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脓毒症相关血清MicroRNA的筛选及其诊断价值初步研究

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脓毒症相关血清MicroRNA的筛选及其诊断价值初步研究

作者：骆海伦中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的：本研究通过microRNA芯片技术筛选脓毒症相关血清microRNA。通过实时荧光定量PCR技术验证部分差异表达的血清microRNA，并初步探讨其对脓毒症的诊断价值。方法：以入住呼吸重症监护病房（RICU）、急诊重症监护病房（EICU）的脓毒... 详细信息

目的：本研究通过microRNA芯片技术筛选脓毒症相关血清microRNA。通过实时荧光定量PCR技术验证部分差异表达的血清microRNA，并初步探讨其对脓毒症的诊断价值。方法：以入住呼吸重症监护病房（RICU）、急诊重症监护病房（EICU）的脓毒症病人和非脓毒症病人为研究对象。收集病人的临床资料，采集病人入选时的血清样本，脓毒症病人好转后再次采集血清样本。应用microRNA芯片技术比较3例病人脓毒症阶段和好转后血清microRNA表达水平差异，初步筛选脓毒症相关血清microRNA。扩大临床样本量至20例脓毒症病人，应用实时荧光定量PCR技术验证部分差异表达的microRNA，并比较脓毒症病人(n=95)与非脓毒症病人(n=66)所筛选出的血清microRNA表达水平的差异，初步探讨其诊断价值。结果：（1）microRNA芯片筛选的样本为3例确诊的细菌感染的脓毒症病人的血清，比较其脓毒症阶段和好转后的血清样本，筛选出差异表达microRNA共20个。（2）扩大样本量至20例脓毒症病人，应用实时荧光定量PCR对hsa-miR-3591-5p、hsa-miR-501-5p和hsa-let-7d-3p进行了验证，其中hsa-let-7d-3p在脓毒症阶段和治疗好转阶段有统计学差异。（3）通过比较95例脓毒症病人和66例非脓毒症病人的血清hsa-let-7d-3p水平，显示脓毒症组显著高于非脓毒症对照组。采用logistic回归校正脓毒症组与对照组在性别、年龄、白细胞计数、C反应蛋白、APACHEⅡ评分、SOFA评分、是否为创伤病人、是否接受有创机械通气、是否应用升压药物的差异后，血清hsa-let-7d-3p水平仍有统计学差异。受试者工作特征曲线（ROC）分析显示血清hsa-let-7d-3p诊断脓毒症的ROC曲线下面积为0.696(95%置信区间[0.615,0.778])。结论：应用microRNA芯片比较病人脓毒症阶段与好转阶段的血清样本，初步筛选了脓毒症相关血清microRNA。血清hsa-let-7d-3p与脓毒症的相关性得到了荧光定量PCR的证实，血清hsa-let-7d-3p有可能作为新的脓毒症预警诊断标志物。

关键词：脓毒症全身炎症反应综合症诊断 hsa-let-7d-3p 微RNAs

木犀草素通过AKT/GSK3β/β-catenin通路对人肝癌细胞Hep3B增殖侵袭转移的影响及机制

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海南医学院学报 2024年

作者：骆泽潭赵睿张银亮顾林赵娜李大鹏奥迪郑海伦蚌埠医科大学第一附属医院消化科蚌埠医科大学安徽生化药物研究工程中心

目的：探究木犀草素（luteolin）对人肝癌细胞株hep3B增殖、侵袭、转移及上皮间质转化的影响及机制。方法：将肝癌细胞株hep3B分为对照组、木犀草素处理组（低中高浓度及高浓度+AKT激动剂），利用CCK8实验测定细胞增殖活力，划痕及trans... 详细信息

目的：探究木犀草素（luteolin）对人肝癌细胞株hep3B增殖、侵袭、转移及上皮间质转化的影响及机制。方法：将肝癌细胞株hep3B分为对照组、木犀草素处理组（低中高浓度及高浓度+AKT激动剂），利用CCK8实验测定细胞增殖活力，划痕及transwell测定迁移和增殖能力，免疫荧光检测EMT相关蛋白，Westernblot实验测定AKT/GSK3β/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白，裸鼠成瘤实验观察裸鼠成瘤情况及肿瘤重量大小，免疫组化检测KI67及EMT相关蛋白。结果：与对照组比较，肝癌细胞株hep3B的活性受木犀草素时间及浓度抑制，浓度越高，木犀草素对肝癌细胞的侵袭和转移抑制作用越明显，木犀草素pAKT、pGSK3β、β-catenin蛋白水平受抑制，N-cadherin、Vimentin、MMP-2表达受抑制，Ki67表达受抑制，但E-cadherin表达水平升高，AKT激动剂SC79能够拮抗高浓度木犀草素对肿瘤细胞的效应。结论：木犀草素可能通过AKT/GSK3β/β-catenin信号通路抑制肝癌细胞hep3B的增殖、侵袭、转移及上皮间质转化。

