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CBS1/2功能分析及互作蛋白筛选

CBS1/2功能分析及互作蛋白筛选

作者：马稳霞兰州大学

学位级别：硕士

被子植物雄配子体发育过程中有大量的基因参与调控小孢子不对称有丝分裂、生殖细胞形成、生殖细胞分裂与分化形成精细胞等过程,但是目前对生殖细胞以及精细胞中基因的表达调控仍然知之甚少。已知精细胞LGC1(LILY GENERATIVE CELL-SPECIF... 详细信息

被子植物雄配子体发育过程中有大量的基因参与调控小孢子不对称有丝分裂、生殖细胞形成、生殖细胞分裂与分化形成精细胞等过程,但是目前对生殖细胞以及精细胞中基因的表达调控仍然知之甚少。已知精细胞LGC1(LILY GENERATIVE CELL-SPECIFIC 1)的表达受到性细胞限制沉默因子(Germline Restrictive Silencer Factor,GRSF)的抑制调控;DUO1在精细胞中的表达并不是通过GRSF抑制来调控的,而是通过启动子上的正向激活元件来实现的;白花丹(Plumbago zeylanica)异戊烯基转移酶基因(PzIPT1)启动子上含有顺式调控元件Male Gamete Selective Activation(MGSA)位点,来调控基因在精细胞的特异表达。更多精细胞基因表达的调控机制仍需要进一步探究。实验室前期工作已经通过酵母单杂交筛选了拟南芥(Arabidopsis thaliana)成熟花粉(包括精细胞)中MGSA的互作蛋白CBS(cis-regulatory element-binding protein in sperm cells)。在本研究中,为了探究筛选到的CBS1和CBS2的生物学功能,我们克隆了它们的启动子序列,构建了pCBS1::GFP、p CBS1::GUS、pCBS2::GFP和pCBS2::GUS转基因材料,观察发现CBS1和CBS2在拟南芥成熟花粉的精细胞中而不在营养细胞中表达。CBS1、CBS2及其同源基因的T-DNA单缺突变体cbs1、cbs1ls、cbs2、cbs2ls以及构建得到的双突变体的小苗营养生长、花序发育以及花粉活性都没有明显的缺陷,但DAPI染色发现花粉中存在少量细胞核紊乱的表型。由于很可能存在同源基因的功能冗余,将继续构建多重缺失突变体研究其生物学功能。进一步利用酵母双杂交筛选了CBS1和CBS2的互作蛋白,鉴定到80个与CBS1互作的蛋白,挑选其中18个蛋白进行互作验证,确定10个蛋白与CBS1有相互作用;鉴定到147个与CBS2互作的蛋白,挑取其中的20个蛋白进行互作验证,其中16个与CBS2有相互作用。将对筛选到的互作蛋白进行组织定位、亚细胞定位和蛋白功能等分析研究,为进一步揭示精细胞基因调控的机制提供基础。另外,以PzIPT1的两段启动子序列构建了拟南芥转基因材料△761-HYG-GFP和△130-HYG-GFP,筛选鉴定到单插入纯合的转基因材料。以这些材料作为遗传背景,用激活标签法构建突变体库,观察T代转基因植株花粉中精细胞的荧光信号,在△761-HYG-GFP背景下筛选精细胞荧光信号减弱的株系,以及在△130-HYG-GFP背景下荧光信号增强的株系,分离鉴定更多参与调控精细胞基因表达的调节因子。

关键词：精细胞基因表达调控酵母双杂交激活标签法

黄花蒿精油及其活性成分1,8-cineole对兰州百合采后病害的体外防治

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南京农业大学学报 2021年第3期44卷 447-456页

作者：马稳霞冯升来涂艺馨令利军西北师范大学生命科学学院/甘肃特色植物生物活性产品工程研究中心甘肃兰州730070

[目的]利用黄花蒿精油及其活性成分1,8-cineole对兰州百合采后病害致病菌进行体外防治,为兰州百合采后病害的生物防治提供理论基础。[方法]采用组织分离法及柯赫氏回接法分离兰州百合采后病害致病菌并确定致病性,结合形态学、分子生物... 详细信息

