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兰州大学学报（自然科学版） 2013年第6期49卷 828-832页

作者：黄聪琳丁硕姜华安黎哲甘肃省中医院兰州730050 甘肃省中医药研究院兰州730050 兰州大学生命科学学院兰州730000

采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组... 详细信息

采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础.

关键词： CBL1蛋白 GST pull-down CIPK7蛋白蛋白质相互作用

低丰度基因Real-time PCR相对定量方法的建立

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药物生物技术 2014年第6期21卷 534-537页

作者：黄聪琳王晓琳郭敏姜华甘肃省中医院甘肃省中医药研究院甘肃兰州730050

低丰度基因通常难以通过标准曲线法进行Real-time PCR。通过使用特异引物,对拟南芥低丰度表达基因CIPK7进行了转录水平上的定量分析,成功建立了可检测低丰度基因表达变化的Real-time PCR标准曲线定量方法。扩增CIPK7基因CDS全长,并对PC... 详细信息

低丰度基因通常难以通过标准曲线法进行Real-time PCR。通过使用特异引物,对拟南芥低丰度表达基因CIPK7进行了转录水平上的定量分析,成功建立了可检测低丰度基因表达变化的Real-time PCR标准曲线定量方法。扩增CIPK7基因CDS全长,并对PCR产物进行纯化,使用纯化的PCR产物作为标准品,绘制标准曲线,对CIPK7基因的表达进行Real-time PCR分析。与常规Real-time PCR方法进行比较,结果表明,该方法得到的标准曲线,浓度区间范围广,线性关系好,能够很好地适用于低丰度基因的Real-time PCR标准曲线法定量。实验测得低温胁迫下拟南芥CIPK7基因的表达量,随低温处理时间增长,有明显的先升高后降低的变化。

关键词：实时定量荧光PCR 低丰度表达基因低温胁迫基因表达标准曲线相对定量

基于过敏性鼻炎免疫途径探讨镰形棘豆总黄酮调控Toll样受体的作用机制

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中药新药与临床药理 2021年第11期32卷 1657-1662页

作者：郭敏李晓东黄聪琳王晓琳顾立萍甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院甘肃兰州730050 甘肃中医药大学药学院甘肃兰州730000

目的基于过敏性鼻炎(AR)免疫途径探讨镰形棘豆总黄酮调控Toll样受体的作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为5组,分别为空白组、模型组、西替利嗪组及镰形棘豆总黄酮组低、高剂量组。除空白组外,其余4组大鼠采用卵蛋白(OVA)制作过敏... 详细信息

目的基于过敏性鼻炎(AR)免疫途径探讨镰形棘豆总黄酮调控Toll样受体的作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为5组,分别为空白组、模型组、西替利嗪组及镰形棘豆总黄酮组低、高剂量组。除空白组外,其余4组大鼠采用卵蛋白(OVA)制作过敏性鼻炎模型,西替利嗪组及镰形棘豆总黄酮组低、高剂量组分别给予西替利嗪(1 mg·kg^(-1))、镰形棘豆总黄酮(0.47、1.87 g·kg^(-1),按生药计)灌胃2周。HE、免疫组化染色观察各实验组大鼠鼻黏膜组织变化;ELISA法测定血清中转化生长因子(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2及IL-4含量;Western Blot法检测鼻黏膜中TLR2、TLR4蛋白表达。结果与空白组比较,模型组行为学评分增加(P0.05)、IFN-γ含量降低(P0.05);西替利嗪组、镰形棘豆总黄酮高剂量组鼻黏膜TLR2、TLR4蛋白表达减弱(P<0.05),差异有统计学意义。结论镰形棘豆总黄酮对卵清蛋白诱导的过敏性鼻炎具有改善作用且与剂量正相关,可能是通过调节TLR2和TLR4蛋白表达及Th1/Th2平衡影响机体免疫。

