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基于项目式学习的初中物理跨学科实践的设计与实施 ——以“物理学与工程实践”为例

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基于项目式学习的初中物理跨学科实践的设计与实施 ——以“物理...

作者：黄蓝婷闽南师范大学

学位级别：硕士

华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法的建立与初步应用

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华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法的建立与初步应用

作者：黄陶钧吉林大学

学位级别：硕士

华支睾吸虫病(Clonorchiasis)是由华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,***)寄生在人和多种哺乳动物肝胆管内所引起的一种食源性人兽共患寄生虫病。全球约1500万人感染华支睾吸虫,临床症状以肝脏受损、腹痛、发育障碍为主。目前尚无批准使... 详细信息

华支睾吸虫病(Clonorchiasis)是由华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,***)寄生在人和多种哺乳动物肝胆管内所引起的一种食源性人兽共患寄生虫病。全球约1500万人感染华支睾吸虫,临床症状以肝脏受损、腹痛、发育障碍为主。目前尚无批准使用的疫苗,且吡喹酮和阿苯哒唑等药物治疗常伴发不良反应。防重于治,建立快速有效的检测方法是华支睾吸虫病防控的重要手段。华支睾吸虫的检测主要依靠显微镜观察,容易误检和漏检,需要专业技术人员操作。为提高检测灵敏性和特异性,近年来开发出针对华支睾吸虫的ELISA、PCR和荧光定量PCR等方法,尽管这些方法具有其相应的优势,但存在操作繁琐、检测时间较长以及费用较高等不足,不利于推广应用。因此,亟需开发一种快速、灵敏、高特异性的华支睾吸虫可视化检测方法。CRISPR/Cas系统是古细菌和大多细菌抵御外来病原入侵的一种免疫系统,常用于基因编辑和核酸检测领域。其中,CRISPR/Cas12a系统具有识别特异性靶标序列和切割非特异性ss DNA的特性,将RPA(重组酶聚合酶扩增)或LAMP(环介导等温扩增)等快速扩增技术与CRISPR/Cas12a系统结合,可以实现检测靶标的指数级扩增,具有更高的灵敏性与特异性。目前,这类检测技术已广泛应用于细菌、真菌和病毒等领域,在寄生虫领域推广应用潜力巨大。本研究将RPA快速扩增与CRISPR/Cas12a反式切割特性结合,建立了华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a快速检测方法,提供可视荧光和侧流层析两种可视化策略,无需大型仪器设备和专业技术人员,满足现场检测的需要。研究结果如下:(1)重组蛋白Lb Cas12a的表达、纯化及切割功能验证。利用无缝克隆技术将线性化载体p GEX-4T-1与目的片段Lb Cas12a连接,构建重组质粒p GEX-4T-1-Lb Cas12a,诱导表达和纯化获得重组蛋白Lb Cas12a,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,目的条带大小约170.6 k Da。荧光报告试验和底物切割试验表明重组蛋白Lb Cas12a具有良好的顺式和反式切割活性,并且反式切割结果在UV/蓝光灯下肉眼可视。(2)华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立。针对华支睾吸虫线粒体DNA的COX1基因,设计并筛选出最佳靶标及对应cr RNA,随机正交试验筛选出RPA最佳引物组合;通过优化Cas12a、cr RNA、FQ-ss DNA荧光报告分子浓度以及缓冲液组分,获得了最佳检测效果,并提供可视荧光(UV/蓝光灯)与侧流层析(试纸条)两种可视化手段;特异性试验的结果表明本研究建立的检测方法与日本血吸虫、东方次睾吸虫、肝片吸虫、弓形虫、贾第虫、歧腔吸虫和大肠杆菌等病原无交叉反应;灵敏性试验的结果表明UV/蓝光灯检测限可达10拷贝/微升或0.8个囊蚴/克,试纸条检测限可达10拷贝/微升或5个囊蚴/克;检测方法与标准样品复核具有100%一致性;初步建立了一种可在1 h内完成检测和结果判读的华支睾吸虫可视化检测方法。(3)华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的初步应用。利用本研究建立的方法检测50份麦穗鱼肉和50份人粪拭子,通过UV/蓝光灯和侧流层析试纸条判读,结果显示华支睾吸虫在麦穗鱼肉中的阳性率为28.0%(14/50),在人粪拭子中的阳性率为10%(5/50);与巢式PCR的检测结果一致,表明建立的华支睾吸虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法具有良好效果,可应用于临床检测。综上,本研究建立了一种基于RPA-CRISPR/Cas12a系统的华支睾吸虫快速检测方法,包含可视荧光和侧流层析两种可视化手段,具有良好的灵敏性、特异性,无需大型设备和专业技术人员等优点,满足现场检测的需求,也可作为一种流行病学监测和病原快速筛查的工具。

