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作者：齐兰婷河北中医学院

学位级别：硕士

酸枣是典型的阳生植物,具有较强的耐旱、耐盐碱的抗逆特性。酸枣在应对干旱及盐碱所引起的渗透胁迫时,会在根系积累脱落酸(ABA),随后通过维管组织的输导,ABA进入叶片,并激活ABA信号传导通路,以抵御不良环境对植物带来的影响。目前酸枣中... 详细信息

酸枣是典型的阳生植物,具有较强的耐旱、耐盐碱的抗逆特性。酸枣在应对干旱及盐碱所引起的渗透胁迫时,会在根系积累脱落酸(ABA),随后通过维管组织的输导,ABA进入叶片,并激活ABA信号传导通路,以抵御不良环境对植物带来的影响。目前酸枣中ABA受体相关基因抵御渗透胁迫的分子机制以及ABA积累是否和有效成分合成存在量效关系尚不明确,因此利用生物信息学分析和功能验证等手段分析酸枣假定ABA受体ZjPYR1、ZjPYL8的基因功能,并利用q RT-PCR验证ZjPYR1、ZjPYL8基因是否参与调控酸枣幼苗渗透胁迫后有效成分的合成与积累过程。本课题挖掘了渗透胁迫下假定ABA受体ZjPYR1、ZjPYL8对有效成分合成的量效关系,可以为后期科学栽培酸枣提供有效的数据支撑。目的:通过比对枣、大豆、番茄中的同源基因序列,克隆酸枣中的PYR1、PYL8基因。利用转基因技术培育ZjPYR1、ZjPYL8拟南芥异源过表达株系,筛选T3代阳性苗,验证ZjPYR1、ZjPYL8基因功能,确定ZjPYR1、ZjPYL8属于酸枣PYR/PYL/RCAR家族成员,并确定其表达可以影响植物对于干旱和盐碱的耐受性;利用高效液相色谱法(HPLC-ELSD)测定外源ABA、Na Cl处理前后酸枣幼苗中有效成分的含量变化;利用q RT-PCR验证ZjPYR1、ZjPYL8和有效成分合成基因相对表达量变化是否与外源ABA、Na Cl胁迫有关。方法:1.样品的采收:选取酸枣无菌苗提取RNA;于9月采摘成熟期酸枣仁用于酸枣幼苗培育。2.构建拟南芥异源过表达株系验证酸枣ZjPYR1、ZjPYL8基因功能:提取酸枣无菌苗RNA,反转录为c DNA,克隆ZjPYR1、ZjPYL8基因。将克隆的酸枣ZjPYR1、ZjPYL8基因构建至35S启动的携带GFP标签的p CAMBIA2300载体上,并利用浸花法转基因至拟南芥Col-0中。观察ABA、Na Cl处理前后,拟南芥异源过表达株系的萌发率、根长、气孔开度及亚细胞定位等生理表型变化,以明确受ABA激活的ZjPYR1和ZjPYL8的功能。***-PCR验证基因表达量变化:选取ZjPYR1、ZjPYL8和参与酸枣仁有效成分合成基因,利用q RT-PCR测定ABA、Na Cl处理前后酸枣仁幼苗中基因表达量的变化。4.酸枣幼苗有效成分含量测定:采摘成熟酸枣破壳取仁后,用赤霉素促进酸枣仁发芽,将未处理幼芽标记为S1,ABA和Na Cl处理幼芽分别标记为S2、S3。测定10天龄酸枣幼苗经ABA、Na Cl处理前后,斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的含量变化。结果:1.酸枣ZjPYR1、ZjPYL8基因功能验证:ZjPYR1、ZjPYL8属于酸枣的PYR/PYL/RCAR家族成员;经ABA、Na Cl处理后,拟南芥ZjPYR1、ZjPYL8异源过表达株系表现出根长缩短、气孔关闭、萌发率降低的生理表型,经ABA处理后,ZjPYR1、ZjPYL8在拟南芥异源过表达株系根部积累。***-PCR验证ZjPYR1、ZjPYL8与有效成分生物合成表达基因量效关系:利用q RT-PCR分析ZjPYR1、ZjPYL8与有效成分生物合成基因的表达量。结果表明,施加ABA和Na Cl后,酸枣幼苗中ZjPYR1、ZjPYL8基因表达量升高,斯皮诺素合成途径基因PAT、ENO、PGK,及酸枣仁皂苷A合成途径基因FDPS1、HMGR1e、HMGR1-like表达量也一同升高。结果表明ZjPYR1、ZjPYL8可能正调控参与斯皮诺素、酸枣仁皂苷A的生物合成。3.酸枣幼苗有效成分含量测定:利用HPLC-ELSD测定ABA、Na Cl处理前后10天龄酸枣幼芽中有效成分的含量。S1～S3中斯皮诺素含量分别为0.0681%、0.0794%、0.1116%,酸枣仁皂苷A含量分别为0.0799%、0.0968%、0.1295%,酸枣仁皂苷B含量分别为0.2101%、0.2196%、0.2464%。结果表明经ABA、Na Cl处理后的S2、S3样品,酸枣幼芽中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的含量均高于S1。结论:本课题利用转基因培育ZjPYR1、ZjPYL8拟南芥异源过表达株系,通过分析T3代阳性苗萌发率、根长变化、亚细胞定位、气孔开度等生理表型,确定ABA可以有效地增加ZjPYR1、ZjPYL8的稳态。通过HPLC-ELSD法测定ABA、Na Cl处理前后酸枣幼苗斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B含量,证明渗透胁迫可增加酸枣幼苗有效成分含量。利用q RT-PCR法验证ZjPYR1、ZjPYL8与有效成分生物合成途径基因存在量效关系。本课题通过ZjPYR1、ZjPYL8基因功能验证和酸枣幼苗渗透胁迫条件下有效成分测定,从分子水平和化学分析水平探索酸枣中ABA受体调控

