平变化最明显(P<0.01),约下调90%;缺失株生物被膜形成量显著增加(P<0.05),培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异;对Coca-2细胞的侵袭无影响,表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用,并不影响菌株对细胞的侵袭力。此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持。

关键词：单核细胞性李斯特菌基因敲除生长能力细胞侵袭生物被膜

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单增李斯特菌nox基因的克隆、表达以及功能

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食品科学 2017年第2期38卷 46-51页

作者：吴嫚李森陈国薇罗勤刘武康丁承超董庆利刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 华中师范大学生命科学学院湖北武汉430079

以Gen Bank中报道的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(Gen Bank ID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactive oxygen s... 详细信息

以Gen Bank中报道的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(Gen Bank ID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)。首先通过诱导nox基因在BL21中表达产生Nox蛋白,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定该蛋白质分子质量;然后构建过表达菌株EGDe-nox,测定ROS产生情况,并使用实时荧光定量-聚合酶链式反应检测nox基因的过表达对Lm毒力基因表达的影响。结果表明,经鉴定Nox蛋白分子质量约为33 k D,过表达菌株EGDe-nox与对照组EGDe的ROS产生量相比并无多大变化,nox基因的过表达会导致与侵袭相关的基因act A、inlA和inlB以及毒力基因prfA的表达上调。由此推测,该Nox蛋白不能独立主导ROS的产量,但其过表达却可以增强毒力基因表达上调。本研究为继续探讨细菌中Nox的作用提供一定的参考依据。

关键词：单增李斯特菌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 nox基因活性氧

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基于双层Winkler地基的盾构穿越管线挠曲与脱空分析

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岩石力学与工程学报 2024年第5期43卷 1270-1281页

作者：林存刚王忠杰郭成超王复明陈瑜赵辰洋丁智中山大学土木工程学院广东省地下空间开发工程技术研究中心广东广州510275 隧道工程灾变防控与智能建养全国重点实验室广东广州510275 南方海洋科学与工程广东省实验室(珠海) 广东珠海519082 广东省海洋土木工程重点实验室广东广州510275 浙江省城市盾构隧道安全建造与智能养护重点实验室浙江杭州310015

盾构掘进诱发上覆管线的挠曲和脱空分析对其结构保护至关重要。基于双层Winkler地基并考虑管线上覆与下卧地基刚度差异,对盾构隧道开挖上覆管线挠曲和脱空进行理论与模型试验证实分析。基于荷载板试验对传统管线砂土地基承载理论加以修... 详细信息

盾构掘进诱发上覆管线的挠曲和脱空分析对其结构保护至关重要。基于双层Winkler地基并考虑管线上覆与下卧地基刚度差异,对盾构隧道开挖上覆管线挠曲和脱空进行理论与模型试验证实分析。基于荷载板试验对传统管线砂土地基承载理论加以修正,提出适用于盾构穿越管土相互作用分析的砂土地基刚度和极限承载力取值建议。参数分析发现,管线脱空宽度随管线抗弯刚度和隧道开挖地层损失增大而变大,但变化速率递减;当地层损失或管线抗弯刚度较大时,管土线弹性相互作用理论和考虑界面脱空的单层地基计算方法均高估了管线挠曲和弯矩,而考虑界面脱空的双层Winkler地基计算方法可更准确地预估管线挠曲。

关键词：隧道工程双层Winkler地基盾构掘进管土相互作用界面脱空模型试验地基承载理论

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单增李斯特菌prfA基因缺失菌株的构建及其生物学特性鉴定

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食品科学 2017年第10期38卷 12-17页

作者：郭亮陈国薇谢曼曼刘武康丁承超王淑娟罗勤刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe的p... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe的prfA基因,并通过测定生长曲线、毒力基因表达和侵袭Caco-2细胞能力等探讨单缺失菌株EGDe-ΔprfA生物学特性。通过测定生长曲线显示prfA敲除株和野生型EGDe二者生长状态无差异;运用实时定量荧光聚合酶链式反应检测EGDe-ΔprfA的主要毒力基因表达,结果显示plcA、plcB毒力基因的表达量分别上升至原来的2.5倍和2倍,inlA、inlB、inlC、actA、vip等均呈下降趋势,prfA基因表达量趋向于零;侵袭Caco-2细胞结果显示EGDe-ΔprfA侵袭数为野生株的1/5。该基因缺失菌株的构建及生物学特性研究对食源性致病菌EGDe致病机理研究具有重要意义并且提供了重要材料。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 prfA 基因敲除生物学特性

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单核增生性李斯特菌hly缺失菌株的构建及生物特性的初步鉴定

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食品科学 2017年第16期38卷 17-22页

作者：谢曼曼刘武康丁承超董庆利陈国薇曾海娟郭亮刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

为研究单核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差异,但E... 详细信息

为研究单核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差异,但EGD-eΔhly丧失溶血活性,细胞侵袭能力降低约90%,在10~7 cells/m L腹腔注射条件下不表现动物毒性。在转录水平上EGD-eΔhly的毒力基因inl C、prf A的表达量分别下降了81%和76%,act A、plc B的表达量分别提高了2.7倍和1.8倍。hly缺失菌株的成功构建及生物特性的初步研究结果为研究Lm致病机理提供依据。

关键词：单核增生性李斯特菌 hly基因同源重组生物特性

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副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

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食品科学 2017年第8期38卷 63-68页

作者：谢曼曼李建武王广彬曾海娟翟绪昭丁承超刘武康刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 徐州绿健乳品饮料有限公司江苏徐州221006

为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体,解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约,以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC 17802标准菌株免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选,获得稳定分泌抗副溶血性弧... 详细信息

为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体,解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约,以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC 17802标准菌株免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选,获得稳定分泌抗副溶血性弧菌(ATCC 17802)菌株的单克隆杂交瘤细胞株3F7D7E8C4,通过体内诱生腹水大量制备抗体,用亚类试剂盒测定抗体亚类为Ig G1;采用辛酸硫酸铵沉淀法以及亲和层析柱对腹水进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳实验鉴定单克隆抗体的纯度。制备得到腹水抗体效价为1∶16 000,纯化后抗体效价为1∶8 000,抗体敏感性IC_(50)达到10~6 CFU/m L。纯化后的抗体与12株副溶血性弧菌均能特异性结合,与其他9种非副溶血性弧菌的食源性致病菌均无交叉反应。

关键词：副溶血性弧菌单克隆抗体酶联免疫吸附测定

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