关键词：华支睾吸虫 CRISPR/Cas12a RPA 侧流层析可视化检测

基于调和线性化Navier-Stokes方程的局部感受性

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空气动力学学报 2024年第3期42卷 69-82页

作者：黄加昊赵磊赵瑞天津大学力学系天津300350 天津市现代工程力学重点实验室天津300350 北京理工大学宇航学院北京100081

高超声速边界层中Mack模态的感受性决定了触发转捩的扰动的初始幅值,因而考虑感受性是构建合理的转捩预测方法的前提。壁面粗糙元与来流声波作用从而激发Mack模态是典型的局部感受性过程,对该过程的描述方法大致包括大雷诺数渐近理论、... 详细信息

高超声速边界层中Mack模态的感受性决定了触发转捩的扰动的初始幅值,因而考虑感受性是构建合理的转捩预测方法的前提。壁面粗糙元与来流声波作用从而激发Mack模态是典型的局部感受性过程,对该过程的描述方法大致包括大雷诺数渐近理论、有限雷诺数理论和直接数值模拟。由于需要做小粗糙元线性假设,所以前两种方法无法有效预测有限高度粗糙元工况,而第三种方法则由于计算量庞大而无法进行参数化研究。本文发展了一套基于调和线性化Navier-Stokes方程的局部感受性高效算法,并针对马赫数5.92的高超声速平板边界层系统地研究了小尺度及有限高度粗糙元与声波引起的Mack模态感受性。结果表明,快声波诱导Mack模态的局部感受性显著强于慢声波。对于有限高度粗糙元,快声波的局部感受性在较大声波参数范围内随粗糙元高度增加而超线性增强。

关键词：感受性粗糙元调和线性化Navier-Stokes方程高超声速边界层

英语学习活动观下高中教师实施阅读活动的个案研究

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英语学习活动观下高中教师实施阅读活动的个案研究

作者：黄于倩长江大学

学位级别：硕士

信用卡不良资产证券化分析 ——以“23惠元2”为例

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信用卡不良资产证券化分析 ——以“23惠元2”为例

作者：黄嵋广州大学

学位级别：硕士

当前消费市场日趋激烈,信用卡逾期认定标准调整以及催收行为规范,使得信用卡贷款逾期增加,商业银行面领着较大的不良资产处置压力,尤其是信用卡消费类不良贷款的处置在近几年增长最为明显。不良资产证券化有望成为减轻不良资产处置压力... 详细信息