关键词：酸枣渗透胁迫有效成分 ZjPYR1 ZjPYL8 ABA假定受体

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基于显微鉴别和可视化探针技术的砂仁鉴别研究

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中国现代应用药学 2021年第3期38卷 294-298页

作者：郭利霄齐兰婷申亚君刘钊郑玉光侯芳洁河北中医学院河北省中药炮制技术创新中心石家庄050000

目的应用显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术鉴别阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁。方法采用徒手切片法对砂仁及其混淆品的种子进行制片并观察其显微生物。然后提取阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁的总基因组DNA,PCR扩增其ITS... 详细信息

目的应用显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术鉴别阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁。方法采用徒手切片法对砂仁及其混淆品的种子进行制片并观察其显微生物。然后提取阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁的总基因组DNA,PCR扩增其ITS2序列,回收PCR产物并连接T载体,筛选阳性质粒并测序,根据测序所得ITS2序列设计阳春砂的专属荧光探针,并取探针1 ng与砂仁及其混淆品的ITS2 PCR扩增产物进行液相杂交。反应条件:95℃变性5 min,70℃退火30 s,在489 nm荧光下进行激发检测。结果阳春砂与其混淆品的显微结构区别主要在于色素层的层数和外胚乳细胞的形状。所设计的专属探针仅与阳春砂ITS2 PCR产物特异性结合,而不与其混淆品结合。亦可以通过荧光的强弱来定量鉴别中成药中砂仁的掺伪现象。结论通过显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术能够很好地鉴别砂仁的真伪,且不要求中药的具体形式,方法简便快捷、成本低、技术门槛低,开拓了更加便捷、准确的砂仁药材的鉴别方法。

关键词：阳春砂显微鉴别 ITS2 可视化杂交

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市售乌梢蛇及其常见混淆品的鳞片微形态鉴别研究

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中国现代应用药学 2020年第14期37卷 1698-1703页

作者：郭利霄齐兰婷苏畅郑倩赵建成侯芳洁郑玉光河北中医学院药学院河北省中药炮制技术创新中心石家庄050200 石家庄市食品药品检验中心石家庄050023 石家庄市中医院石家庄050051 河北师范大学生命科学学院石家庄050011 河北化工医药职业技术学院石家庄050026

