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Infective viruses produced from full-length complementary DNA of swine vesicular disease viruses HK/70 strain

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Chinese Science Bulletin 2006年第17期51卷 2072-2078页

作者： ZHENG Haixue LIU Xiangtao SHANG Youiun WU Jinyan BAI Xingwen JIN Ye SUN Shiqi GUO Huichen TIAN Hong FENG Xia YIN Shuanghui GUO Jianhong cong guozheng LIU Zaixin CHANG Huiyun MA Junwu XIE Qingge Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology Lanzhou Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural SciencesLanzhou 730046 China Graduate School Chinese Academy of Sciences Beijing 100081China

The full-length cDNA clone of swine vesicular disease virus HK/70 strain named pSVOK12 was constructed in order to study the antigenicity, replication, maturation and pathogenicity of swine vesicular disease virus. In vitro transcription RNA from pSVOK12 transfected IBRS-2 cells and the re- covered virus RNA were isolated and sequenced, then indirect hemagglutination test, indirect im- munofluorescence assays, eleectron microscope test, 50% tissue culture infecting dose (TCID50) assays and mouse virulence studies were performed to study the antigenicity and virulence of the recovered virus. The result showed that the infectious clones we ob- tained and the virus derived from pSVOK12 had the same biological properties as the parental strain HK/70. The full-length infectious cDNA clone, pSVOK12, will be very useful in studies of the anti- genicity, virulence, pathogenesis, maturation and replication of SVDV.

关键词：猪水泡病病毒 cDNA 传染性克隆 pSVOK12 反求遗传学

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秸秆综合利用技术及机械设备发展情况分析

农机使用与维修 2023年第12期 64-66页

作者：丛国政白城市农牧机械化研究院吉林白城137000

秸秆综合利用是顺应社会发展与资源需求的有力保证,该工作的落实受到了社会各界的广泛关注,作为重要的可再生资源,秸秆处理用在能源、农业、畜牧业和工业等多领域发挥出重要作用,与此同时,秸秆综合利用的产业体系也日渐丰富和完善。为... 详细信息

秸秆综合利用是顺应社会发展与资源需求的有力保证,该工作的落实受到了社会各界的广泛关注,作为重要的可再生资源,秸秆处理用在能源、农业、畜牧业和工业等多领域发挥出重要作用,与此同时,秸秆综合利用的产业体系也日渐丰富和完善。为提高秸秆综合利用质量,介绍了秸秆资源的利用价值,分析了秸秆综合利用关键技术及配套农机设备的应用与发展情况,总结了现阶段存在的不足,以期望秸秆资源在未来能创造更大价值。

关键词：秸秆综合利用技术机械设备发展情况

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精细农业的应用特征与农机工程创新对策

农机使用与维修 2023年第11期 73-75页

作者：丛国政白城市农牧机械化研究院吉林白城137000

随着农业信息技术的发展,精细农业对农业生产方式的转变越来越重要,通过精细农业的应用特征分析,论述精细农业中的农机工程创新存在问题与农机工程创新应用对策,为全面提升我国精细农业发展,进一步实现精细农业中农机工程创新提供相关... 详细信息

随着农业信息技术的发展,精细农业对农业生产方式的转变越来越重要,通过精细农业的应用特征分析,论述精细农业中的农机工程创新存在问题与农机工程创新应用对策,为全面提升我国精细农业发展,进一步实现精细农业中农机工程创新提供相关理论知识与应用参考。

关键词：精细农业农业信息技术农业生产方式农机工程工程创新

基于语义知识库的新媒体“内容+”按需生成方法研究

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天津科技 2017年第10期44卷 114-116,120页

作者：丛庆饶国政中共天津市滨海新区委员会宣传部天津300456 天津大学天津300070

以"互联网+新媒体",提出"内容+"的理念,推动新媒体与信息技术高度融合,构建了基于大规模语义知识库的新媒体"内容+"生成系统,从语义标注增强、语义检索、融合3个维度构建数字化新媒体,为新媒体网页的标注提供了较为完整的解决方案,提高... 详细信息

以"互联网+新媒体",提出"内容+"的理念,推动新媒体与信息技术高度融合,构建了基于大规模语义知识库的新媒体"内容+"生成系统,从语义标注增强、语义检索、融合3个维度构建数字化新媒体,为新媒体网页的标注提供了较为完整的解决方案,提高了网页检索的准确性。在此基础上,提出了新媒体"内容+"按需生成方法,从而推动互联网与新媒体融合的新契机,以"内容+"实现互联网业与文广产业的融合,并在融合中寻求价值提升、实现跨越式发展的路径。

关键词：新媒体内容+ 语义标注语义知识库

逆转录病毒载体介导的稳定表达口蹄疫病毒3D基因的BHK21细胞系的建立

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微生物学报 2008年第8期48卷 1115-1120页

