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冰冻人血清尿素和肌酐国家二级标准物质的研制

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中华检验医学杂志 2023年第8期46卷 845-852页

作者：张鹏伟王建兵韩丽乔林海标展敏张乔轩严君庄俊华黄宪章广州中医药大学第二附属医院检验医学部广州510120

目的联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质,作为量值溯源的载体。方法参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求... 详细信息

目的联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质,作为量值溯源的载体。方法参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求对候选物质进行均匀性、稳定性、互换性评价;联合广东省中医院、北京航天总医院、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、迈克生物股份有限公司、北京利德曼生化股份有限公司、浙江美康生物科技股份有限公司的6家参考实验室采用国际检验医学溯源联合委员会推荐的同位素稀释液相色谱串联质谱法及酶学参考方法共同对标准物质进行定值,计算不确定度。结果所研制标准物质均匀性的方差分析结果为P>0.05,稳定性评价t值小于t(0.05)查表时的t值,互换性评价结果位于4个常规检测系统测量值95%置信区间内,最终定值结果为尿素:14.7 mmol/L,扩展不确定度0.3 mmol/L(k=2),肌酐:313.9μmol/L,扩展不确定度14.5μmol/L(k=2)。结论成功研制的冰冻人血清尿素、肌酐二级标准物质标示值可靠,均匀性、稳定性较好,不同检测系统间具有良好互换性。

关键词：尿素肌酐同位素稀释液相色谱串联质谱标准物质均匀性稳定性互换性

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α-淀粉酶参考方法的建立及其性能评价

实用医学杂志 2012年第5期28卷 819-821页

作者：王建兵韩丽乔黄宪章郑松柏徐宁庄俊华广东省中医院检验科广州市510120

目的:建立检测血清α-淀粉酶的参考方法,并对其主要性能进行评价。方法:按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的α-淀粉酶活性测定的参考测量程序建立本实验室的参考方法;根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)系列文件(EP5-A2、EP... 详细信息

目的:建立检测血清α-淀粉酶的参考方法,并对其主要性能进行评价。方法:按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的α-淀粉酶活性测定的参考测量程序建立本实验室的参考方法;根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)系列文件(EP5-A2、EP15-A2、EP6-A)对参考方法的精密度、准确度、线性范围等性能进行评价。结果:建立的α-淀粉酶参考方法的精密度评价A、B2个水平样本变异系数均<1.0%。有证参考物质(IRMM/IFCC-456)均值为546.4U/L,均值与靶值的偏移为0.09%,在允许范围内。α-淀粉酶的最大线性范围为1412.5U/L,高于IFCC公布的最大线性范围(719.8U/L)。结论:α-淀粉酶参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求,为我国参考实验室网络的建立以及临床应用提供了基础和参考。

关键词： α淀粉酶参考方法性能评价溯源性

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单纯形法在腺苷脱氨酶反应条件优化中的运用

实用预防医学 2012年第3期19卷 333-336页

作者：郑松柏韩丽乔庄俊华王建兵马艳黄宪章广东省中医院检验医学部广东广州510120

目的探讨单纯形优化方法在腺苷脱氨酶最佳反应条件选择中的作用。方法运用单纯形优化法对腺苷脱氨酶最佳反应条件进行筛选,参考相关文献确定初始单纯形,根据各种组合条件下得到的测定结果进行单纯形的移动与终止,从而得到最佳反应条件... 详细信息

目的探讨单纯形优化方法在腺苷脱氨酶最佳反应条件选择中的作用。方法运用单纯形优化法对腺苷脱氨酶最佳反应条件进行筛选,参考相关文献确定初始单纯形,根据各种组合条件下得到的测定结果进行单纯形的移动与终止,从而得到最佳反应条件。结果 8种影响因素组成的单纯形进行了24次移动得到33种反应条件的组合。腺苷脱氨酶样本在第28种组合条件下得到的测定结果最高,该反应条件即为最优条件,该条件下测定活性比目前推荐的测定方法提高近1倍。结论单纯形法是寻找临床酶学测定最优反应条件的一种简单有效的方法。