目的通过对乌梢蛇的头部及体部鳞片的微形态鉴别,将乌梢蛇与其常见的混淆品进行区分,为乌梢蛇药材和饮片的鉴别提供依据。方法用VHX-6000数码成像显微镜对乌梢蛇及其混淆品的头部鳞片进行3D观察,采用景深合成技术与大图拼接技术相结合,... 详细信息

目的通过对乌梢蛇的头部及体部鳞片的微形态鉴别,将乌梢蛇与其常见的混淆品进行区分,为乌梢蛇药材和饮片的鉴别提供依据。方法用VHX-6000数码成像显微镜对乌梢蛇及其混淆品的头部鳞片进行3D观察,采用景深合成技术与大图拼接技术相结合,拍摄高清特征图。用光学显微镜对体部鳞片的端窝、薄膜囊、乳头突以及纵直纹理进行观察,并通过成像系统拍摄其特征图。最后通过DNA条形码技术对以上结果进行验证,保证微形态鉴别的准确性和可靠性。结果市场上乌梢蛇品种混乱,主要有以下几种伪品:滑鼠蛇、灰鼠蛇、Cerberus rynchops(Colubridae)、王锦蛇、黑眉锦蛇等,与之前报道的伪品有所不同。结论通过微形态鉴别能够很好区分乌梢蛇及其混淆品药材和饮片,并且鉴别特征稳定不易发生变化。

关键词：乌梢蛇 3D景深合成技术微形态鉴别 DNA鉴别

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独立学院英语专业学生词汇学习策略调查与反馈研究

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湖北函授大学学报 2016年第18期29卷 151-153页

作者：许敬齐兰婷辽宁师范大学海华学院外语系辽宁沈阳141013

词汇是语言的基本组成部分,词汇学习是语言学习的基础环节。本文主要以辽宁师范大学海华学院英语专业2013级学生为研究对象,旨在探讨独立学院英语专业学生词汇学习策略。研究者通过问卷调查和抽样访谈两种形式,了解学生词汇学习情况,并... 详细信息

词汇是语言的基本组成部分,词汇学习是语言学习的基础环节。本文主要以辽宁师范大学海华学院英语专业2013级学生为研究对象,旨在探讨独立学院英语专业学生词汇学习策略。研究者通过问卷调查和抽样访谈两种形式,了解学生词汇学习情况,并进行汇总分析,研究得出5种适合学习者的词汇学习策略。

关键词：独立学院英语专业词汇学习策略调查反馈

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狗脊的品种和产地变迁的本草考证

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中国药房 2019年第4期30卷 553-555页

作者：温子帅李新蕊齐兰婷李嘉诚马东来郑玉光河北中医学院药学院石家庄050090

目的:通过对狗脊品种和产地变迁进行本草考证,为其资源的开发与应用提供参考。方法:查阅历代本草著作,从品种和产地变迁两个方面对狗脊进行考证。结果与结论:历代本草中记载的狗脊有3种,即百合科植物长托菝葜(Smilax ferox Wall. exKun... 详细信息

目的:通过对狗脊品种和产地变迁进行本草考证,为其资源的开发与应用提供参考。方法:查阅历代本草著作,从品种和产地变迁两个方面对狗脊进行考证。结果与结论:历代本草中记载的狗脊有3种,即百合科植物长托菝葜(Smilax ferox Wall. exKunth)、乌毛蕨科植物狗脊蕨[Woodwardia japonica(L. f.)Sm.]、蚌壳蕨科植物金毛狗脊[Cibotium barometz(L.)J. Sm.]。南朝梁陶弘景《名医别录》最早记载的狗脊产地为河北(常山)太行山脉的山谷中。自汉代至今,狗脊的品种发生变化,其产地也由河北逐渐向四川、浙江等地变迁,现主要分布于我国河北、山东、四川、浙江等地。从汉代至今,狗脊的品种发生了变化;综合古籍文献的考证,清代吴其濬、张志聪等记载的狗脊与2015年版《中国药典》(一部)收载的狗脊品种一致,均为蚌壳蕨科植物金毛狗脊[***(L.)J. Sm.]的干燥根茎。