关键词：木犀草素 AKT/GSK3β/β-catenin 肝癌增殖迁移转移 EMT

氨基末端脑利钠肽前体水平对非HIV免疫损害患者肺炎的预后价值

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解放军医学院学报 2014年第2期35卷 116-118页

作者：骆海伦李昱霖梁志欣陈良安解放军总医院呼吸科北京100853

目的评价氨基末端脑利钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平对非HIV免疫损害患者肺炎预后的预测作用。方法回顾性研究本院呼吸重症监护病房(respiratory intensive care unit,RICU)2011年1月-2013年5月收治的非HIV免疫损害患者肺炎的临床资料。收集入RICU 24 h内的NT-proBNP测定值。根据ICU生存情况,分为死亡组和存活组,比较两组间NT-proBNP、APACHEⅡ评分的差异。结果本研究入选患者44例,死亡18例,存活26例。死亡组的NT-proBNP水平(中位数3 066.5 pg/ml)显著高于存活组(中位数372.0 pg/ml)。NT-proBNP和APACHEⅡ评分预测ICU病死率的受试者工作曲线下面积分别为0.707(95%置信区间[0.552,0.862])和0.841(95%置信区间[0.712,0.961])。结论氨基末端脑利钠肽前体水平升高提示预后差,其对非HIV免疫损害患者肺炎的预后价值仍需进一步研究。

关键词：免疫损害宿主肺炎氨基末端脑利钠肽前体预后

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结缔组织病并发重症肺炎19例临床分析

解放军医学院学报 2014年第1期35卷 10-12页

作者：骆海伦李昱霖梁志欣陈良安解放军总医院呼吸科北京100853

目的探讨结缔组织病并发重症肺炎患者临床特点,为临床诊治提供参考。方法回顾性分析我院呼吸科重症监护病房2010年6月-2013年5月收治的结缔组织病并发重症肺炎患者的临床资料。结果共纳入19例患者,其中系统性红斑狼疮7例(36.8%)、类风... 详细信息

目的探讨结缔组织病并发重症肺炎患者临床特点,为临床诊治提供参考。方法回顾性分析我院呼吸科重症监护病房2010年6月-2013年5月收治的结缔组织病并发重症肺炎患者的临床资料。结果共纳入19例患者,其中系统性红斑狼疮7例(36.8%)、类风湿关节炎5例(26.3%)、多发性肌炎/皮肌炎3例(15.8%)。本次起病前应用糖皮质激素或免疫抑制剂治疗15例(78.9%)。本组患者主要临床表现为发热(16例)、呼吸困难(17例)、咳嗽(12例)。病原体包括细菌、真菌和巨细胞病毒,部分病例为混合感染。经治疗,好转9例(均未接受有创机械通气),恶化或死亡10例(无创机械通气失败或接受有创机械通气)。结论结缔组织病并发重症肺炎患者病原体包括细菌和机会感染,无创机械通气失败或需要接受有创机械通气者预后差,早期进行全面综合诊治很重要。

关键词：结缔组织病重症肺炎诊断治疗

77例肾移植术后患者并发肺部感染的临床分析

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解放军医学院学报 2014年第6期35卷 538-540页

作者：李昱霖梁志欣骆海伦陈良安解放军总医院呼吸科北京100853

目的探讨77例肾移植术后肺部感染患者的临床特点及诊治措施。方法回顾性分析1993-2013年我院呼吸科收治的77例肾移植术后肺部感染患者的临床资料。结果 77例中单一病原体感染33例(43%),两种及以上病原体感染24例(31%),不明病原体感染20... 详细信息

