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灰飞虱体内与大麦黄条点花叶病毒核衣壳蛋白互作的蛋白鉴定及功能分析

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灰飞虱体内与大麦黄条点花叶病毒核衣壳蛋白互作的蛋白鉴定及功能...

作者：俎瑶琛中国农业科学院

学位级别：硕士

灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)是危害农作物的一种重要迁飞性害虫,其寄主范围广泛,可通过取食植物汁液传播斐济病毒属(Fijivirus)、纤细病毒属(Tenuivirus)和细胞质弹状病毒属(Cytorhabdovirus)等多个属的病毒,对农业生产形成... 详细信息

灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)是危害农作物的一种重要迁飞性害虫,其寄主范围广泛,可通过取食植物汁液传播斐济病毒属(Fijivirus)、纤细病毒属(Tenuivirus)和细胞质弹状病毒属(Cytorhabdovirus)等多个属的病毒,对农业生产形成极大威胁,已多次造成严重经济损失。切断灰飞虱对病毒的传播是防治病毒病最行之有效的方法之一。目前,对于灰飞虱传播斐济病毒属、纤细病毒属病毒的机制研究已经取得一定进展,但灰飞虱与植物弹状病毒的互作机制却少有研究。本文以灰飞虱及其传播的大麦黄条点花叶病毒(Barley yellow striate mosaic virus,BYSMV)为研究对象开展灰飞虱与弹状病毒的传毒机制研究,筛选与灰飞虱获毒或互作相关的介体蛋白并解析功能,为阻断植物弹状病毒乃至以灰飞虱为介体的多种病毒的传播提供新的位点靶标具有重要科学意义。本研究首先构建了含全长BYSMV核衣壳蛋白(N)基因的诱饵载体pDHB1-N,功能验证结果表明pDHB1-N能在酵母内正常表达并行使功能。其次对文库筛选条件进行优化,确定His基因产物抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)的使用浓度为12 mM时可去除可能存在的轻微筛库背景。然后利用分离泛素酵母双杂交系统,以pDHB1-N为诱饵对灰飞虱cDNA文库进行筛选,对得到的57个阳性克隆的序列进行比对分析,发现其中的20个序列可匹配到褐飞虱等物种的同源蛋白。利用GO注释对得到的表皮蛋白、泛素和核糖体膜相关蛋白等20个候选蛋白进行了分析,发现它们具有转运活性、氧化还原酶活性及结构分子活性等功能,参与细胞过程、代谢过程及应激反应等多个生理过程,并存在于细胞膜、细胞内、细胞外区域等不同细胞组分中。信号通路分析发现它们主要参与了脂肪酸生物合成,脂质代谢,信号传导途径等多个通路过程。同时,经酵母双杂交共转验证和β-半乳糖苷酶检测检测进一步确认了其中的17个候选蛋白与BYSMV N发生互作。本实验室已在灰飞虱与水稻条纹病毒的互作机制研究中发现灰飞虱的表皮蛋白CPR1可与水稻条纹病毒结合,帮助病毒逃避寄主血淋巴的免疫作用从而保护病毒不被降解。本文也通过筛库获得了同一表皮蛋白CPR1的全长基因,将其大量表达并进行纯化后,利用GST pull-down实验验证了CPR1可与BYSMV N蛋白发生体外互作。为明确CPR1在灰飞虱传播BYSMV中的功能,利用RNAi技术将合成的CPR1双链RNA(GFP为对照)显微注射至三龄带毒灰飞虱体内,明确沉默CPR1对灰飞虱传播BYSMV的影响。CPR1被沉默后,RT-qPCR分析发现BYSMV在灰飞虱体内的含量随着CPR1 mRNA转录水平的降低明显下降,注射后第六天下降幅度最高可达71.84%。同时,生物学接种实验也发现灰飞虱的传毒效率在沉默CPR1后下降了51.73%。以上实验结果表明,CPR1可在灰飞虱获毒或传毒过程中起到重要作用。此外,研究表明多种含有几丁质结合保守结构域的表皮蛋白参与了禾谷黄矮病毒(CYDV)、黄瓜花叶病毒(CMV)等病毒在介体内的传播,推测CPR1可能在帮助病毒在介体内逃避免疫完成传播的过程中存在广谱的作用,其关键作用位点可能为几丁质结合结构域。本研究为进一步探索弹状病毒与介体分子互作机制奠定了基础,为通过切断以昆虫为介体的病毒传播途径来防治病毒病的新策略提供了科学依据。

关键词：灰飞虱大麦黄条点花叶病毒表皮蛋白传毒机制酵母双杂交

猪轮状病毒NSP4及其viroporin调控内质网应激和细胞凋亡的分子机制研究

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猪轮状病毒NSP4及其viroporin调控内质网应激和细胞凋亡的分子机...

