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基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨如金解毒散对巨噬细胞焦亡模型的影响

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中国免疫学杂志 2024年

作者：马宇慧李祎楠孟佳磊齐璐瑶雷鸣孙芳园上海中医药大学附属普陀医院全科医学科上海中医药大学附属第七人民医院

目的：观察如金解毒散对RAW264.7细胞焦亡模型的治疗作用，并探讨其抗炎机制。方法：RAW264.7细胞经LPS刺激4 h，ATP刺激30min构建细胞焦亡模型。分组包括对照组（Control）、模型组（LPS+ATP）、如金解毒散低剂量组（RJJDS50μg/ml）... 详细信息

目的：观察如金解毒散对RAW264.7细胞焦亡模型的治疗作用，并探讨其抗炎机制。方法：RAW264.7细胞经LPS刺激4 h，ATP刺激30min构建细胞焦亡模型。分组包括对照组（Control）、模型组（LPS+ATP）、如金解毒散低剂量组（RJJDS50μg/ml）、如金解毒散中剂量组（RJJDS100μg/ml）、如金解毒散高剂量组（RJJDS200μg/ml）、地塞米松组（DEX组）。随后收集各组细胞及上清液，检测上清液中LDH释放量，正倒置荧光显微镜观察细胞ROS水平，ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的含量，蛋白免疫印迹法（Westernblotting）检测细胞中NLRP3、Caspase-1p45、Caspase-1p20、GSDMD-FL和GSDMD-N的蛋白水平，正倒置荧光显微镜观察PI阳性细胞数量。结果：与对照组相比，模型组细胞上清液中LDH、TNF-α、和IL-1β的含量显著升高（P <0.05）；模型组细胞ROS水平显著升高（P<0.05）；NLRP3、Caspase-1p20和GSDMD-N 的蛋白水平上调（P < 0.05）；PI 阳性细胞数增多（P < 0.05）。与模型组相比，如金解毒散各治疗组和阳性药DEX组显著降低了RAW264.7细胞焦亡模型上清液中LDH、TNF-α和IL-1β的含量（P < 0.05）；下调了NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白的表达（P < 0.05）；PI阳性细胞数显著减少（P < 0.05）。结论：如金解毒散抑制巨噬细胞焦亡，发挥抗炎作用涉及NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号。

关键词：如金解毒散急性肺损伤巨噬细胞细胞焦亡炎症小体

复方鱼桔颗粒通过抑制BMDM中NLRP3炎症小体激活发挥抗炎效果的作用机制研究

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中国免疫学杂志 2024年第7期40卷 1467-1473页

作者：马宇慧孟佳磊袁林齐璐瑶欧阳冰清雷鸣上海中医药大学附属第七人民医院上海200137 急救与创伤研究教育部重点实验室急诊创伤学院海南医学院海口571199

目的:研究复方鱼桔颗粒(FFYJ)对脂多糖(LPS)诱导的原代骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)炎症模型的影响,及其对巨噬细胞中核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的干预作用。方法:从C57BL/6小鼠腿部骨髓中提取并分离出原代细... 详细信息

目的:研究复方鱼桔颗粒(FFYJ)对脂多糖(LPS)诱导的原代骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)炎症模型的影响,及其对巨噬细胞中核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的干预作用。方法:从C57BL/6小鼠腿部骨髓中提取并分离出原代细胞,经50 ng/ml M-CSF诱导7 d后得到BMDM。分为对照组(Control)、模型组(LPS+ATP)、FFYJ低剂量组(FFYJ 50μg/ml)、FFYJ中剂量组(FFYJ 100μg/ml)、FFYJ高剂量组(FFYJ 200μg/ml)、阳性药地塞米松组(DEX)。FFYJ治疗组和阳性药组预处理BMDM 1 h后开始造模。乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测各组细胞上清中LDH的含量;ELISA检测各组细胞上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和IL-1β的含量;qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA水平;Western blot检测各组细胞中NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白水平;倒置荧光显微镜观察各组细胞经Hoechst-PI染色后的细胞焦亡情况。结果:与对照组相比,模型组细胞上清液中LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著升高(P<0.000 1);模型组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著升高(P<0.000 1);p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1p20和GSDMD-N的蛋白水平显著升高(P<0.05);PI阳性细胞数明显增多(P<0.05)。与模型组比较,FFYJ治疗和阳性药显著降低了BMDMs上清液中LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β的含量(P<0.05);下调了细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平(P<0.05);抑制了p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白的表达(P<0.05);显著减少了PI阳性细胞数(P<0.05)。结论:FFYJ通过抑制BMDM原代巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活发挥抗炎效果。