[目的]利用黄花蒿精油及其活性成分1,8-cineole对兰州百合采后病害致病菌进行体外防治,为兰州百合采后病害的生物防治提供理论基础。[方法]采用组织分离法及柯赫氏回接法分离兰州百合采后病害致病菌并确定致病性,结合形态学、分子生物学进行鉴定确定其分类地位,并通过熏蒸法和直接接触法检测黄花蒿精油及其活性成分1,8-cineole的体外抑菌活性。[结果]致伤情况下引起兰州百合采后病害的病原菌包括1株细菌[摩加夫芽胞杆菌(Bacillus mojavensis)B-6]和3株丝状真菌[李氏木霉(Trichoderma lixii)F-2、篮状菌(Talaromyces tumuli)F-3和镰刀菌(Fusarium annulatum)F-6];无致伤情况下,菌株B-6对兰州百合无侵染现象,菌株F-2、F-3及F-6侵染速度相比致伤较慢。熏蒸法结果显示:黄花蒿精油及1,8-cineole的浓度达到0.7 mL·L^(-1)时,对B-6的杀菌率达到100%,对病原真菌的EC50范围分别为0.314~0.357 mL·L^(-1)和0.280~0.420 mL·L^(-1)。直接接触法结果显示:黄花蒿精油及1,8-cineole对B-6的最低杀菌浓度分别为1.25和5 mL·L^(-1),黄花蒿精油对F-2、F-3及F-6的杀菌浓度分别为10、40和40 mL·L^(-1),1,8-cineole对F-2、F-3及F-6的杀菌浓度均为20 mL·L^(-1)。[结论]从腐烂的兰州百合中分离得到的4株致病菌均能不同程度地引起兰州百合采后病害,且致伤能够促进病原菌F-2、F-3及F-6对兰州百合的侵染速度;黄花蒿精油及其主要活性成分1,8-cineole均对兰州百合采后病害致病菌具有良好的抑菌活性,熏蒸法更具优势。

关键词：兰州百合致病菌鉴定精油 1,8-cineole 抗菌活性

猪毛蒿精油及其活性成分萜品-4-醇对黄曲霉的抑制作用研究

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中国生物防治学报 2021年第3期37卷 584-591页

作者：令利军赵云花马稳霞冯升来杨彩云涂艺馨张继西北师范大学生命科学学院兰州730070

为了探究猪毛蒿Artemisiascoparia精油及其活性成分萜品-4-醇对黄曲霉Aspergillusflavus的抗菌活性及其在花生贮藏保鲜中的应用前景,通过气相色谱-质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)技术对猪毛蒿精油进行成分分析;... 详细信息

为了探究猪毛蒿Artemisiascoparia精油及其活性成分萜品-4-醇对黄曲霉Aspergillusflavus的抗菌活性及其在花生贮藏保鲜中的应用前景,通过气相色谱-质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)技术对猪毛蒿精油进行成分分析;采取熏蒸法检测猪毛蒿精油及萜品-4-醇对黄曲霉菌丝生长,孢子萌发和花生体内霉菌数的影响;通过扫描电镜观察猪毛蒿精油和萜品-4-醇对黄曲霉显微结构的影响。结果显示猪毛蒿精油由24种化合物组成,其主要成分为桉叶油醇(43.8%),萜品-4-醇在猪毛蒿精油中的含量为2.81%;猪毛蒿精油和萜品-4-醇可显著抑制黄曲霉菌丝的生长,并导致菌丝皱缩、扭曲和凹陷;体内抑菌试验发现,猪毛蒿精油和萜品-4-醇能显著降低花生体内霉菌数。