关键词：狗脊品种产地变迁本草考证

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微波刀治疗前庭大腺囊肿与脓肿130例

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华北煤炭医学院学报 2004年第4期6卷 491-492页

作者：白雪王秀珍齐兰婷内蒙古自治区巴彦淖尔盟医院临河015000

外阴前庭大腺囊肿是妇科常见病,传统方法治疗疗效不理想,2000～2003年,我院采用微波刀对前庭大腺囊肿行造口术及切开引流术治疗130例,取得理想的疗效,报告如下.

关键词：前庭大腺囊肿脓肿微波刀/治疗

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基于ITS2的可视化荧光探针对当归及其混淆品的鉴别分析

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分子植物育种 2023年

作者：王硕齐兰婷王佩燕宋军娜朱若嘉孙会改郑玉光严玉平刘钊河北省中药炮制技术创新中心河北省中药资源利用与质量评价国际联合研究中心河北化工医药职业技术学院

在分子层面，对当归和独活(混淆品)进行鉴别研究。方法设计当归及独活的ITS2序列专一可视化荧光探针，使之与当归ITS2PCR产物中特异性片段结合，提取不同产地当归以及独活并对探针的可靠性进行验证。结果杂交反应中，在111 ng当归ITS2 ... 详细信息

在分子层面，对当归和独活(混淆品)进行鉴别研究。方法设计当归及独活的ITS2序列专一可视化荧光探针，使之与当归ITS2PCR产物中特异性片段结合，提取不同产地当归以及独活并对探针的可靠性进行验证。结果杂交反应中，在111 ng当归ITS2 PCR产物中加入0.9 ng探针，以变性95 ℃ 4 min，退火61.5 ℃ 1 min为液相杂交反应条件，杂交产物在492 nm波长激发光下检测到探针与当归ITS2 PCR产物特异性结合，而不与独活ITS2 PCR产物进行结合；以ITS2-R以及专一性荧光探针为引物，对不同产地的当归以及独活ITS2 PCR产物进行验证，探针只与当归特异性结合。本研究设计的位点特异性荧光探针在液相分子杂交反应中可与当归的ITS2序列特异性结合，能够有效鉴别当归及混伪品独活，具有准确、快速、经济的优点。

关键词：当归独活 ITS2 探针可视化杂交

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射干性味的本草考证

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中国中医基础医学杂志 2020年第8期26卷 1163-1166页

作者：温子帅范忠星齐兰婷孙宝惠郑玉光宋军娜河北中医学院药学院石家庄050200 河北中医学院基础医学院石家庄050200 河北省食品药品检验研究院石家庄050011

探究射干性味的变化,为进一步开发和利用中药射干提供理论依据,使其更好地应用于临床实践。本文采用文献考证的方法并结合其功效主治对射干进行性味考证。经考证研究发现,射干的味多记载为“苦”,少数文献记载为“辛”;历代文献对射干... 详细信息

探究射干性味的变化,为进一步开发和利用中药射干提供理论依据,使其更好地应用于临床实践。本文采用文献考证的方法并结合其功效主治对射干进行性味考证。经考证研究发现,射干的味多记载为“苦”,少数文献记载为“辛”;历代文献对射干性的记载主要围绕在“微温”与“寒”(微寒),明代及以前其性以“微温”为主,明代以后其性以“寒”(微寒)为主。纵观射干性味的演变过程,推测射干的性味应为“辛,苦,微温”。性味考证可为中药射干的性味学、药效学研究及临床精准应用等提供重要价值。

关键词：射干性味本草考证

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基于因子分析与聚类分析的757例儿童肝豆状核变性中医证候研究

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北京中医药大学学报 2025年

作者：花代平汪瀚宣巧玉孙兰婷忻凌殷馨杨文明安徽中医药大学第一附属医院新安医学教育部重点实验室

目的基于因子分析与聚类分析，探究儿童肝豆状核变性（又称“威尔逊病”，WD）的中医证候分布规律。方法回顾性收集2018年11月—2023年11月就诊于安徽中医药大学第一附属医院757例儿童WD的一般资料（性别、入院年龄、发病年龄、临床... 详细信息

