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靶向NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3影响的体外研究

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靶向NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3影响的体外研究

作者：黎雁英桂林医学院

学位级别：硕士

目的: 通过观察NOB1反义寡核苷酸（NOB1-ASODN）对人卵巢癌细胞株SKOV3内NOB1基因及其mRNA表达的影响，和其对SKOV3细胞的生长繁殖、细胞的凋亡及侵袭力的作用，初步探讨NOB1基因在卵巢癌发生发展中的可能作用。为进一步研究其在卵巢癌... 详细信息

目的: 通过观察NOB1反义寡核苷酸（NOB1-ASODN）对人卵巢癌细胞株SKOV3内NOB1基因及其mRNA表达的影响，和其对SKOV3细胞的生长繁殖、细胞的凋亡及侵袭力的作用，初步探讨NOB1基因在卵巢癌发生发展中的可能作用。为进一步研究其在卵巢癌及其他肿瘤在其发生、发展的过程中分子调节机制;同时为寻找肿瘤靶基因治疗的研究提供新的线索和参考依据。方法： 1、设计合成针对NOB1mRNA的特定NOB1-ASODNs序列以及作为对照的无义寡核苷酸片段NOB1-NSODNs，应用转染载体X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent将NOB1-ASODNs及NOB1-NSODNs转染至人卵巢癌SKOV3细胞中。实验分空白对照组、转染试剂对照组、无义链(NOB1-NSODN)对照组及(NOB1-ASODN)处理组，在倒置荧光相差显微镜下观察转染后24h不同浓度（0.75μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml）的NOB1-ASODN后各组细胞形态的变化，同时连续进行细胞计数7天,取其均值绘制细胞生长曲线图,选择对细胞影响最大的浓度进行后期实验。 2、采用RT-PCR方法从核酸水平检测转染后各组细胞NOB1mRNA的表达情况。 3、MTT法检测在3.0μg/ml浓度的反义核苷酸转染后不同作用时间段（24h、48h、72h）下对各组SKOV3细胞的体外增殖抑制效应。 4、采用Hoechst33258染色法在倒置荧光显微镜下观察转染后48h各组SKOV3细胞凋亡形态。 5、流式细胞术检测和分析转染24h不同处理组SKOV3细胞的早期凋亡率。 6、利用Transwell小室法检测转染24h后个处理组SKOV3细胞侵袭能力的改变。结果： 1、观察到NOB1-ASODN能成功转染入SKOV3细胞，经过不同浓度组的NOB1-ASODN作用后的细胞,细胞的形态出现明显改变：边缘不整齐、欠光滑、细胞间隙可见较多散在的细胞细胞碎片,同时伴随凋亡小体形成，其中以3.0μg/ml浓度组的作用最明显,三个对照组的细胞形态无明显改变,细胞生长状态良好;同时所绘制的细胞生长曲线图显示，最高浓度组对细胞生长抑制效果最明显，与对照组比较，差异存在统计学意义（P＜0.05），选取3.0μg/ml的转染浓度进行后续实验。 2、RT-PCR结果提示，转染后48h，NOB1-ASODN能有效下调NOB1mRNA的表达水平，且NOB1mRNA的抑制率达59.58%，与其余3个对照组相比，差异存在统计学意义（P＜0.01），NOB1-NSODN对照组、转染试剂对照组以及空白对照组之间的差异不存在统计学意义（P＞0.05）。 3、NOB1反义寡核苷酸对SKOV3细胞具有生长抑制作用，且具有一定的时间依赖性，细胞抑制率在转染后24h、48h、72h分别平均达到：37.02%、56.16%、58.10%;与对照组相比，差异存在统计学意义（P＜0.01），3个对照组之间细胞受抑制情况的差异不存在统计学意义（P＞0.05）。 4、在荧光显微镜下观察，经过NOB1-ASODN作用48h后的SKOV3细胞出现体积变小、呈不规则状态、胞核出现染色质聚集,同时可见核碎解，表现出细胞凋亡的形态。而转染NOB1-NSODN组、转染试剂对照组、空白对照组的细胞其细胞核呈现均质淡染的蓝色荧光，核呈圆形或椭圆形、比较规则饱满。 5、经NOB1-ASODN作用后，SKOV3的细胞凋亡率明显升高，与NOB1-NSODN对照组、转染试剂对照组以及空白对照组之间对比,差异存在统计学意义（P＜0.01），各个对照组之间细胞凋亡率相比较,差异不存在统计学意义（P＞0.05）;6、Transwell小室侵袭实验显示，NOB1-ASODN处理组平均每高倍视野下细胞穿膜数目明显减少，同对照组相比，差异存在统计学意义（P＜0.01），余3个对照组之间细胞穿膜数目的差异不存在统计学意义（P＞0.05）。结论： 1、NOB1-ASODN可成功转染入人卵巢癌细胞株SKOV3中;NOB1-ASODN能有效抑制人卵巢癌细胞株SKOV3内NOB1基因的表达，能下调其靶基因NOB1mRNA的表达水平。 2、NOB1-ASODN能抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的生长增殖，同时可促进细胞的凋亡和减弱其侵袭能力。NOB1可能在人卵巢癌的发生发展以及侵袭转移过程中的起非常重要的作用，在其他肿瘤中可能起到相关的作用，NOB1基因可能成为肿瘤基因治疗中的新靶点。