关键词：镰形棘豆总黄酮过敏性鼻炎 Toll样受体免疫功能大鼠

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藏药黄酮苷元抗炎作用的初步研究

西部中医药 2015年第2期28卷 50-52页

作者：张丽姜华黄聪琳甘肃中医学院甘肃兰州730000 甘肃省中医药研究院甘肃省中医院

目的:探讨藏药镰形棘豆黄酮苷元对大、小鼠抗炎作用的影响。方法:选用昆明种小鼠和Wi st ar大鼠,随机分为模型对照组、萘普生组(25 mg/kg)、黄酮苷元高(336 mg/kg)、中(168 mg/kg)、低剂量组(84mg/kg),灌胃给药,共7天。通过二甲苯诱导... 详细信息

目的:探讨藏药镰形棘豆黄酮苷元对大、小鼠抗炎作用的影响。方法:选用昆明种小鼠和Wi st ar大鼠,随机分为模型对照组、萘普生组(25 mg/kg)、黄酮苷元高(336 mg/kg)、中(168 mg/kg)、低剂量组(84mg/kg),灌胃给药,共7天。通过二甲苯诱导小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导小鼠腹腔毛细管通透性、蛋清致大鼠足跖肿胀、棉球致大鼠肉芽肿的方法,观察黄酮苷元对炎症的影响。结果:黄酮苷元各剂量组对由以上4种方法所致的炎症反应具有一定的抑制作用,其研究结果与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄酮苷元具有一定的抗炎作用,是镰形棘豆发挥抗炎作用的重要活性成分之一。

关键词：镰形棘豆黄酮苷元抗炎作用

镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异免疫功能的影响

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西部中医药 2016年第4期29卷 14-16页

作者：古秋莉黄聪琳姜华甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院

目的:探讨藏药镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。方法:将60只昆明种小鼠随机分为6组:正常组,模型组,镰形棘豆黄酮苷元高、中、低剂量组(336、168、84 mg/kg)和盐酸左旋咪唑组(25 mg/kg),每组10只。镰形棘豆黄酮... 详细信息

目的:探讨藏药镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。方法:将60只昆明种小鼠随机分为6组:正常组,模型组,镰形棘豆黄酮苷元高、中、低剂量组(336、168、84 mg/kg)和盐酸左旋咪唑组(25 mg/kg),每组10只。镰形棘豆黄酮苷元高、中、低剂量组分别灌胃给予不同剂量的黄酮苷元,正常组和模型组灌服等体积5%吐温-80溶液,共10天。第8天开始,以注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,除正常组腹腔注射生理盐水外,其他各组分别腹腔注射环磷酰胺,共3天。采用巨噬细胞碳粒廓清实验、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、免疫抑制小鼠器官指数的测定方法,观察镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。结果:与模型组比较,镰形棘豆黄酮苷元各剂量组能有效提高免疫抑制小鼠的吞噬百分率、廓清指数(K)和吞噬系数(α),差异有统计学意义(P<0.05),增加免疫器官脾脏和胸腺的器官指数,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:镰形棘豆黄酮苷元能够增强环磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠非特异性免疫功能。

关键词：镰形棘豆黄酮苷元非特异性免疫动物实验小鼠环磷酰胺

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藏药羌活鱼中总黄酮的提取工艺研究

西部中医药 2017年第1期30卷 24-26页

作者：郭敏王晓琳黄聪琳姜华甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院

目的:采用正交实验优选藏药羌活鱼总黄酮的提取工艺。方法:以乙醇浓度、回流时间和提取次数为因素,按正交实验设计进行实验,以总黄酮含量及纯度为指标,确定最佳条件。结果:最佳提取条件为70%的乙醇回流1.5小时,提取2次。结论:该工艺设... 详细信息

目的:采用正交实验优选藏药羌活鱼总黄酮的提取工艺。方法:以乙醇浓度、回流时间和提取次数为因素,按正交实验设计进行实验,以总黄酮含量及纯度为指标,确定最佳条件。结果:最佳提取条件为70%的乙醇回流1.5小时,提取2次。结论:该工艺设计合理,稳定可行。