作者：建琛瑶西北农林科技大学

学位级别：硕士

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起幼龄动物和婴幼儿急性肠胃炎的一种常见病原体,特别是在发展中国家,每年可造成约45万名5岁以下儿童死亡。猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原体之一,仔猪感染猪轮状病毒后... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起幼龄动物和婴幼儿急性肠胃炎的一种常见病原体,特别是在发展中国家,每年可造成约45万名5岁以下儿童死亡。猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原体之一,仔猪感染猪轮状病毒后迅速发生腹泻,严重者常常因脱水而死亡,对畜牧业的发展危害很大。RV非结构蛋白NSP4是一种病毒肠毒素,由175个氨基酸组成,NSP4片段(47-91 aa)具有viroporin的结构特征,NSP4及其viroporin在轮状病毒致病过程中发挥着重要作用。研究发现NSP4(47-91aa)突变体能在内质网形成一个跨膜的水孔,破坏膜的内稳态而增加胞质钙浓度。NSP4及其viroporin可能与轮状病毒诱导的内质网应激和细胞凋亡有关,对轮状病毒NSP4及其viroporin的深入研究,为进一步阐明PoRV致病机理奠定基础,具有重要的公共卫生意义。本研究用猪轮状病毒NSP4及其viroporin真核表达质粒转染细胞,首先检测凋亡因子的变化,确定其引起凋亡,然后检测了内质网应激因子的变化,以探究NSP4及viroporin与内质网应激和细胞凋亡之间的关系,具体研究结果如下:(1)RT-PCR扩增得到猪轮状病毒的NSP4基因和NSP4基因片段(47-91 aa),通过引物设计在它们C端引入Flag标签,并将其连接到pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒pcDNA3.1-NSP4-Flag和pcDNA3.1-viroporin-Flag。双酶切鉴定和测序结果与预期结果一致,说明本研究成功构建了NSP4和NSP4片段(47-91 aa)的真核表达质粒。(2)将重组质粒NSP4-GFP和viroporin-GFP转染猪小肠上皮细胞(SIEC),通过荧光倒置显微镜观察和Western blot检测,结果表明NSP4和NSP4片段(47-91 aa)成功表达。DNA ladder是细胞凋亡的特征之一,抽提转染NSP4-GFP和viroporin-GFP的SIEC细胞的DNA,用10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示NSP4和NSP4片段(47-91aa)所在泳道出现DNA ladder现象,说明NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能诱导SIEC细胞凋亡。为进一步确定NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能调控哪些凋亡相关过程,通过荧光定量PCR分析了Bax和Bcl-2的表达,发现NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能促进Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。Western blot检测发现NSP4和NSP4片段(47-91aa)能促进caspase-3、caspase-8和caspase-9的切割,说明NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能够诱导细胞的凋亡。(3)为进一步确定内质网应激是否参与了NSP4和NSP4片段(47-91 aa)诱导的细胞凋亡,检测了GRP78、CHOP、caspase-12、ATF6、ATF4和IERα等多种关键因子的表达。荧光定量PCR和Western blot检测发现NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能在mRNA水平和蛋白水平上调GRP78和CHOP的表达。caspase-12、ATF6、ATF4和IERα常参与内质网介导的细胞凋亡,荧光定量PCR和Western blot检测发现NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能上调caspase-12、ATF6、ATF4和IERα的表达。这些结果说明NSP4和NSP4片段(47-91 aa)能诱导内质网应激,并且能诱导内质网应激介导的细胞凋亡。综上所述,本研究成功构建了猪轮状病毒NSP4及其viroporin的带Flag标签的真核表达载体;通过实时荧光定量PCR和Western blot检测了NSP4及其viroporin对细胞凋亡的影响,并进一步研究发现该凋亡与内质网应激有密切关系,提示内质网应激也是NSP4诱导凋亡的途径之一,且viroporin有可能是其关键区域。本研究为轮状病毒致腹泻的机制研究提供了新的理论依据。