目的基于因子分析与聚类分析，探究儿童肝豆状核变性（又称“威尔逊病”，WD）的中医证候分布规律。方法回顾性收集2018年11月—2023年11月就诊于安徽中医药大学第一附属医院757例儿童WD的一般资料（性别、入院年龄、发病年龄、临床分型、西医临床症状、家族史）和中医四诊信息（症状、体征），运用因子分析与聚类分析进行儿童WD中医证候研究。结果 757例儿童WD中，男483例、女274例；中位入院年龄12.58岁，中位发病年龄8.33岁，中位病程24.37个月；临床分型中肝型506例，脑型133例，混合型99例，其他型19例；36.46%患儿无临床症状（转氨酶升高或铜生化异常）；有明确家族史177例，有疑似家族史10例。中医四诊信息共43个，频率前10位的依次为神疲乏力、小便黄赤、动作迟钝、食欲不振、面色晦暗、语言謇涩、口角流涎、形体消瘦、手足颤动、脘腹胀满。儿童WD病位证素以肝为主，涉及脾、肾；病性证素以湿热、阴虚多见。依据因子分析和聚类分析得出5种中医证候，依次为湿热内蕴证（265例、35.01%），肝肾阴虚证（202例、26.68%），肝郁脾虚证（185例、24.44%），气血两虚证（79例、10.44%），脾肾阳虚证（26例、3.43%）。结论儿童WD中医证候以湿热内蕴证、肝肾阴虚证、肝郁脾虚证为主，病位以肝为主，病性本虚标实、虚实夹杂。这提示治疗时宜从肝论治，兼顾脾、肾。

关键词：肝豆状核变性儿童中医证候因子分析聚类分析

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肝豆灵通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路治疗Wilson病肝纤维化

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中国实验方剂学杂志 2025年第1期 131-138页

作者：殷馨汪瀚花代平孙兰婷徐芸芸杨文明安徽中医药大学第一临床医学院安徽中医药大学第一附属医院

目的：研究肝豆灵（GDL）治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法：60只雄性SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组（0.24、0.48、0.96 g·kg-1）及青霉胺组（90 mg·kg-1），每组10只。除正常组以外，其余... 详细信息

目的：研究肝豆灵（GDL）治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法：60只雄性SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组（0.24、0.48、0.96 g·kg-1）及青霉胺组（90 mg·kg-1），每组10只。除正常组以外，其余各组以300 mg·kg-1五水合硫酸铜灌胃造模，构建铜负荷Wilson病大鼠模型。采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察肝脏病理形态改变；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原肽（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）水平；透射电镜观察肝组织超微结构；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织肝脏和血清外泌体长链非编码核糖核酸H19(LncRNA H19)、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织中PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其磷酸化蛋白和自噬效应蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)蛋白表达水平；免疫荧光观察Beclin1、LC3-Ⅱ信号强度。结果：与正常组比较，模型组染色结果显示肝细胞出现炎性细胞浸润，细胞核边界不清伴有裂解、坏死，汇管区周围可见胶原纤维沉积；HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量升高（P<0.01）；电镜下观察到自噬小体的数量增多，出现大多数包浆被降解后呈现单层膜结构的自噬溶酶体；Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达升高（P<0.05,P<0.01）;Beclin1、LC3-II荧光信号明显增强；PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）;LncRNAH19mRNA表达水平升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTORmRNA表达水平降低（P<0.01）。经GDL治疗后，肝组织纤维化程度明显改善；HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ水平降低；自噬小体数量明显减少；Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）;Beclin1、LC3-Ⅱ荧光信号随药物剂量呈不同程度的减弱；PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.01）;LncRNA H19 mRNA表达水平降低（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平升高（P<0.05,P<0.01）。结论：GDL可能通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路减轻肝纤维化程度，减少肝损伤。

关键词： Wilson病肝豆灵长链非编码核糖核酸H19(LncRNA H19) 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路细胞自噬肝纤维化

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