关键词：猪毛蒿精油成分分析萜品-4-醇黄曲霉抑菌活性

丝裂亚菊精油抗氧化、抑菌活性及抑菌机理初步研究

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兰州大学学报（自然科学版） 2021年第1期57卷 137-142页

作者：令利军马稳霞赵云花焦正龙李子彬梁俊玉张继西北师范大学生命科学学院兰州730070 西北师范大学甘肃特色植物生物活性产品工程研究中心兰州730070

对丝裂亚菊精油进行成分分析,测定抗氧化活性和抑菌活性并初步研究其抑菌机理.蒸馏法提取丝裂亚菊精油并对其成分进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析;滤纸片法定性测定其抑菌活性,倍比稀释法定量测定最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;1, 1-二苯基... 详细信息

对丝裂亚菊精油进行成分分析,测定抗氧化活性和抑菌活性并初步研究其抑菌机理.蒸馏法提取丝裂亚菊精油并对其成分进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析;滤纸片法定性测定其抑菌活性,倍比稀释法定量测定最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼测定抗氧化能力;扫描电镜观察精油对测试菌种细胞壁膜的影响. GC-MS分析结果显示,丝裂亚菊精油中含有17种化合物,占精油总含量的97.37%,主要成分为β-蒎烯(34.72%)、(1, 8-)桉树脑(24.97%)和马鞭草烯醇(20.39%);抑菌试验发现丝裂亚菊精油对供试菌种均具有较强的拮抗作用,且供试菌种的最低抑菌浓度在2.5~80μL/mL内,最低杀菌浓度在10~80μL/mL内;扫描电镜结果显示植物精油破坏了细菌的壁膜,且浓度越大,对细胞壁膜的损伤程度越大.丝裂亚菊精油对破伤风杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞杆菌有很强的抑制性,其抗菌机理为丝裂亚菊精油对细菌细胞的壁膜造成了不可逆转的破坏.

关键词：丝裂亚菊精油成分分析抑菌活性抗氧化活性抑菌机理

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茵陈蒿精油化学成分及抑菌活性研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2021年第6期49卷 114-121页

作者：冯升来马稳霞赵云花涂艺馨杨彩云令利军王楠陈学林西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070

【目的】研究茵陈蒿精油的化学成分、抗氧化能力、抑菌活性和抑菌机理,为蒿属植物精油开发应用提供理论依据。【方法】以采集的茵陈蒿植株为材料,采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)对其化学成分进行分析;利用1,1-二苯基-2-二硝基苯肼(DPPH... 详细信息

【目的】研究茵陈蒿精油的化学成分、抗氧化能力、抑菌活性和抑菌机理,为蒿属植物精油开发应用提供理论依据。【方法】以采集的茵陈蒿植株为材料,采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)对其化学成分进行分析;利用1,1-二苯基-2-二硝基苯肼(DPPH)测定茵陈蒿精油的抗氧化能力;采用琼脂扩散法测定茵陈蒿精油对大肠杆菌、破伤风杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和荧光假单胞杆菌6种病原细菌和白色念珠菌、黄瓜灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒炭疽病菌、小麦赤霉病菌、马铃薯立枯丝核菌7种病原真菌的抑菌活性;采用倍比稀释法测定茵陈蒿精油对白色念珠菌及6种供试病原细菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)值;采用菌丝生长速率法测定茵陈蒿精油对其他6种真菌的抑制率,并建立毒力回归方程;采用扫描电镜观察茵陈蒿精油对枯草芽孢杆菌和白色念珠菌细胞壁的影响。【结果】GC-MS分析结果显示,茵陈蒿精油共分离出24种化合物,主要成分为蒿酮(37.59%)、乙酸丁酯(22.75%)和桉叶油醇(11.34%)。茵陈蒿精油对DPPH自由基具有良好的清除能力。抑菌活性结果显示,茵陈蒿精油对供试菌株均有较强的抑制作用,供试菌种的MIC值为2.5~80μL/mL,MBC值为5~150μL/mL;茵陈蒿精油对病原真菌均有较强的毒力效果,EC50为3.371~10.942μL/mL。扫描电镜结果显示,茵陈蒿精油破坏了菌株的细胞壁,使菌体内容物渗出,导致菌体形态发生改变。【结论】茵陈蒿精油化学成分丰富,具有良好的抗氧化能力和抑菌能力,在农作物病害防治及食品保鲜方面有较高的应用价值。