关键词：猪轮状病毒非结构蛋白NSP4 viroporin 细胞凋亡内质网应激

考虑三电平中点钳位型变换器中点电压波动抑制的混合调制方法

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电工技术学报 2016年第A1期31卷 146-154页

作者：余世瑶王琛琛辛宏亮李治佟北京交通大学电气工程学院北京100044

三电平中点钳位型变换器存在中点电压不平衡的固有问题。零序电压注入法可以很好地控制三电平变换器的中点平衡,而且具有原理简单、计算简便等优点,但是在调制系数比较大或者功率因数较低的情况下存在不可消除的低频波动。双调制波方法... 详细信息

三电平中点钳位型变换器存在中点电压不平衡的固有问题。零序电压注入法可以很好地控制三电平变换器的中点平衡,而且具有原理简单、计算简便等优点,但是在调制系数比较大或者功率因数较低的情况下存在不可消除的低频波动。双调制波方法可以在全范围内消除中点波动,但其会造成开关频率的增大和谐波性能恶化。本文结合零序电压注入和双调制波混合调制方法的优点,达到了在消除低频波动的同时又能最大程度上降低开关频率和保持谐波性能的目的。仿真和实验结果证明了所提出的混合调制方法的正确性和可行性。

关键词：中点钳位零序电压双调制波混合调制

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预时效对含0.1%In的Al-Mg-Si合金微观结构和力学性能的影响

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材料工程 2023年第6期51卷 101-110页

作者：徐亚琪翁瑶瑶陈家浩张宗庆解茂轩孙琪琛南京工程学院材料科学与工程学院南京211167 南京工程学院江苏省先进结构材料与应用技术重点实验室南京211167

采用硬度测试、拉伸测试、扫描电镜和透射电镜系统研究微量In添加与不同预时效工艺对Al-Mg-Si合金微观结构和力学性能的影响。结果表明:添加0.1%(质量分数)In的Al-Mg-Si合金在100℃/3 h预时效下,同时具有较低的T4P态硬度以及更高的烘烤... 详细信息

采用硬度测试、拉伸测试、扫描电镜和透射电镜系统研究微量In添加与不同预时效工艺对Al-Mg-Si合金微观结构和力学性能的影响。结果表明:添加0.1%(质量分数)In的Al-Mg-Si合金在100℃/3 h预时效下,同时具有较低的T4P态硬度以及更高的烘烤硬度(118.56HV,相比于无预时效的Al-Mg-Si合金硬度提高了15.08%)和抗凹陷性。这说明预时效处理和In微合金化的复合作用能够抑制自然时效的有害影响,并提高合金的烘烤硬化性。微量In添加能够细化Al-Mg-Si合金中的含Fe相,促进合金时效过程中β″相的形成,从而提高合金的硬度。但是,In元素添加降低了Al-Mg-Si合金的伸长率,这是由In在铝基体中固溶度较低,形成了In颗粒导致的。

关键词： Al-Mg-Si合金预时效 In添加自然时效析出强化

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中成药临床应用实践指南的报告规范（RIGHT for CPM）解读

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中国实验方剂学杂志 2025年第1期 211-218页

作者：王憭瑶潘赫婧张乐王文雅廖星浙江中医药大学基础医学院中国中医科学院中医临床基础医学研究所循证医学基础研究室

中成药临床应用实践指南在国家药物目录遴选、医疗机构处方集制定、中成药临床合理用药等方面提供重要的参考依据，是中医药指南的重要组成部分。中成药作为中国药品供应保障体系的重要组成部分，在许多疾病门类中均发挥着重要的治疗、... 详细信息

中成药临床应用实践指南在国家药物目录遴选、医疗机构处方集制定、中成药临床合理用药等方面提供重要的参考依据，是中医药指南的重要组成部分。中成药作为中国药品供应保障体系的重要组成部分，在许多疾病门类中均发挥着重要的治疗、预防及保健作用，但也存在乱用甚至滥用现象。为了规范中成药的合理应用，浙江中医药大学研究团队基于国际实践指南报告标准（RIGHT）清单框架，研制了中成药临床应用实践指南的报告规范（RIGHT for CPM）。RIGHT for CPM清单汇集了已发布的中成药指南、现有的中医药报告清单、RIGHT清单及其扩展版中的关键信息，形成初始报告清单条目池，邀请不同学科的17位专家进行2轮德尔菲问卷调研后形成，最后由来自国内外中医药研究、报告指南领域的18位权威专家审查并批准发布。RIGHT for CPM清单较RIGHT清单新增16个亚条目和修订了RIGHT清单的2个亚条目，更加突出中成药指南的报告特点，考虑到了中成药遴选及入选标准、政策准入、适应证候和症状、联合用药说明、特殊人群用药、使用注意事项、西医医师用药建议等方面，可进一步提升中成药指南报告质量和透明度，促进中成药指南的规范化报告和中成药的临床合理应用。该文就RIGHT for CPM清单的研制过程、重点突出中成药指南特色的条目内容进行解读，以期促进RIGHT for CPM清单的推广应用。