目的探讨77例肾移植术后肺部感染患者的临床特点及诊治措施。方法回顾性分析1993-2013年我院呼吸科收治的77例肾移植术后肺部感染患者的临床资料。结果 77例中单一病原体感染33例(43%),两种及以上病原体感染24例(31%),不明病原体感染20例(26%)。其中检出细菌30例,主要有结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌;真菌26例,主要为念珠菌、曲霉菌;病毒24例,主要为巨细胞病毒、流感病毒;卡氏肺孢子菌5例;肺炎支原体3例。治疗上主要给予吸氧、调整免疫抑制剂和糖皮质激素用量、抗感染等治疗,77例中好转65例,恶化2例,死亡10例(10/77,12.99%),死亡原因均为重症肺炎。结论肺部感染是肾移植术后的严重并发症,易导致患者死亡。

关键词：肾移植肺炎诊断治疗

血根碱通过调控Nrf2/NF-κB通路缓解小鼠溃疡性结肠炎

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南方医科大学学报 2024年第8期44卷 1467-1475页

作者：赵娜沈梦迪赵睿奥迪骆泽谭张银亮徐志东范方田郑海伦蚌埠医科大学第一附属医院消化科安徽蚌埠233004 蚌埠医科大学药学院安徽蚌埠233030 安徽省生化药物研究工程中心安徽蚌埠233030

目的探讨血根碱(SA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法随机将56只雄性C57BL/6小鼠分为空白对照组、模型组(DSS组)、SA低剂量组(DSS+SA-L,SA 1 mg/kg)、SA中剂量组(DSS+SA-M,SA 5 mg/kg)、SA高剂量组(DSS+SA-H,... 详细信息

目的探讨血根碱(SA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法随机将56只雄性C57BL/6小鼠分为空白对照组、模型组(DSS组)、SA低剂量组(DSS+SA-L,SA 1 mg/kg)、SA中剂量组(DSS+SA-M,SA 5 mg/kg)、SA高剂量组(DSS+SA-H,SA 10 mg/kg)、柳氮磺吡啶组(DSS+SASP,SASP 400 mg/kg)、SA高剂量组+Nrf2抑制剂ML385组(DSS+SA-H+ML385,SA 10 mg/kg+ML38530 mg/kg),8只/组。除空白对照组外,均采用3.5%DSS诱导建立UC模型,SA干预组和柳氮磺吡啶组给与对应药物灌胃治疗,通路抑制剂组SA 10 mg/kg灌胃同时腹腔注射ML38530 mg/kg。通过监测小鼠体质量变化、疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度测量、HE染色评估小鼠炎症;检测结肠组织中活性氧(ROS)水平;比色法检测结肠组织中丙二醛含量(MDA);RT-qPCR检测结肠组织中炎性因子;Western blotting法检测结肠组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap-1)、磷酸化p65蛋白(p-p65)、p65、紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)蛋白表达。结果与DSS组相比,SA治疗可缓解DSS组小鼠体质量下降、结肠长度缩短、DAI评分升高(P0.05),且DSS+SA-L、DSS+SA-M、DSS+SA-H组各指标变化呈剂量依赖性。Nrf2通路抑制剂ML385降低高剂量组SA对UC小鼠结肠黏膜的改善作用。结论SA可改善UC样小鼠肠炎,作用机制可能与激活Nrf2通路,抑制Nrf2介导的NF-κB通路有关。

关键词：溃疡性结肠炎血根碱 Nrf2 NF-κB

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血根碱通过调控STUB1/GPX4诱导直肠癌细胞发生铁死亡

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南方医科大学学报 2024年第8期44卷 1537-1544页

作者：张银亮骆泽谭赵睿赵娜徐志东奥迪丛古一刘新宇郑海伦蚌埠医科大学第一附属医院消化科安徽蚌埠233000

目的探究血根碱(SAN)对结直肠癌细胞增殖及铁死亡的影响。方法SW620和HCT-116细胞体外培养,在SW620细胞加入浓度分别为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3μmol/L的SAN,HCT-116细胞加入0、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2μmol/L的SAN。采用C... 详细信息