关键词：茵陈蒿精油抑菌活性抗氧化活性

黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对兰州百合采后病害的防治效果

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第8期50卷 77-87页

作者：令利军程文婷蒋坤玲王圆圆罗鸿杨彩云庞明梅马稳霞西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070

【目的】利用黄花蒿精油及其单体桉叶油醇(1,8-cineole)对兰州百合采后病害进行防治,为延长兰州百合贮存期提供参考。【方法】以新鲜兰州百合、黄花蒿精油及其单体桉叶油醇为材料,以病原细菌摩加夫芽孢杆菌(B-6)和病原真菌李氏木霉(F-2... 详细信息

【目的】利用黄花蒿精油及其单体桉叶油醇(1,8-cineole)对兰州百合采后病害进行防治,为延长兰州百合贮存期提供参考。【方法】以新鲜兰州百合、黄花蒿精油及其单体桉叶油醇为材料,以病原细菌摩加夫芽孢杆菌(B-6)和病原真菌李氏木霉(F-2)、篮状菌(F-3)和镰刀菌(F-6)为靶标菌,采用倍比稀释法测定黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对兰州百合病原细菌B-6的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;采用熏蒸法测定黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对3种病原真菌的抑制率,并建立毒力回归方程;采用扫描电镜观察黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对病原菌细胞壁的影响;分别用黄花蒿精油及其单体桉叶油醇处理含有病原细菌悬浮液和病原真菌孢子悬浮液的兰州百合,筛选最佳的防治浓度;测定兰州百合自由基清除率,褐变度,总酚、类黄酮、可溶性总糖和丙二醛含量及保护酶活性。【结果】抑菌结果显示,黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对兰州百合病原细菌B-6具有较强的抑制作用,其对病原细菌B-6的MIC值均为1.25 mL/L,MBC值分别为1.25和5.00 mL/L;黄花蒿精油及其单体桉叶油醇对兰州百合病原真菌均有较强的毒力作用,黄花蒿精油和桉叶油醇对F-2、F-3、F-6的EC_(50)分别为0.314,0.336,0.357 mL/L和0.280,0.289,0.420 mL/L。扫描电镜结果显示,对照组病原细菌细胞菌体完整,而黄花蒿精油及其单体桉叶油醇处理细菌单个菌体不完整,大量菌体堆积,内容物渗出;对照组病原真菌菌丝为均匀而规则的管状,而黄花蒿精油及其单体桉叶油醇处理菌丝表面出现大量褶皱、断裂及扭曲。黄花蒿精油和桉叶油醇对接种病原菌后的兰州百合最佳防治浓度均为15.38μL/L。生理生化指标测定结果显示,黄花蒿精油及其单体桉叶油醇均能抑制兰州百合自身抗氧化活性的下降,降低兰州百合的褐变率,减少MDA积累,增加SOD活性,抑制POD和PPO活性。【结论】黄花蒿精油及其单体桉叶油醇具有良好的抑菌能力和抗氧化活性,对兰州百合的最佳防治浓度均为15.38μL/L。

关键词：黄花蒿精油桉叶油醇(1,8-cineole) 兰州百合病害防治采后病害百合保鲜

地衣芽孢杆菌TG116胞外蛋白酶产酶条件与酶学性质

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微生物学通报 2019年第10期46卷 2559-2568页