当前消费市场日趋激烈,信用卡逾期认定标准调整以及催收行为规范,使得信用卡贷款逾期增加,商业银行面领着较大的不良资产处置压力,尤其是信用卡消费类不良贷款的处置在近几年增长最为明显。不良资产证券化有望成为减轻不良资产处置压力进而缓解银行流动性危机的重要方式。本文研究的信用卡不良资产证券化具有一定的代表性,其基础资产笔数较多、单笔金额较小、同质化程度较高且全部为信用卡不良资产债权,资产违约率高。本文选取中信银行发行的惠元2023年第二期信用卡不良资产支持证券作为案例研究对象,该产品偿付频率为月付且仅采用内部增信措施,在信用卡不良资产证券化中具备一定的时效性和典型性。本文首先在对中信银行背景、信用卡不良资产证券发行现状、产品发行概况进行详细介绍,接着分析基础资产质量、现金流支付结构、产品定价、催收管理等方面存在的优势与不足,在此基础之上挖掘产品风险及其缓释措施,最后从发行机构和投资者两个视角探讨该产品的发行效益。通过案例分析结果发现:在基础资产方面,“23惠元2”产品通过设置合理的不良贷款特征分布,分散入池资产风险。在现金流支付结构方面,信托(流动性)储备账户等增信机制配合现金流支付机制,有效保障了优先档证券投资者的本息偿付。在产品发行定价方面,通过名义利差定价法得出产品定价合理。在催收管理方面,采用自主催收和委外催收相结合的差异化策略,处置回收款覆盖现金流正常支付,但是处置力度不大。在风险及其缓释方面,该产品在基础资产池筛选、现金流压力测试、交易结构设置、催收管理等方面对信用风险、流动性风险和催收机构风险进行缓释;可能基于发行成本的考虑,该产品仅采用内部增信措施,未增加第三方机构的流动性支持,因此平衡证券风险和产品发行成本成为发行不良资产证券化产品的重点关注因素。在发行效益方面,该产品实现发起机构不良资产出表,不良贷款和不良贷款率“双降”,发挥发行成本优势,塑造良好的企业形象,而且优先档证券投资者的本息已完成全部偿付且存在早偿情况。

关键词：资产证券化信用卡不良资产催收管理风险及缓释发行效益

苦参碱介导的MAPK/ERK信号通路对骨肉瘤细胞增殖的影响及其机制研究

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苦参碱介导的MAPK/ERK信号通路对骨肉瘤细胞增殖的影响及其机制研...

作者：黄心诚湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:苦参碱是一种由豆类植物苦豆子所产生的生物碱,被广泛认为是一种知名的喹诺烷类生物碱化合物。它拥有多种药效,如抗肿瘤、抗炎症、抗病原体、缓解疼痛、抗纤维化、抗害虫和抗细菌等。骨肉瘤(osteosarcoma,OS)被认定为最普遍的骨源... 详细信息

背景:苦参碱是一种由豆类植物苦豆子所产生的生物碱,被广泛认为是一种知名的喹诺烷类生物碱化合物。它拥有多种药效,如抗肿瘤、抗炎症、抗病原体、缓解疼痛、抗纤维化、抗害虫和抗细菌等。骨肉瘤(osteosarcoma,OS)被认定为最普遍的骨源性恶性疾病,主要在青少年中出现,且男性患病率高于女性,两者的比率在1.5～2∶1之间。其首先侵犯长骨的干骺端,其次是股骨的远侧以及胫骨的近侧,最终才会侵犯肱骨的近侧。OS的发展速度很快,预后不佳,导致残疾和死亡的风险也很大。近年来,中药对抗肿瘤的功效和机理已经引起了学术界的广泛关注。研究结果显示,苦参碱能够调控多个信号通路,进而产生对抗OS的效果。尽管其具体的作用原理还没有被彻底揭示,但无法否认的是,它在抗OS领域的研究价值和发展潜力依然巨大。目的:本研究旨在深入分析苦参碱对蛋白激酶/细胞外调解蛋白激酶(mitoge nactivated protein kinase/extracellular regulated protein kinase,MAPK/ERK)信号途径以及相应蛋白质表达的作用,以期更好地理解它在骨肉瘤细胞生长过程中的作用,并据此为骨肉瘤的药物治疗开辟出全新的视角与方法。方法:1.离体实验:利用HOS细胞培养基进行细胞的复苏、传代,在这个过程中筛选出正在进行对数增长且生长情况良好的HOS细胞,采用3×10～3个/孔的方法将其接种到96孔板的细胞培养板上,然后在37℃和5%CO2的环境下培养24h。将100μl的无菌PBS注入到细胞孔的周围。依据前述筛选结果,我们对OS敏感细胞株进行了苦参碱处理,检测细胞的活力,并通过流式细胞术来观察细胞周期的变化。同时,我们使用TUNEL和DAPI双染法来研究细胞的凋亡情况。使用蛋白质印迹(western blot,WB)实验来评估b细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)以及Bcl-2样蛋白4(Bax)在细胞凋亡过程中的表达量。研究在不同环境下的处理对OS敏感细胞株的影响,通过WB来观察MAPK、ERK等蛋白质的表达变化。采用MAPK/ERK通道阻断剂(PD98059)对HOS细胞群体的MAPK/ERK信息传导进行调控,然后进一步使用苦参碱进行处理,并利用WB实验来研究Bcl-2与Bax的凋亡相关蛋白的分布状态。2.在体实验:将6只裸鼠皮下肿瘤模型随机分为两组,苦参碱组(n=3)和对照组(n=3)。苦参碱组腹腔注射40mg/kg的苦参碱,对照组注射5%的二甲基亚砜溶液(dimethyl sulfoxide,DMSO)。每隔一天注射一次,注射7次后取出肿瘤称重,做组织学分析。制作石蜡切片与HE染色进行病理形态学观察;免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白b细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2样蛋白4(Bax)的表达情况;TUNEL实验检测细胞凋亡情况。结果:体内外实验结果显示经不同浓度苦参碱处理后的HOS细胞,其细胞增殖受到显著抑制,并明显促进其凋亡,阻断细胞周期G1期。免疫组化和WB结果显示,苦参碱抑制了MAPK/ERK信号通路的激活。我们发现苦参碱还下调了Bcl-2的表达,这可能与蛋白合成的抑制有关。结论:本次研究发现苦参碱可以通过抑制HOS细胞内的MAPK/ERK信号通路的活性,来限制肿瘤细胞的增殖,阻断细胞周期G1期,同时促进细胞凋亡。苦参碱还能够影响Bax和Bcl-2的表达水平,进而促进肿瘤细胞凋亡。

