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马立克氏病疫苗胚胎免疫鸡红细胞免疫功能的研究

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畜牧兽医学报 2000年第5期31卷 436-440页

作者：鲍恩东苏建东南京农业大学动物医学院南京210095

作者检测了胚胎免疫鸡 (孵化至 18日龄时鸡胚接种马立克氏病二价疫苗 )及其相应 1日龄免疫鸡和未免疫鸡的红细胞CR1花环率和红细胞IC花环率以观察其外周血液红细胞免疫功能。结果表明 ,随着试验鸡日龄的增长 ,其外周血液中红细胞CR1活... 详细信息

作者检测了胚胎免疫鸡 (孵化至 18日龄时鸡胚接种马立克氏病二价疫苗 )及其相应 1日龄免疫鸡和未免疫鸡的红细胞CR1花环率和红细胞IC花环率以观察其外周血液红细胞免疫功能。结果表明 ,随着试验鸡日龄的增长 ,其外周血液中红细胞CR1活性呈现一定的递减性变化 ,但胚胎免疫鸡红细胞CR1活性的降低幅度远低于其它两组鸡。胚免鸡出壳后 7日龄进行vMDV攻毒 ,结果也显示胚胎免疫可显著阻止红细胞免疫功能的下降。此外 ,胚免组鸡血清中红细胞免疫粘附抑制因子活性下降 (IC形成减少 ) 。

关键词：马立克氏病胚胎红细胞免疫鸡

Effects of heat stress at an early age on various blood and meat quality parameters in broiler chickens

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Effects of heat stress at an early age on various blood and ...

Hsp90αinvolves in cell damages and apoptosis after heat stress in primary myocardial cells of neonatal rat

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十五次、中国病理生理学会动物病生专业委员会第十四次学术讨论会

作者： Jimian,Yu endong,bao (College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing China 210095)

The objective of this study was to investigate the effects of varying periods of acute ante-mortem heat stress on meat quality attributes and selected serum metabolites of Arbor Acre (AA) broiler *** AA broilers (n=120) were randomly divided into 6 groups of 20 birds per *** 30 days of adaptive feeding at ambient temperature,100 experimental broilers were suddenly heat stressed by

关键词： heat stress meat quality broiler chickens

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Hsp90αinvolves in cell damages and apoptosis after heat str...

马立克氏病胚胎免疫雏鸡体重和免疫器官增重变化

2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

作者： Ali Islam Adam Abdelnasir Buriro Rehana Cheng Yanfen Chen Hongbo bao endong College of Veterinary Medicine Nanjing Agricultural University

This study investigated the effect of heat stress on primary myocardial cell damage,histopathological lesions,apoptosis and it’s signal transduction molecules and the expression of Hsp90αprotein and its coraresponding mRNA in response to heat stress in *** inc ubated at 37℃for 72 h in humidified atmosphere of 5%CO and 95%air,the myocardial cells were suddenly heat stressed for 10 min,20 min,40 min,1 h,2 h,4 h,6 h and 8 h in another incubator with 95%air and 5%CO at 42℃.Levels of CK enzyme,histopathology,apoptosis,apoptosis signal transduction and hsp90αwere detected using enzymatic assay,histopathological technique,flow cytometry and western blot *** levels were gradually changed during heat stress,suggesting that the myocardial cells were distinctly stressed and obviously damaged by the heat *** results of flow cytometry showed that apoptotic levels at 40 min and 8 h of heat stress were significantly higher than those of the control(P<0.01 and P<0.05) respectively. Levels of cytochrome c and cleaved caspase-3 significantly increased at 40 min heat *** 40 min heat stress,hsp90αshow significant *** results demonstrate that apoptosis inhibit hsp90α.In contrast,Hsp90αsignificantly increased(P<0.01) at 6 and 8 h heat *** elevation of hsp90αin the primary myocardial cells is important marker at the later time of the heat shock and may act as a protective protein.