作者：令利军焦正龙王军英马稳霞李子彬赵云花张玺冯娟娟西北师范大学生命科学学院

【背景】从独角莲中分离得到的地衣芽孢杆菌TG116是一株对植物病原菌具有广谱抗性作用的生防菌株。【目的】优化TG116的产酶条件并探索其酶学性质,进一步了解其抗菌机制。【方法】采用Folin-Phenol显色法与响应曲面法,优化菌株TG116的... 详细信息

【背景】从独角莲中分离得到的地衣芽孢杆菌TG116是一株对植物病原菌具有广谱抗性作用的生防菌株。【目的】优化TG116的产酶条件并探索其酶学性质,进一步了解其抗菌机制。【方法】采用Folin-Phenol显色法与响应曲面法,优化菌株TG116的产酶条件并研究其蛋白酶的酶学性质。【结果】菌株TG116产酶最适条件为:温度40.83°C,p H 8.01,发酵时间53.74 h,增加通气量可以显著提高酶活力。按照优化后的条件培养48 h后,上清液蛋白酶活力从57.46 U/mL达到了254.07 U/mL。酶学性质研究表明:该酶为碱性蛋白酶,最适反应pH为8.5,最适反应温度为50°C,具有良好的温度和pH稳定性,EDTA对酶活具有强烈的抑制作用,金属离子Mg2+、Ca2+、Na+、Co2+、K+等对酶活也具有一定的抑制作用。【结论】菌株TG116具有良好的p H与温度稳定性,在实际应用中蛋白酶不易失活,可以分解真菌的细胞壁蛋白成分,破坏细胞壁结构,从而抑制甚至杀死病原菌,达到抗菌作用。

关键词：碱性蛋白酶产酶条件酶学性质

逐向导航辅助对大尺度环境下空间记忆的影响及改进方法

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心理科学进展 2025年第1期33卷 77-91页

作者：张艳霞李晶南京师范大学心理学院南京210097

科技的迅速发展使得人的行为越来越“自动化”,借助逐向导航人们可以按照正确路线快速到达目的地,然而如此高效率的寻路方式带来的可能是空间记忆的削弱。众多研究结果显示逐向导航辅助不利于空间知识的获取,研究者们开始改进逐向导航... 详细信息

科技的迅速发展使得人的行为越来越“自动化”,借助逐向导航人们可以按照正确路线快速到达目的地,然而如此高效率的寻路方式带来的可能是空间记忆的削弱。众多研究结果显示逐向导航辅助不利于空间知识的获取,研究者们开始改进逐向导航或设计新的导航系统。在此基础上本文提出了逐向导航辅助对空间记忆的影响模型,针对如何改进逐向导航提出相关建议。未来研究应改进大尺度环境下空间知识的测量方法,探究逐向导航辅助削弱空间记忆的神经机制,关注个体因素的影响以构建一个更全面的解释机制,开发兼具寻路效率和空间知识获取的新导航系统。

关键词：逐向导航导航辅助空间记忆

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论《在旷野里》的人物塑造与情感表达方式

黄冈师范学院学报 2025年第1期45卷 19-25页

作者：王霄霞中国社会科学院大学文学院北京房山102488

柳青的佚作《在旷野里》绘制了一幅层次分明的人物群像图。不论是正面人物,还是反面人物,抑或次要人物,柳青都写出他们的真实感觉,同时表达他对人情与人性的独到思考。柳青主要运用对话描写和心理描写等技巧塑造真实立体的人物,通过修... 详细信息

柳青的佚作《在旷野里》绘制了一幅层次分明的人物群像图。不论是正面人物,还是反面人物,抑或次要人物,柳青都写出他们的真实感觉,同时表达他对人情与人性的独到思考。柳青主要运用对话描写和心理描写等技巧塑造真实立体的人物,通过修辞性和介入性的方式来塑造一个心系国家与人民未来的作家形象。这不仅反映了柳青成熟的艺术表现力,而且从根本上体现了他勇于批判现实的能力与自觉承担作家责任的意识。

关键词：柳青《在旷野里》人物塑造作家形象