关键词：复方鱼桔颗粒 NLRP3炎症小体 BMDM 炎症因子

5-羟色胺在电针预处理脓毒症小鼠心肌损伤中的作用机制研究

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中华危重病急救医学 2024年第8期36卷 835-840页

作者：李芸峰齐璐瑶欧阳冰清耿欢李笑笑雷鸣上海中医药大学附属第七人民医院重症医学科上海

目的观察电针足三里穴预处理脓毒症心肌损伤小鼠心肌组织中5-羟色胺(5-HT)水平的变化, 探讨电针在脓毒症心肌损伤中发挥的保护效应及可能机制。方法按随机数字表法将20只雄性C57BL/6小鼠分为对照组(NC组)、脓毒症模型组(LPS组)、电针组... 详细信息

目的观察电针足三里穴预处理脓毒症心肌损伤小鼠心肌组织中5-羟色胺(5-HT)水平的变化, 探讨电针在脓毒症心肌损伤中发挥的保护效应及可能机制。方法按随机数字表法将20只雄性C57BL/6小鼠分为对照组(NC组)、脓毒症模型组(LPS组)、电针组(EA组)、电针加氟西汀组(EA+FLU组), 每组5只。采用腹腔注射脂多糖(LPS)10 g/L的方法建立脓毒症心肌损伤小鼠模型;NC组腹腔注射等量生理盐水。制模前3 d, EA组和EA+FLU组电针双侧足三里穴15 min, 每日1次, 连续3 d;EA+FLU组在电针前腹腔注射氟西汀1.4 g/L。制模后, 苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学改变;检测血清中炎症因子白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平, 心肌内5-HT含量, 心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平, 以及心肌组织中三磷酸腺苷(ATP)、乳酸含量;定量聚合酶链反应(qPCR)检测心肌组织5-羟色胺转运体(5-HTT)、己糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运体4(GLUT4)的mRNA表达;免疫荧光法检测心肌组织中GLUT4的表达。结果与NC组相比, LPS组和EA+FLU组血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量, 心肌内5-HT含量, 心肌组织损伤标志物CK-MB、cTnI含量均明显升高。与LPS组相比, EA组上述指标均明显下降〔IL-6(ng/L):443.03±156.16比19?843.75±0.00, IL-1β(ng/L):75.72±10.60比894.66±350.88, TNF-α(ng/L):46.17±4.71比533.01±170.58, 5-HT(μg/L):161.19±5.96比244.74±14.38, CK-MB(ng/L):468.21±12.46比662.02±22.54, cTnI(ng/L):0.83±0.05比0.99±0.08, 均P<0.05〕。与NC组相比, LPS组、EA组和EA+FLU组心肌组织ATP水平均明显下降, 乳酸水平均明显升高。与LPS组相比, EA组心肌组织ATP水平明显上升, 乳酸水平明显下降〔ATP(mmol/L):0.10±0.01比0.08±0.01, 乳酸(mmol/L):56.03±1.07比72.45±4.32, 均P<0.05〕。与NC组相比, LPS组心肌组织HK2 mRNA表达明显上升, GLUT4、5-HTT mRNA表达明显下降。与LPS组相比, EA组心肌组织HK2 mRNA表达明显下降, GLUT4、5-HTT mRNA表达明显上升〔HK2 mRNA(相对表达量):0.73±0.19比1.82±0.57, GLUT4 mRNA(相对表达量):1.00±0.33比0.47±0.18, 5-HTT mRNA(相对表达量):1.18±0.31比0.38±0.15, 均P<0.05〕。与NC组相比, LPS组和EA+FLU组GLUT4荧光强度明显减弱。与LPS组相比, EA组GLUT4荧光强度明显增强。结论电针足三里穴预处理可减少脓毒症小鼠心肌组织中5-HT含量, 其调控机制可能与调节5-HTT和GLUT4有关。