关键词：反义寡核苷酸链卵巢癌 NOB1基因 SKOV3

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NOB1基因与肿瘤

内科 2012年第4期7卷 394-396页

作者：黎雁英周英琼广西桂林医学院附属医院病理科桂林市541001

人类NOB1基因是近年来新发现的一个基因，它是于2005年被鉴定的一个新分子。研究表明NOB1通过调节基因的转录参与肿瘤的发生和发展。本文就NOB1基因的结构特点和研究进展综述如下。

关键词： NOB1基因肿瘤蛋白酶体卵巢癌

碳纳米管携载多柔比星对人卵巢癌耐药细胞体外抑制研究

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中华肿瘤防治杂志 2016年第14期23卷 924-929页

作者：刘思思黎雁英裴蕾田佳林静周英琼桂林医学院附属医院病理科广西桂林541001 桂林医学院第二附属医院内科广西桂林541001

目的长期应用多柔比星(doxorubicin,ADM)能够增加药物耐受性及毒副作用,单壁碳纳米管(single-walled carbon nanotubes,SWCNTs)作为药物载体可提高载药率。本研究通过制备携载ADM的碳纳米管复合物然后作用于人卵巢癌ADM耐药细胞株,探讨... 详细信息

目的长期应用多柔比星(doxorubicin,ADM)能够增加药物耐受性及毒副作用,单壁碳纳米管(single-walled carbon nanotubes,SWCNTs)作为药物载体可提高载药率。本研究通过制备携载ADM的碳纳米管复合物然后作用于人卵巢癌ADM耐药细胞株,探讨研究碳纳米管复合物对细胞的杀伤作用。方法制备ADM/PEG/SWCNTs复合物,傅里叶变换红外光谱扫描仪表征检测PEG/SWCNTs表面官能团的变化;紫外分光光度计测定载药量;WST-1法检测ADM/PEG/SWCNTs对SKOV3/ADM的增殖抑制作用;流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察ADM/PEG/SWCNTs对细胞凋亡的影响;PCR及蛋白质印迹法检测ADM/PEG/SWCNTs对MDR-1 mRNA及P-gp糖蛋白的表达影响。结果成功制备ADM/PEG/SWCNTs复合药物,其中ADM在PEG/SWCNTs的载药率为(79.5±10.6)%,包封率(32.0±4.2)%。WST-1实验显示,ADM/PEG/SWCNTs及ADM作用细胞平均IC50为(18.0±1.2)和(37.5±1.9)μg/mL。ADM/PEG/SWCNTs对SKOV3/ADM细胞24、48和72h细胞增殖抑制率分别为(43.27±3.60)%、(53.40±8.12)%和(68.00±4.26)%,组间比较,差异有统计学意义,P<0.001。流式细胞术检测ADM/PEG/SWCNTs组及ADM组SKOV3/ADM细胞凋亡率为(14.83±1.86)%和(5.28±0.45)%,F=137.292,P=0.001。Hoechst33258染色ADM/PEG/SWCNTs组细胞呈明显凋亡形态改变。ADM/PEG/SWCNTs组可下调MDR-1mRNA及P-gp蛋白的表达,经灰度扫描分析,组间比较,差异有统计学意义,F=18.634,P=0.003。结论体外制备的ADM/PEG/SWCNTs纳米复合物具有高载药率,可抑制人卵巢癌细胞多柔比星耐药细胞增殖,促进人卵巢癌ADM耐药细胞凋亡,可下调MDR-1mRNA及P-gp蛋白的表达。

关键词：卵巢癌多柔比星耐药单壁碳纳米管

NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞生长、凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2013年第10期48卷 1174-1178页

作者：黎雁英田佳陈石涛陆竞艳金美华莫文法周英琼桂林医学院附属医院病理科桂林541001 哈尔滨医科大学2009级临床医学本科哈尔滨150081

目的研究NOB1反义寡核苷酸(NOB1-ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3生长、凋亡的影响,观察NOB1-ASODN对NOB1基因表达的作用。方法设计合成针对NOB1 mRNA的特定的ASODN和作为对照的无义寡核苷酸链(NSODN),应用转染载体X-tremeGENE siRNA Trans... 详细信息