关键词：

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畜牧与兽医 1998年第1期30卷 4-5页

作者：鲍恩东南京农业大学动物医学院

１８日龄鸡胚免疫接种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗后，对出壳后雏鸡及其用马立克氏病（ＭＤ）病毒攻毒鸡体重与免疫器官增长效果的对比研究表明：相同饲养条件下胚胎免疫雏鸡的增长速度高于非免疫对照鸡，而且胚胎免疫组雏鸡免疫器官的... 详细信息

１８日龄鸡胚免疫接种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗后，对出壳后雏鸡及其用马立克氏病（ＭＤ）病毒攻毒鸡体重与免疫器官增长效果的对比研究表明：相同饲养条件下胚胎免疫雏鸡的增长速度高于非免疫对照鸡，而且胚胎免疫组雏鸡免疫器官的生长发育普遍较相应的对照组雏鸡快。

关键词：马立克氏病胚胎免疫生长发育增重率

1株禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其实时荧光定量PCR检测方法的建立

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畜牧与兽医 2020年第1期52卷 115-121页

作者：金娟李亚杰鲍恩东南京农业大学动物医学院江苏南京210095 天津瑞普生物技术股份有限公司瑞普生物研究院天津300308

自禽传染性支气管炎病毒流行较严重地区的患鸡组织病料中分离得到1株疑似毒株,利用鸡胚培养、气管环及动物回归试验、电镜观察、RT-PCR等多种方法及对其S1基因序列进行比较分析,确定该分离毒株为禽传染性支气管炎病毒QX型。同时针对该... 详细信息

自禽传染性支气管炎病毒流行较严重地区的患鸡组织病料中分离得到1株疑似毒株,利用鸡胚培养、气管环及动物回归试验、电镜观察、RT-PCR等多种方法及对其S1基因序列进行比较分析,确定该分离毒株为禽传染性支气管炎病毒QX型。同时针对该新分离的传染性支气管炎病毒建立了实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:针对该分离毒株的S1基因区设计1对引物和TaqMan探针,制备质粒标准品,建立标准曲线,其线性关系为y=-3.385 7x+42.235,R^2=0.999,扩增效率为97.5%,该法能区分常见禽类流行病毒,检测灵敏度可达42.1拷贝数/μL,比普通PCR检测限度高,重复性良好,因而该实时荧光定量PCR检测方法可靠。本试验同时进行了拷贝数与半数鸡胚感染量(EID50)对应关系研究,证明了在控制病毒代次、冻融次数等条件下,建立线性关系为y=0.249 2x+1.341×10^6(以拷贝数为x轴,EID50为y轴),R^2=0.956 4,可实现拷贝数替代EID50。

关键词： S1基因实时荧光定量PCR 传染性支气管炎病毒禽

猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 515-521页

作者：张晶晶孙慧敏宋家升鲍恩东南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江迪福润丝生物科技有限公司浙江杭州310051

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... 详细信息

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。

关键词：猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株重组病毒病毒筛选

鹅星状病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1616-1623页

作者：王宏宇朱寅初云涛张存鲍恩东南京农业大学动物医学院南京210095 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所杭州310021

鹅星状病毒(goose astroviruses,GAstV)作为一种雏鹅新发病原,对养鹅业造成巨大经济损失,在尚无有效治疗手段情况下,加强疫病及时检测和防控十分重要。为建立快速、特异且灵敏的鉴别GAstVⅠ型和GAstVⅡ型的病毒检测方法,本研究根据GAst... 详细信息

鹅星状病毒(goose astroviruses,GAstV)作为一种雏鹅新发病原,对养鹅业造成巨大经济损失,在尚无有效治疗手段情况下,加强疫病及时检测和防控十分重要。为建立快速、特异且灵敏的鉴别GAstVⅠ型和GAstVⅡ型的病毒检测方法,本研究根据GAstVⅠ和GAstVⅡ的保守区域RdRp基因序列,设计合成2对特异性引物和2种不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了一种双重荧光定量PCR检测方法,以达到在同一反应体系中同时定量检测GAstVⅠ和GAstVⅡ的目的。结果显示,GAstVⅠ和GAstVⅡ的最小检出量分别为43.3、6.49 copies·μL^(-1);重复试验的变异系数不超过0.5%;该方法对DPV、GPV、GTMUV、GRV、AIV(H9N2)等病毒核酸无交叉反应。综上表明,本研究建立的可鉴别GAstVⅠ和GAstVⅡ的双重荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好。可用于临床GAstVⅠ和GAstVⅡ的快速鉴别诊断,也可用于两种基因型GAstV的定量分析。