关键词：脓毒症电针足三里心肌损伤肌酸激酶同工酶小鼠糖酵解

基于两样本孟德尔随机化探讨BMI增高与慢性皮肤溃疡的关系

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浙江医学 2024年第11期46卷 1173-1176,I0007页

作者：邢基祥齐璐瑶孙旭张朝晖天津中医药大学研究生院 301617 上海中医药大学附属第七人民医院重症医学科天津中医药大学第二附属医院中医外科

目的基于两样本孟德尔随机化(TSMR)探讨BMI增高与慢性皮肤溃疡(CSU)的关系。方法通过全基因组关联研究数据库筛选出与BMI强相关的工具变量,在FinnGen数据库筛选CSU数据。采用TSMR分析BMI增高与CSU的关系;采用MR-Egger与逆方差加权法(IVW... 详细信息

目的基于两样本孟德尔随机化(TSMR)探讨BMI增高与慢性皮肤溃疡(CSU)的关系。方法通过全基因组关联研究数据库筛选出与BMI强相关的工具变量,在FinnGen数据库筛选CSU数据。采用TSMR分析BMI增高与CSU的关系;采用MR-Egger与逆方差加权法(IVW)检验数据异质性,MR-Egger检验数据水平多效性。结果共有334个单核苷酸多态性进行TSMR分析:其中IVW、Weighted median显示BMI增高会增加CSU的发生风险(OR=1.638、1.860,均P0.05)。所有数据均不存在异质性和水平多效性(均P>0.05),提示数据稳健性强且可靠。结论基于TSMR分析提示BMI增高会增加CSU的发生风险。

关键词：孟德尔随机化慢性皮肤溃疡体重指数因果关系

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纳米材料用于诊治胰腺炎的研究进展

医学新知 2024年第5期34卷 564-571页

作者：欧阳冰清李芸峰齐璐瑶许开亮上海中医药大学附属第七人民医院重症医学科上海201203

酗酒、暴饮暴食等不良生活习惯使得胰腺炎的患病率日益上升,带来了严重的疾病负担。目前,纳米技术与医学研究联系日益紧密,基于纳米技术提出了许多用于胰腺炎诊断和治疗的新方法。本文从有机、无机、仿生细胞膜纳米层面对其在诊断和治... 详细信息

酗酒、暴饮暴食等不良生活习惯使得胰腺炎的患病率日益上升,带来了严重的疾病负担。目前,纳米技术与医学研究联系日益紧密,基于纳米技术提出了许多用于胰腺炎诊断和治疗的新方法。本文从有机、无机、仿生细胞膜纳米层面对其在诊断和治疗急慢性胰腺炎方面的作用进行归纳总结,并为促进相关产品向临床应用的转化提供理论支持。

关键词：胰腺炎纳米材料诊疗技术

基于网络药理学探讨参蛭通心胶囊核心药对人参-水蛭治疗扩张型心肌病的作用机制

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西部中医药 2024年第3期37卷 44-51页

作者：齐璐瑶邢基祥范吉林侯信铮陈昭张世亮山东中医药大学山东济南250014 山东中医药大学附属医院山东济南250014

目的:基于网络药理学方法探究参蛭通心胶囊核心药对人参-水蛭治疗扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and an... 详细信息

目的:基于网络药理学方法探究参蛭通心胶囊核心药对人参-水蛭治疗扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、BATMAN-TCM数据库获取人参-水蛭药对的活性成分及潜在靶点并导入UniProt数据库对所得基因进行标准化处理;运用人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)获取DCM已知靶点;通过绘制韦恩图得到药物与疾病的交集靶点,将药物活性成分及药物-疾病共同靶点等数据导入Cytoscape 3.7.2软件,构建药物-成分-疾病-靶点网络;运用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI)并筛选出核心靶点;将核心靶基因导入基因功能注释数据库(the database for annotation visualization and integrated discovery,DAVID)平台对所得交集靶点进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,同时利用OmicShare进行数据的可视化分析。结果:经筛选共获得人参-水蛭药对有效成分35个,药物-疾病交集靶点184个,涉及的核心靶点主要有胰岛素、白蛋白、肿瘤坏死因子、内皮一氧化氮合成酶、过氧化物酶体增殖物激活受体、白细胞介素1β等。人参-水蛭的有效成分通过对细胞膜、细胞外间隙、电压门控钙通道复合体等部位的作用、一氧化氮生物合成过程的正调控、细胞间信号传递、对凋亡过程的负调控等过程和CAMP信号通路等在内的多个信号通路协同作用治疗DCM。结论:参蛭通心胶囊的核心药对人参-水蛭可以通过参与调控多成分、多靶点、多通路治疗DCM。