目的研究NOB1反义寡核苷酸(NOB1-ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3生长、凋亡的影响,观察NOB1-ASODN对NOB1基因表达的作用。方法设计合成针对NOB1 mRNA的特定的ASODN和作为对照的无义寡核苷酸链(NSODN),应用转染载体X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent将ASODN及NSODN转染至人卵巢癌SKOV3细胞。采用RT-PCR法检测转染后各组细胞NOB1 mRNA的表达;应用MTT法检测不同作用时间段SKOV3细胞的生长情况;流式细胞学检测细胞的凋亡情况。结果 NOB1-ASODN能下调SKOV3细胞NOB1基因的表达,沉默效率达59.58%;其能抑制细胞的生长,具有时间依赖性,转染后24、48、72 h细胞抑制率分别为(37.02±0.710)%、(56.16±0.986)%、(58.10±0.010)%;沉默目的基因后细胞的凋亡率增加。结论运用NOB1-ASODN特异、有效地抑制NOB1表达,能抑制SKOV3细胞的增殖,可促进SKOV3细胞的凋亡,从而达到抑制肿瘤生长的目的。

关键词：卵巢癌 NOB1 反义寡核苷酸凋亡

叶酸-壳聚糖-碳纳米管-顺铂复合物对卵巢癌细胞的体外抑瘤效应

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临床与实验病理学杂志 2016年第6期32卷 669-673页

作者：田佳刘思思黎雁英叶元金美华周英琼桂林医学院附属医院病理科桂林541001 桂林医学院附属医院消化内科桂林541001 桂林医学院附属医院妇产科桂林541001

目的探讨叶酸-壳聚糖-碳纳米管-顺铂(cisplatin-carbon nanotube-chitosan-folic acid,DDP-SWCNT-CHI-FA)复合物对人卵巢癌细胞的影响。方法制备DDP-SWCNT-CHI-FA复合物,测定复合物中顺铂的药载浓度;采用MTT法检测药物对卵巢癌细胞的作用;应用Western blot法检测SKOV3/DDP细胞中铜转运蛋白-1(human copper transporter-1,h CTR-1)的表达。结果 SWCNT-CHI-FA和FA-CHI携载顺铂的载药率分别为125.7%和46.08%;顺铂和DDP-SWCNT-CHI-FA对卵巢癌细胞株SKOV3的IC50分别为(8.27±0.39)μg/μl和(5.18±0.83)μg/μl,对其耐药株SKOV3/DDP的IC50分别为(37.43±1.24)μg/μl和(28.23±1.17)μg/μl;SKOV3/DDP细胞中DDP-SWCNT-CHI-FA组的h CTR-1蛋白表达水平较顺铂组低。结论制备的DDP-SWCNT-CHI-FA复合物具有高载药率;可以增强顺铂对卵巢癌顺铂耐药细胞的抑制作用。

关键词：卵巢肿瘤叶酸-壳聚糖-碳纳米管-顺铂复合物铜转运蛋白-1 耐药

ERCC1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞增殖、周期、药物敏感性及侵袭能力的影响

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中国现代医学杂志 2013年第29期23卷 24-29页

作者：周英琼梁梦黎雁英李运千陆竞艳田佳桂林医学院附属医院病理科广西桂林541001 浙江中医药大学附属第三医院病理科浙江杭州310005

目的探讨体外ERCC1反义寡核苷酸(ERCC1-ASODNs)对人卵巢癌细胞耐药株SKOV3/DDP生长周期、增殖及侵袭力改变的影响及其逆转顺铂耐药的机制。方法将设计合成的特异性ERCC1-ASODNs片段以及无义寡核苷酸序列(NSODNs)转染至SKOV3/DDP细胞后... 详细信息

目的探讨体外ERCC1反义寡核苷酸(ERCC1-ASODNs)对人卵巢癌细胞耐药株SKOV3/DDP生长周期、增殖及侵袭力改变的影响及其逆转顺铂耐药的机制。方法将设计合成的特异性ERCC1-ASODNs片段以及无义寡核苷酸序列(NSODNs)转染至SKOV3/DDP细胞后实验分组,采用流式细胞学技术(FACS)检测细胞生长周期,MTT法检测转染前后细胞的生长抑制情况及对顺铂敏感性的差异,应用RT-PCR法检测各组细胞ERCC1 mRNA的表达情况;Transwell小室实验检测转染前后其侵袭力的改变。结果 ERCC1-ASODNs可下调SKOV3/DDP细胞的ERCC1基因的表达;抑制其细胞的生长;促使其细胞周期发生改变,S期细胞增多,G0/G1期细胞减少;转染后SKOV3/DDP细胞的侵袭力减弱,穿过基质膜细胞数目减少。结论运用ERCC1反义寡核苷酸能特异、高效抑制靶基因ERCC1的表达;且减弱卵巢癌耐药细胞的增殖及侵袭能力,增强其对顺铂的敏感性。