关键词：羌活鱼总黄酮正交实验

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镰形棘豆总黄酮提取工艺的比较研究

西部中医药 2014年第2期27卷 34-35页

作者：郭敏王晓琳黄聪琳姜华甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院

目的:比较4种不同工艺对镰形棘豆总黄酮提取的影响。方法:采用水提醇沉酸解、水提、碱提酸沉及水提酸解4种工艺提取,以镰形棘豆总黄酮得率及纯度为指标,NaNO2-Al(NO3)3比色法测定镰形棘豆总黄酮含量。结果:镰形棘豆最佳提取工艺为水提... 详细信息

目的:比较4种不同工艺对镰形棘豆总黄酮提取的影响。方法:采用水提醇沉酸解、水提、碱提酸沉及水提酸解4种工艺提取,以镰形棘豆总黄酮得率及纯度为指标,NaNO2-Al(NO3)3比色法测定镰形棘豆总黄酮含量。结果:镰形棘豆最佳提取工艺为水提酸解。该提取物中总黄酮提取率为1.6%,纯度为:11.26%。结论:该工艺可用于镰形棘豆药材中总黄酮成分的提取,方法可靠,简便易行。

关键词：镰形棘豆总黄酮提取工艺

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一种改良的镰形棘豆DNA提取方法

西部中医药 2016年第9期29卷 34-36页

作者：黄聪琳郭敏王晓琳姜华甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院

目的:建立适合DNA条形码分析的镰形棘豆DNA提取方法。方法:以镰形棘豆(Oxytropis falcate Bunge)叶片为材料,采用改良的DNA提取方法对其DNA进行提取,并用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增对提取的DNA进行检测。结果:本方法提取的DNA,能够满足以... 详细信息

目的:建立适合DNA条形码分析的镰形棘豆DNA提取方法。方法:以镰形棘豆(Oxytropis falcate Bunge)叶片为材料,采用改良的DNA提取方法对其DNA进行提取,并用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增对提取的DNA进行检测。结果:本方法提取的DNA,能够满足以PCR为基础的分子鉴定的基本要求。操作简便,需时短,成本低廉,适于DNA的大批量提取。结论:本方法适合DNA条形码研究的DNA提取。

关键词：镰形棘豆 DNA提取 PCR扩增

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藏药镰形棘豆总黄酮苷元急性毒性实验研究

西部中医药 2013年第8期26卷 50-52页

作者：姜华张丽黄聪琳王晓琳甘肃省中医药研究院甘肃兰州730050 甘肃中医学院

目的:观察藏药镰形棘豆总黄酮苷元对小鼠的急性毒性作用,以评价该药物的安全性。方法:以最大给药浓度和最大剂量(0.1 g/kg)灌胃给药,连续观察7天,判断半数致死剂量的可能性,并据此结果,将昆明种小鼠60只分为3组:实验Ⅰ组(0.2 g/kg)、实... 详细信息

目的:观察藏药镰形棘豆总黄酮苷元对小鼠的急性毒性作用,以评价该药物的安全性。方法:以最大给药浓度和最大剂量(0.1 g/kg)灌胃给药,连续观察7天,判断半数致死剂量的可能性,并据此结果,将昆明种小鼠60只分为3组:实验Ⅰ组(0.2 g/kg)、实验Ⅱ组(0.3 g/kg)和空白对照组(0.5%CMC-Na),连续灌胃给药7天,观察小鼠毒副反应情况,测定出最大耐受量。结果:小鼠口服镰形棘豆总黄酮苷元无法测出LD50,小鼠最大耐受量为300g总黄酮苷元/kg(体质量),相当于60kg(体质量)成人临床生药日用量的378倍。结论:镰形棘豆总黄酮苷元急性毒性较小,具有一定的使用安全性。

关键词：镰形棘豆总黄酮苷元急性毒性半数致死量最大耐受量