关键词：扩张型心肌病网络药理学参蛭通心胶囊人参-水蛭作用机制

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男性包被性乳头状癌1例

中国现代普通外科进展 2024年第1期27卷 79-81页

作者：邢基祥齐璐瑶杨毅刘晓菲孙小慧袁月松时光喜山东中医药大学山东济南250014 上海中医药大学上海200137 山东中医药大学附属医院乳腺甲状腺外科山东济南250014

乳腺包被性乳头状癌(encapsulated papillary carcinoma,EPC)是指局限于囊腔内,组织学呈乳头状瘤样结构的恶性上皮性肿瘤,发病率低,仅占乳腺恶性肿瘤的0.5%~2%,男性乳腺包被性乳头状癌发病率则更低。本研究报道1例男性EPC患者,术中未能... 详细信息

乳腺包被性乳头状癌(encapsulated papillary carcinoma,EPC)是指局限于囊腔内,组织学呈乳头状瘤样结构的恶性上皮性肿瘤,发病率低,仅占乳腺恶性肿瘤的0.5%~2%,男性乳腺包被性乳头状癌发病率则更低。本研究报道1例男性EPC患者,术中未能确定病变性质,待常规病理后行二次手术的诊疗经过,探讨EPC临床的发病特征、诊断及治疗,以提高临床工作者对本病的认识及重视程度。

关键词：包被性乳头状癌男性乳腺肿瘤

女性董事对银行风险的影响研究 ——基于中国69家银行的实证分析

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女性董事对银行风险的影响研究 ——基于中国69家银行的实证分析

作者：齐璐瑶暨南大学

学位级别：硕士

银行业在我国金融系统中的地位举足轻重,在一定程度上影响着我国经济的发展水平。如今银行业对外开放步伐加快,银行间竞争加剧,防控银行风险任重道远。董事会成员作为银行内部治理、风险管理的关键人物,其决策行为与银行风险管控息息相... 详细信息

银行业在我国金融系统中的地位举足轻重,在一定程度上影响着我国经济的发展水平。如今银行业对外开放步伐加快,银行间竞争加剧,防控银行风险任重道远。董事会成员作为银行内部治理、风险管理的关键人物,其决策行为与银行风险管控息息相关。近年来银行业的女性董事比重不断提高,那么女性相较于男性在银行风险管控中扮演着什么样不同的角色呢?本文将从实证角度分析女性董事与银行风险的关系,对合理构建银行管理层、提高银行的风险控制水平有重要的借鉴意义。本文以中国69家商业银行2013-2018年的数据为研究样本,采用固定效应模型进行实证分析,并采取替换解释变量的方法进行稳健性检验。结果表明:第一,提高女性董事比例有利于降低银行风险;第二,女性非独立董事能抑制银行风险,而女性独立董事与银行风险无显著性关系;第三,高学历的女性董事能加强抑制银行风险,而年龄在女性董事对银行风险影响中不发挥显著作用;第四,女性董事通过提高银行传统业务比例和降低银行投资业务比例的业务渠道影响了银行风险。基于以上实证结果,提出以下建议:对于银行管理层,第一,应在一定程度上提高董事会女性董事比例,给予女性人才更多的更为平等的发展机会;第二,应健全独立董事的管理机制,规范独立董事的职能与效用;第三,重视培养高学历的女性董事,提高女性董事的管理质量。对于政府部门,在推进银行业改革的过程中,应健全董事会治理机制,制定明确的监管规则,引导董事会在控制银行风险方面发挥更大的作用。

关键词：女性董事独立董事银行风险

参蛭通心胶囊治疗扩张型心肌病气虚血瘀证的临床及网络药理学研究

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参蛭通心胶囊治疗扩张型心肌病气虚血瘀证的临床及网络药理学研究

作者：齐璐瑶山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察参蛭通心胶囊治疗扩张型心肌病气虚血瘀证患者的临床疗效与安全性评价,研究其网络药理学作用机制,为扩张型心肌病气虚血瘀证的治疗和延缓进程提供临床依据及理论支持。方法:1.临床研究:共收集符合纳入标准的患者60例,将其随机... 详细信息