关键词：卵巢癌 ERCC1 反义寡核苷酸细胞周期耐药

探讨协同护理干预在老年精神分裂症患者康复中的作用

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心理月刊 2021年第16期16卷 26-27页

作者：陈慧武陈志明黎海雁黎艳芳陈英云浮市(罗定)第三人民医院

目的分析协同护理干预在老年精神分裂症患者康复中的应用效果。方法抽选出本院收治的老年精神分裂症患者作为研究对象,从中抽选出80例患者视为研究对象,按照抽签法分成对照组与观察组,每组40例,分别给予常规护理以及协同护理干预,对比... 详细信息

目的分析协同护理干预在老年精神分裂症患者康复中的应用效果。方法抽选出本院收治的老年精神分裂症患者作为研究对象,从中抽选出80例患者视为研究对象,按照抽签法分成对照组与观察组,每组40例,分别给予常规护理以及协同护理干预,对比两组老年精神分裂症患者护理前后住院精神病患者康复疗效评定量表(IPROS)评分、阴性症状量表(SANS)评分、简明精神病评定量表(BPRS)评分以及日常生活能力量表(ADL)评分。结果护理前,两组患者的IPROS各项指标评分对比均无统计学意义(P>0.05);护理后,观察组患者IPROS评分各项指标评分均低于对照组(P0.05);护理后,观察组患者的SANS、BPRS评分低于对照组,ADL评分高于对照组(P<0.05)。结论对老年精神分裂症患者采取协同护理干预有助于改善患者病情,提升患者的生活质量,对患者预后康复具有积极影响。

关键词：护理干预心理疏导老年精神分裂症

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病理学实验教学改革的尝试

中华医学教育探索杂志 2012年第6期11卷 611-613页

作者：黎雁英陆竞艳周英琼李运千陈秋月林静桂林医学院附属医院病理科/病理教研室 541001

病理学实验课是病理教学中的重要部分，本校通过提高教师专业水平、采用师生互动的教学方式、增设网络课程、运用多媒体教学、增加课外实践等方法来提高学生学习积极性，同时应用多元化测评体系进行实验综合能力测评，取得一定成效，为... 详细信息

病理学实验课是病理教学中的重要部分，本校通过提高教师专业水平、采用师生互动的教学方式、增设网络课程、运用多媒体教学、增加课外实践等方法来提高学生学习积极性，同时应用多元化测评体系进行实验综合能力测评，取得一定成效，为病理学实验教学改革提供借鉴。

关键词：病理学实验课教学方法

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学龄前儿童龋病社区管理模式及效果

中国校医 2014年第9期28卷 671-672,674页

作者：李林芬黎新雁刘矿英广州市天河区人民医院保健科广东广州510660 广州市天河区人民医院口腔科

目的分析儿童龋齿社区管理模式及其效果,为完善和推广龋齿防控体系提供依据。方法选择3~6岁儿童1 889例为调查对象,据《全国第三次口腔健康流行病学调查方案》标准,由口腔科医师进行口腔象限逐个检查,采用自行设计问卷进行影响因素分析... 详细信息

目的分析儿童龋齿社区管理模式及其效果,为完善和推广龋齿防控体系提供依据。方法选择3~6岁儿童1 889例为调查对象,据《全国第三次口腔健康流行病学调查方案》标准,由口腔科医师进行口腔象限逐个检查,采用自行设计问卷进行影响因素分析;在基线调查的基础上,将研究对象随机分为观察组（280名儿童）,对照组（315名儿童）;观察组实施社区管理,采取综合干预措施,由医院口腔科及全科医生主持,对照组由保健幼师随机进行;干预时间为1年。结果 2011—2012年患龋率分别为68.82%和66.60%,均随年龄增长而显著增高,好发于第二磨牙的咬牙合面;甜食摄入量和频率、年龄是其危险因素,而早晚刷牙、饭后漱口和含氟化泡沫则是保护因素;综合干预后,干预后观察组新发龋率显著低于对照组（P〈0.05）,含氟化泡沫率和窝沟封闭率显著高于对照组（P〈0.05）,但2组充填率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论社区管理能有效降低小儿患龋率,有利于提高儿童口腔健康水平,但充填工作有待加强。

关键词：儿童,学龄前龋齿社区卫生服务/组织和管理