关键词：鹅星状病毒Ⅰ型鹅星状病毒Ⅱ型双重荧光定量RT-PCR TaqMan探针

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鸡MD肿瘤细胞DNA含量及细胞凋亡的特性

南京农业大学学报 2000年第3期23卷 81-84页

作者：张书霞陈万芳鲍恩东南京农业大学动物医学院南京210095

用SPF来杭鸡复制MD肿瘤模型 ,取MD肿瘤组织和相同日龄鸡的正常组织 ,制成单个细胞悬液 ,碘化丙锭染色后 ,用流式细胞仪检测细胞DNA含量和细胞凋亡率。结果 :(1)MD肿瘤有二倍体肿瘤和异倍体肿瘤 ,31例MD肿瘤中2 6例为二倍体肿瘤 ,5例是... 详细信息

用SPF来杭鸡复制MD肿瘤模型 ,取MD肿瘤组织和相同日龄鸡的正常组织 ,制成单个细胞悬液 ,碘化丙锭染色后 ,用流式细胞仪检测细胞DNA含量和细胞凋亡率。结果 :(1)MD肿瘤有二倍体肿瘤和异倍体肿瘤 ,31例MD肿瘤中2 6例为二倍体肿瘤 ,5例是异倍体肿瘤 ;(2 )MD肿瘤细胞动力学特点是 :DNA合成期 (S期 )细胞比例明显增加 ,肾、肝、卵巢和睾丸MD肿瘤细胞S期分别为 12 13 % ,11 30 % ,12 31%和 15 2 6 % ,相应组织细胞依次为 1 37% ,1 2 7% ,1 5 4%和 0 0 7% ,增殖指数 (proliferationindex ,PI)显著增高 ;(3)MD肿瘤细胞凋亡率明显低于正常组织 ,肾、肝、卵巢和睾丸MD肿瘤细胞凋亡率分别是 0 33% ,0 6 9% ,0 73 % ,0 16 % ,而相应组织细胞凋亡率则为 1 40 % ,2 44 % ,1 92 %和 2 11%。提示细胞周期紊乱、细胞增殖活跃。

关键词：马立克氏病 DNA含量细胞调亡流式细胞术鸡

鹅星状病毒的分离鉴定及其在雏鹅体内的分布规律

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畜牧与兽医 2020年第4期52卷 72-79页

作者：宋婷婷杨燚刘冠星鲍恩东南京农业大学动物医学院南京江苏210095 天津瑞普生物技术股份有限公司研究院天津300308

研究目的旨在鉴定引起雏鹅痛风病的病原,并观察其在雏鹅体内主要器官中的分布、持续时间以及排毒周期。通过鹅胚绒毛尿囊膜接种法分离病原,利用RT-PCR检测、电镜观察、动物回归、基因序列分析等方法确定该病毒为鹅星状病毒,命名为GAstV-... 详细信息

研究目的旨在鉴定引起雏鹅痛风病的病原,并观察其在雏鹅体内主要器官中的分布、持续时间以及排毒周期。通过鹅胚绒毛尿囊膜接种法分离病原,利用RT-PCR检测、电镜观察、动物回归、基因序列分析等方法确定该病毒为鹅星状病毒,命名为GAstV-AH;利用RT-PCR方法检测该病毒在雏鹅体内的分布,以及病毒的排毒周期。受试雏鹅临床病理变化显示,患鹅肾脏苍白肿大,心脏、肝脏呈现尿酸盐沉积为主要特征的病变;自病死雏鹅的肝、肾组织中分离得到1株病毒,该分离毒能致死鹅胚,致死率约为40%~60%,死亡鹅胚出现绒毛尿囊膜增厚、胚体充血并伴有生长抑制;电镜观察,死亡鹅胚尿囊液中病毒粒子呈球状,无囊膜,直径约为28~30 nm;该病毒人工感染1日龄雏鹅后可复制出与临床自然发病雏鹅相同的临床症状和病理变化,并能从发病组织中分离到病毒;分离毒对氯仿、胰蛋白酶等制剂不敏感,对热处理稳定,对酸稍不稳定;该病毒核酸为单链RNA,由3′UTR、5′UTR,ORF1a、ORF1b、ORF23个开放阅读框和一个poly(A)尾组成,将ORF2编码的氨基酸进行进化树分析发现,其与已发表的3株鹅星状病毒同源性在98.5%~99.2%;该病毒在实验室条件下感染雏鹅,在感染后2~12 d能检测到排毒,12 d后停止排毒,直至30 d未再次出现排毒;感染鹅的心、肝、脾、肺、肾脏在攻毒后2~8 d内,RT-PCR法对病毒的检出率为100%,12~16 d的检出率为50%~70%,20~30 d后不再检出该病毒,肠中未检出该病毒。

关键词：星状病毒分离鉴定排毒分布雏鹅