关键词：中成药临床实践指南报告规范中成药临床应用实践指南的报告规范(RIGHT for CPM) 解读

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论甘肃沿黄灌区农业的高效持续发展

兰州大学学报（社会科学版） 1996年第3期24卷 52-56页

作者：李贞廉扬瑶琛白银市农技推广站

本文认为通过实行“三扩大”，大力发展玉米、间套、蔬菜和设施农业，引导农业向集约高效方向发展是甘肃沿黄灌区农业发展的必然趋势．论述了持续高产高效农业与科技进步的关系，提出采取优化品种结构、时空结构、要素组配等措施，实行... 详细信息

本文认为通过实行“三扩大”，大力发展玉米、间套、蔬菜和设施农业，引导农业向集约高效方向发展是甘肃沿黄灌区农业发展的必然趋势．论述了持续高产高效农业与科技进步的关系，提出采取优化品种结构、时空结构、要素组配等措施，实行全方位增加农业投入，进而实现沿黄灌区农业高产、高效。

关键词：灌溉农业高产高效持续农业

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中文文本水印在移动内容推送系统中的应用研究

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中文文本水印在移动内容推送系统中的应用研究

作者：鲁慕瑶武汉理工大学

学位级别：硕士

现今时代,计算机网络技术飞速发展,信息的传播变得更加迅速,人们获取数字内容的方法变得非常方便和多样化。随着移动通信进入4G时代,移动平台日益普及,移动客户端的信息安全问题也越来越受到关注。一般的移动终端上,利用移动内容推送系... 详细信息

现今时代,计算机网络技术飞速发展,信息的传播变得更加迅速,人们获取数字内容的方法变得非常方便和多样化。随着移动通信进入4G时代,移动平台日益普及,移动客户端的信息安全问题也越来越受到关注。一般的移动终端上,利用移动内容推送系统发布数字内容是目前的主流应用之一。移动终端上的数字内容脱离了发送者,数字内容的完整性、不可否认性以及数字内容版权保护是当前急需解决的热点问题。除了传统的用户认证、加密等信息安全手段以外,数字水印技术是保护移动终端上的数字内容安全的主要技术之一。由于文本内容的冗余信息较少,文本内容保护的问题一直没有得到很好的解决。由于中文文本和西文文本的巨大差异,国外的文本水印的研究成果很难直接利用到中文文本的保护上来。汉语拼音作为中文的重要注音方法,它的结构简单而独特,且使用范围广泛。因此,立足汉语拼音的结构特征,研究基于汉语拼音的文本水印将是一个极具潜力的研究方向。本文依托一个实际项目,对移动内容推送系统中的中文文本水印技术进行了研究。主要工作如下:(1)从Android平台上的移动内容推送技术方案方面重点比较了其优缺点,最终选择了所研究平台的移动内容推送方案。(2)根据中文文本文档在现实应用中版权安全性的需求,对数字水印的结构、嵌入方法、汉语拼音结构、文本零水印技术等方面开展了具体的研究,设计实现了一种以汉语拼音结构为基础的中文文本零水印算法——CPAW。(3)对CPAW算法作了比较具体的展示,逐一介绍了实验环境的营造流程、模拟试验的各个环节。接着,根据水印具备的各项性能对本算法进行了相关测试,可以直观地从实验结果得出本文提出的文本零水印算法经得起考验的结论。最后,对现存的各种文本水印技术进行了综合对比分析,由此得出基于汉语拼音的文本零水印算法具有研究与应用价值。

关键词：汉语拼音文本水印移动内容推送系统

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刘少奇保持党的纯洁性思想研究

刘少奇保持党的纯洁性思想研究

作者：鲁梦瑶扬州大学

学位级别：硕士

刘少奇作为中国无产阶级的革命家、政治家和理论家,在新民主主义革命和社会主义建设时期对党和人民的事业做出了卓越的贡献。他的关于保持党的纯洁性思想作为其党建思想的重要组成部分,不仅有重要的理论价值,而且为中国共产党的建设实... 详细信息