目的:观察参蛭通心胶囊治疗扩张型心肌病气虚血瘀证患者的临床疗效与安全性评价,研究其网络药理学作用机制,为扩张型心肌病气虚血瘀证的治疗和延缓进程提供临床依据及理论支持。方法:1.临床研究:共收集符合纳入标准的患者60例,将其随机分为中药干预组和对照组,每组各30人。对照组予西医基础治疗,中药干预组予参蛭通心胶囊+西医基础治疗,观察周期为4周。比较两组患者治疗前后中医症候积分、心功能分级、6分钟步行距离、血（NT-pro BNP、CRP、Scr、BUA）水平、超声心动图指标（包括FS、LVEF、LVEDd）、堪萨斯城心肌病患者生活质量（KCCQ-12）评分的改变情况,评价其临床疗效及安全性。2.网络药理学研究:通过TCMSP、BATMAN-TCM、Gene Cards、Uniprot等数据库以及Venny平台等筛选参蛭通心胶囊治疗扩张型心肌病的活性成分及潜在靶点。运用Cytoscape3.7.2软件及STRING数据库,构建“参蛭通心胶囊-成分-靶点-扩张型心肌病”可视化网络图与蛋白互作网络图,并筛选出核心靶点。利用DAVID数据库对所得交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,并运用Omic Share云平台对分析结果进行可视化处理。利用Bio GPS、Gnencards、Dis Ge NET数据库进行核心靶点组织分布、亚细胞分布、蛋白归属信息的获取。利用Pub Chem、Chem3D、PDB、Py Mol、Auto Dock Tools等网址和软件,对核心靶点及主要的化合物成分进行分子对接。结果:1.临床研究:两组治疗前一般资料均衡可比（P＞0.05）。从治疗后效果来看,中药干预组治疗后较治疗前各指标均有明显改善（P＜0.05）;中药干预组中医症候积分、中医症候积分疗效、心功能分级疗效、超声心动图指标（包括LVEF、LVEDd）、血（NT-pro BNP、CRP、Scr、BUA）水平、6分钟步行距离、KCCQ-12评分等指标与对照组比较,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;虽然FS在治疗后的比较中发现与对照组差别不大（P＞0.05）,但两组治疗前后差值显示中药干预组仍有优势（P＜0.05）。2.网络药理学研究:共筛选获得参蛭通心胶囊136个潜在有效成分,得到交集靶点294个,其中豆甾醇、西红花酸、β-谷甾醇、槲皮素等成分Degree值较高,筛选出的前6位的核心靶点分别为INS、AKT1、ALB、IL6、VEGFA、TNF。共富集得到交集靶点所在的GO生物功能514条,KEGG通路123条。由GO功能和KEGG通路与组织、亚细胞、蛋白分布图表可得,参蛭通心胶囊可能在细胞外间隙、质膜、内质网、细胞核、高尔基体、膜筏等细胞位置,通过药物的反应、对乙醇的反应、老化、对缺氧的反应、药物结合、黄素腺嘌呤二核苷酸结合、酶结合等生物学过程,借助c AMP信号通路、钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、非酒精性脂肪肝（NAFLD）等信号通路,发挥治疗扩张型心肌病的作用。且分子对接结果显示参蛭通心胶囊的主要成分与核心交集靶点对接良好。结论:1.参蛭通心胶囊可以有效改善扩张型心肌病患者的临床症状、实验室指标与生活质量,安全性高,值得临床推广。2.网络药理学和分子对接研究揭示了参蛭通心胶囊可能是通过豆甾醇、西红花酸、β-谷甾醇、槲皮素在内的多成分,以INS、AKT1、ALB、IL6、VEGFA、TNF为代表的多靶点,涉及c AMP信号通路、钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、非酒精性脂肪肝（NAFLD）等多个信号通路,经过多种组织、亚细胞、蛋白的直接或间接作用,调节人体免疫,修复血管内皮细胞,对抗氧化应激,抑制心肌细胞的自噬、凋亡与心肌细胞外基质的重塑等发挥治疗扩张型心肌病的作用。

关键词：参蛭通心胶囊扩张型心肌病气虚血瘀证临床研究网络药理学