作者：毕研丽沈小燕丛国正刘湘涛常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1... 详细信息

【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1-3D。用pBPSTR1-3D和pVSV-G双质粒瞬时转染GP2-293包装细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染BHK-21细胞,嘌呤霉素持续筛选12d后获得阳性克隆,并用有限稀释法挑选单个阳性细胞克隆。【结果】应用PCR、RT-PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞中扩增到3D基因,证实目的外源基因能转录并被稳定整合进宿主细胞基因组中。经SDS-PAGE、Westernblot、间接免疫荧光检测到在不同代次的阳性细胞中有目的蛋白表达。【结论】本试验利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将外源基因插入到靶细胞的基因组中,构建了稳定表达口蹄疫病毒RNA聚合酶的包装细胞系,为研究3D基因表达及其蛋白定位提供了方便,也为下一步研究RNA聚合酶生物学功能和疫苗研制提供了科学依据。

关键词：口蹄疫病毒 3D基因逆转录病毒载体pBPSTR1 BHK-21细胞系

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB的原核表达及应用(英文)

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生物工程学报 2011年第2期27卷 180-184页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政高闪电中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

旨在建立一种检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的敏感、特异的ELISA方法。克隆、表达了口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因,原核表达的重组蛋白经亲和层析法纯化及Western blotting鉴定后作为包被抗原,建立检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的3AB间接... 详细信息

旨在建立一种检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的敏感、特异的ELISA方法。克隆、表达了口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因,原核表达的重组蛋白经亲和层析法纯化及Western blotting鉴定后作为包被抗原,建立检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的3AB间接ELISA方法,通过与商品化试剂盒3ABC-ELISA的比对试验对其进行评价。结果显示,重组蛋白3AB以包涵体形式表达;能与口蹄疫病毒感染血清发生特异性反应,而不能与疫苗免疫动物血清发生反应;在检测田间样品时,与3ABC-ELISA具有同样的特异性和敏感性(P>0.05)。因此,认为重组蛋白3AB是一种十分有用的分子标记物,能有效区分口蹄疫病毒感染动物和疫苗免疫动物。

关键词：口蹄疫病毒蛋白反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 酶联免疫反应(ELISA)

口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))致牛肾细胞(MDBK)作用的形态学观察

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生物工程学报 2009年第11期25卷 1614-1620页

作者：郝峰强丛国正高闪电林彤独军政邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家15蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口... 详细信息

为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞的病变效应。结果显示,MDBK细胞系在诱导表达口蹄疫病毒Lpro24h后,光学显微镜下细胞形态表现为细胞体积缩小、核浓缩、细胞周围出现透明圈等现象;Hoechst33258染色检测呈现典型的细胞核浓缩和梅花状核碎裂;诱导表达Lpro36h后,AO-EB染色显示早期病变细胞核染亮绿色呈致密斑块或碎片状,晚期病变细胞核染橘黄色呈致密斑块;DNA凝胶电泳显示可见的DNALadder"梯状"条带。证明口蹄疫病毒Lpro在体外可诱导MDBK细胞发生凋亡。

关键词：口蹄疫病毒 Lpro MDBK 细胞凋亡

Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

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生物工程学报 2009年第5期25卷 767-772页

作者：林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulos... 详细信息

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。

关键词： Asia1型FMDV 单克隆抗体胶体金免疫层析法

Asia I型口蹄疫病毒中和表位与羊IgG重链恒定区的融合表达及免疫原性测定

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生物工程学报 2010年第4期26卷 454-461页

作者：王景锋邵军军李菁高闪电独军政丛国正林彤常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

VP1蛋白是口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）诱导机体产生抗病毒感染免疫的主要蛋白,含有病毒的若干中和表位。本研究设计和合成了由AsiaI型FMDVVP1蛋白136~160aa和198~211aa两个表位组成的重复串联表位的编码基因,并克... 详细信息

VP1蛋白是口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）诱导机体产生抗病毒感染免疫的主要蛋白,含有病毒的若干中和表位。本研究设计和合成了由AsiaI型FMDVVP1蛋白136~160aa和198~211aa两个表位组成的重复串联表位的编码基因,并克隆了羊IgG重链恒定区编码基因。利用BamHI、EcoRI和XhoI位点将2个基因片段依次克隆到pPROExHTb载体,构建成重组质粒pPRO-FshIgG,将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,以IPTG诱导表达得到融合蛋白FshIgG。100μgFshIgG蛋白免疫豚鼠后刺激豚鼠产生了高效价的FMDV中和抗体,而且使这些免疫豚鼠在用200ID50剂量FMDV攻击时得到了完全保护。由此证明,羊IgG重链恒定区蛋白能够作为FMDV表位肽的载体,而融合蛋白FshIgG可成为一种口蹄疫表位疫苗候选物用于口蹄疫的预防。

关键词：口蹄疫病毒抗原表位羊IgG重链恒定区