基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨如金解毒散对巨噬细胞焦亡模型的影响
作者机构:上海中医药大学附属普陀医院全科医学科 上海中医药大学附属第七人民医院
出 版 物:《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)
年 卷 期:2024年
核心收录:
学科分类:1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金:上海市卫生健康委员会卫生行业临床研究专项(20214Y0281) 上海市卫健委中医药三年行动计划—华东片区及市级中医专科专病联盟建设(ZY(2021-2023)0302) 浦东新区中医高端人才引入工程(PDZY-2022-0701) 浦东新区中医高级师承培养计划(PDZY-2022-0601)
主 题:如金解毒散 急性肺损伤 巨噬细胞 细胞焦亡 炎症小体
摘 要:目的:观察如金解毒散对RAW264.7细胞焦亡模型的治疗作用,并探讨其抗炎机制。方法:RAW264.7细胞经LPS刺激4 h,ATP刺激30min构建细胞焦亡模型。分组包括对照组(Control)、模型组(LPS+ATP)、如金解毒散低剂量组(RJJDS50μg/ml)、如金解毒散中剂量组(RJJDS100μg/ml)、如金解毒散高剂量组(RJJDS200μg/ml)、地塞米松组(DEX组)。随后收集各组细胞及上清液,检测上清液中LDH释放量,正倒置荧光显微镜观察细胞ROS水平,ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,蛋白免疫印迹法(Westernblotting)检测细胞中NLRP3、Caspase-1p45、Caspase-1p20、GSDMD-FL和GSDMD-N的蛋白水平,正倒置荧光显微镜观察PI阳性细胞数量。结果:与对照组相比,模型组细胞上清液中LDH、TNF-α、和IL-1β的含量显著升高(P 0.05);模型组细胞ROS水平显著升高(P0.05);NLRP3、Caspase-1p20和GSDMD-N 的蛋白水平上调(P 0.05);PI 阳性细胞数增多(P 0.05)。与模型组相比,如金解毒散各治疗组和阳性药DEX组显著降低了RAW264.7细胞焦亡模型上清液中LDH、TNF-α和IL-1β的含量(P 0.05);下调了NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N蛋白的表达(P 0.05);PI阳性细胞数显著减少(P 0.05)。结论:如金解毒散抑制巨噬细胞焦亡,发挥抗炎作用涉及NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号。