刘少奇作为中国无产阶级的革命家、政治家和理论家,在新民主主义革命和社会主义建设时期对党和人民的事业做出了卓越的贡献。他的关于保持党的纯洁性思想作为其党建思想的重要组成部分,不仅有重要的理论价值,而且为中国共产党的建设实践发挥了重要作用。当前在新的历史条件下,重温和探讨刘少奇保持党的纯洁性思想,不仅将深化对刘少奇党建思想的认识,而且对于中国共产党继续保持党的先进性和纯洁性具有重要的现实意义。本文梳理了马克思、恩格斯、列宁、毛泽东关于保持无产阶级政党纯洁性的思想,并将其作为刘少奇保持党的纯洁性思想的理论基础;分析了刘少奇保持党的纯洁性思想的形成过程及其初步形成、成就和进一步完善的三个阶段;从保持党在政治上的纯洁性、思想上的纯洁性、组织上的纯洁性、作风上的纯洁性和保持党的清正廉洁五个方面,着重探讨了刘少奇保持党的纯洁性的主要内容;在此基础上指出了刘少奇保持党的纯洁性思想的历史意义和当代价值。

关键词：刘少奇中国共产党纯洁性建设

基于LSTM的软件系统异常检测方法的研究与实现

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基于LSTM的软件系统异常检测方法的研究与实现

作者：鲁沛瑶西安电子科技大学

学位级别：硕士

随着计算机行业的快速发展,计算机软件已经被广泛的应用于社会的方方面面,软件的规模也变得越来越庞大,面对日益提高的软件可靠性要求,异常检测作为软件错误发现、异常原因分析和异常恢复的关键步骤已经变得越来越重要。软件系统异常检... 详细信息

随着计算机行业的快速发展,计算机软件已经被广泛的应用于社会的方方面面,软件的规模也变得越来越庞大,面对日益提高的软件可靠性要求,异常检测作为软件错误发现、异常原因分析和异常恢复的关键步骤已经变得越来越重要。软件系统异常检测即在软件上线后对不符合开发人员预期的行为进行检测的过程。日志作为开发人员理解与分析系统运行状态的重要资源,是软件异常检测不可或缺的基本内容,基于日志的软件系统异常检测已经成为目前软件开发过程中必不可少的关键阶段。与此同时,基于日志的异常检测还面临着许多困难:日志难以解析、异常检测的实时性要求较高、日志消息的内容利用率较低、日志的上下文相关性难以捕捉等。因此,基于日志数据的软件系统异常检测并非易事。针对以上的四个问题,本文提出了基于长短记忆网络(Long Short Term Memory Network,LSTM)的软件系统异常检测方法。具体的研究内容包括以下几个方面:(1)对于日志消息难以解析的问题,本文设计了一个通用的实时结构化解析方法,利用最长公共子序列(Longest Common Subsequence,LCS)的思想,将文本格式的日志消息实时解析为结构化的、计算机可处理的数据内容,同时基于前缀树优化了日志的LCS计算过程,将日志消息解析的时间复杂度由O(7)m*n(8)降低为O(7)n(8)。(2)针对日志的上下文高度相关性和异常非模式化的特点,本文使用LSTM模型提取正常日志序列的行为模式,并通过日志消息的上下文w预测新的日志消息,即利用LSTM模型学习时刻t的日志消息取值概率分布P r[lm |w],最后利用预测内容与真实内容之间的差异进行异常检测,将与预测内容差异较大的日志消息判定为异常。(3)为了充分利用日志消息的内容,在构造异常检测模型的过程中,本文分别构造了执行路径异常检测模型和参数轨迹异常检测模型,分别对应日志结构化数据中的文本常量序列和参数序列,执行路径模型用于检测软件的工作流异常,参数轨迹模型则用于检测软件的性能异常。最后,本文通过对比试验的方式对基于LSTM的软件系统异常检测方法进行测试,分别利用CloudStack和Hadoop两个数据集进行实验,对比了基于主成分分析法(principal component analysis,PCA)、N-Gram和CLSTR的异常检测模型。在CloudStack数据集和Hadoop数据集分别取得了0.8221和0.8128的F-measure取值,证明了本文方法相较于传统的异常检测方法有较大的性能提升,验证了本文方法的正确性和有效性。

关键词：异常检测日志分析 LSTM 最长公共子序列前缀树