目的探究血根碱(SAN)对结直肠癌细胞增殖及铁死亡的影响。方法SW620和HCT-116细胞体外培养,在SW620细胞加入浓度分别为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3μmol/L的SAN,HCT-116细胞加入0、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2μmol/L的SAN。采用CCK8法检测检测细胞活力,并计算出IC50;检测SAN对细胞的增殖抑制作用采用集落克隆实验;Transwell实验观测SAN对细胞侵袭迁移力的影响;ROS检测试剂盒通过流式细胞仪分析细胞ROS含量的变化;丙二醛(MDA)检测盒来检测脂质过氧化物的产生。氧化型谷胱甘肽/还原型谷胱甘肽定量试剂盒测定谷胱甘肽(GSH)水平。Western blotting法检测铁死亡相关蛋白(STUB1、GPX4)的表达。结果CCK8、集落克隆的结果显示,SAN可显著抑制SW620和HCT-116细胞增殖(P<0.05);Transwell实验结果显示,SAN可抑制SW620和HCT-116细胞侵袭迁移能力(P<0.05);流式细胞术检测显示:SAN显著促进SW620和HCT-116细胞内ROS的产生(P<0.05);MDA检测结果显示,SAN可使SW620和HCT-116细胞内MDA含量增加(P<0.05);GSH检测结果显示,SAN使SW620和HCT-116细胞内GSH下降(P<0.05);Western blotting结果显示,SAN可通过调控STUB1下游蛋白GPX4的下调(P<0.05)。结论SAN可通过调节STUB1/GPX4诱导结直肠癌细胞发生依赖性铁死亡,提供了新治疗结直肠癌的靶点以及实验依据。

关键词：血根碱结直肠癌铁死亡 STUB1 GPX4

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替加环素不良反应回顾性分析

中国药物应用与监测 2014年第2期11卷 111-114页

作者：李昱霖梁志欣王彬朱曼骆海伦陈良安佘丹阳解放军总医院呼吸科北京100853 解放军总医院胸外科北京100853 解放军总医院药品保障中心北京100853

目的:提高对替加环素不良反应的认识,为临床合理用药提供参考。方法:通过检索文献,对替加环素不良反应病例中患者一般情况、原患疾病、不良反应类型、不良反应发生时间、治疗方法及转归等进行分析,同时报道1例使用替加环素后引起低血糖... 详细信息

目的:提高对替加环素不良反应的认识,为临床合理用药提供参考。方法:通过检索文献,对替加环素不良反应病例中患者一般情况、原患疾病、不良反应类型、不良反应发生时间、治疗方法及转归等进行分析,同时报道1例使用替加环素后引起低血糖反应患者的诊疗过程,并结合文献进行分析。结果:共检索出10例替加环素不良反应的个案报道,其中胰腺炎8例,腹泻1例,凝血功能异常1例。本文报道的1例78岁男性患者诊断为重症肺炎、慢性阻塞性肺疾病、肺间质纤维化,机械通气过程中,痰培养多次为多重耐药鲍曼不动杆菌,在使用替加环素静脉滴注后出现顽固性低血糖。结论:应用替加环素时,应高度警惕其不良反应的发生,确保安全用药。

关键词：替加环素药品不良反应低血糖

基于机器视觉的铝包钢母线表面缺陷检测系统的研发和应用

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上海金属 2024年第1期46卷 89-94页

作者：缪旭光王文辉赵海伦李发才刘传徐昊骆德国中天电力光缆有限公司江苏南通226463 江苏中天科技股份有限公司江苏南通226463 上海工业自动化仪表研究院有限公司上海200233

在线缆生产中,铝包钢母线常出现露钢、包覆不圆、包覆外径波动大、氧化铝毛刺等缺陷,目前通常采用目测、触检、标记等方法检测这些缺陷,但准确度低。为此开发了基于机器视觉的铝包钢母线表面缺陷检测系统。该系统由机械传动、电气控制... 详细信息

在线缆生产中,铝包钢母线常出现露钢、包覆不圆、包覆外径波动大、氧化铝毛刺等缺陷,目前通常采用目测、触检、标记等方法检测这些缺陷,但准确度低。为此开发了基于机器视觉的铝包钢母线表面缺陷检测系统。该系统由机械传动、电气控制、图像智能采集、标识及外观缺陷软件算法组成。为实现铝包钢母线的无死角测量,以铝包钢线缆为圆心,将3台相机沿距圆心一定半径的圆周均匀布置;为解决因铝包钢表面缺陷多、难以检测和统一管理的难题,将母线缺陷分为边缘和非边缘缺陷;通过先确定母线上下边界区域,再采取四步图像测量来确保母线区域提取的完整性。该检测系统的在线检测准确率高达95%。

关键词：铝包钢机器视觉表面缺陷在线检测