关键词：骨肉瘤苦参碱 MAPK/ERK 信号通路

基于深度学习的小学数学教学设计研究 ——以“图形与几何”为例

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基于深度学习的小学数学教学设计研究 ——以“图形与几何”为例

作者：黄诗文洛阳师范学院

学位级别：硕士

随着《义务教育数学课程标准(2022年版)》以及“双减”政策的颁布,小学数学教学与核心素养的联系越来越紧密,随着基础教育改革不断走向深入,以培养学生核心素养为根本追求的“深度学习”理念受到教育界的广泛关注。深度学习是指在教师... 详细信息

随着《义务教育数学课程标准(2022年版)》以及“双减”政策的颁布,小学数学教学与核心素养的联系越来越紧密,随着基础教育改革不断走向深入,以培养学生核心素养为根本追求的“深度学习”理念受到教育界的广泛关注。深度学习是指在教师的引导下,学生围绕着具有挑战性的学习内容,全身心积极参与其中并体验成功,最终获得发展的有意义地学习过程。教学设计是课堂教学不可缺少的重要一环,是教师对课堂教学的准备和生成,对学生的学习起着直接的作用,承载着核心知识体系的建构、高阶思维发展以及学科核心素养落实等任务。在此基础上,结合深度学习原理,提出发展学生核心素养的教学设计具有重要意义。基于以上背景,首先,本研究通过对10所学校教师教学设计进行调查和分析,发现目前小学数学教师的教学设计存在如下问题:教学设计“一课一备”,学生学习碎片化;教学活动形式化,深度学习实效不强;教学评价重结果,反思动力不足;学情分析片面化,重知识轻情感。其次,为了构建合理有效的小学数学教学设计,基于深度学习理论,构建了基于深度学习的小学数学教学设计的DELC模型:前端分析——预备与激活前期知识——深度获取、加工知识——评价设计。在前端分析上,应进行教学分析、学情分析和教学目标分析;在预备与激活前期知识上,应进行激活前期知识设计、主体情境设计以及问题情境设计;在深度获取、加工知识上,应进行问题设计和深度探究设计;在评价设计上,包括拓展型练习和学生反思。再次,依据构建的教学设计模型,文本以“图形与几何”内容中的“平行四边形的面积”为例,进行基于深度学习的教学设计和分析,并通过专家评价法对教学设计进行效度检验。最后,概括出本研究的主要成果及不足,指出基于深度学习的教学设计应在实践中进一步检验与修正。

关键词：深度学习小学数学教学设计