关键词：单纯形法腺苷脱氨酶多因素最优化

不同厂家腺苷脱氨酶测定结果的可比性调查与结果一致化

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中华检验医学杂志 2014年第6期37卷 439-443页

作者：郑松柏何丽萍韩丽乔王建兵林海标庄俊华徐建华黄宪章广州中医药大学第二附属医院检验医学部 510120 广东省计划生育专科医院检验科

目的：调查国内不同厂家腺苷脱氨酶（ ADA）试剂的基本性能及结果可比性情况，探讨实现其结果一致化的途径，为ADA标准化工作提供参考。方法评价国内10个厂家ADA试剂在迈瑞BS-800全自动生化分析仪上的空白检测限、不精密度、线性范围、... 详细信息

目的：调查国内不同厂家腺苷脱氨酶（ ADA）试剂的基本性能及结果可比性情况，探讨实现其结果一致化的途径，为ADA标准化工作提供参考。方法评价国内10个厂家ADA试剂在迈瑞BS-800全自动生化分析仪上的空白检测限、不精密度、线性范围、参考区间等性能；使用参比系统对新鲜血清校准品进行赋值，比较其校准各检测系统前后的偏差；从8种厂家校准品中筛选基质效应最小的校准品作为长期校准品，经比对实验调整靶值后实现各检测系统ADA检测结果的一致化。结果10个检测系统的空白检测限为0.1～6.3 U/L，各检测系统的批内不精密度和室内不精密度均小于5％，实测线性范围除系统9外均超过厂家说明的线性范围；新鲜血清校准后各检测系统平均相对偏差从14.0％下降至3.0％。长期校准品校准后各检测系统间平均相对偏差为1.8％。各检测系统统一参考区间为5～24 U/L。结论10个检测系统基本性能良好，但各系统间可比性差；新鲜血清和互通性好的校准品可实现ADA各检测系统结果的一致化，提示了ADA标准化工作的必要性和可行性。（中华检验医学杂志，2014，37：439-443）

关键词：腺苷脱氨酶可重复性,结果参考值

pET32a-AKT1重组质粒的构建与表达

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国际检验医学杂志 2014年第9期35卷 1092-1094页

作者：张战锋韩丽乔庄俊华黄宪章广州中医药大学第二附属医院检验科广东广州510120

目的构建重组质粒pET32a-AKT1,利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增AKT1编码区基因,并将其与pET32a质粒融合,并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,采... 详细信息

目的构建重组质粒pET32a-AKT1,利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增AKT1编码区基因,并将其与pET32a质粒融合,并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot进行蛋白鉴定。结果目的基因与质粒完整融合;重组质粒pET32a-AKT1成功转入菌株DE3;IPTG诱导后,DE3表达相对分子质量为70 000的蛋白。结论成功构建重组质粒pET32a-AKT1,且AKT1蛋白在原核表达菌DE3中完整、高效表达。

关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶质粒大肠埃希菌

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探讨酶学参考方法在室间质评中的应用

重庆医学 2014年第6期43卷 692-695页

作者：李云黄宪章郑松柏韩丽乔曹永坚徐建华林莉李有强庄俊华王建兵广州中医药大学第二临床医学院检验科广州510120

目的探讨酶学参考方法应用于卫生部临床检验中心常规化学室间质评中的可行性。方法选取5个临床常规检测系统和参考方法同时检测临床检验中心2012年第1次室间质评样本和患者血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸... 详细信息

目的探讨酶学参考方法应用于卫生部临床检验中心常规化学室间质评中的可行性。方法选取5个临床常规检测系统和参考方法同时检测临床检验中心2012年第1次室间质评样本和患者血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、α-淀粉酶(AMY),将各临床常规系统检测结果与参考方法测量结果或临床检验中心靶值进行比较,计算相对偏倚。以临床检验中心室间质评允许误差的要求为标准,判断各系统各项目是否合格。结果参考方法测量质评样本结果与临床检验中心靶值的相对偏倚在±10%以内。用临床检验中心的允许总误差作为判断标准,以参考方法检测结果为参比,湿化学系统室间质评样本和患者血清合格率为100.0%;干化学系统室间质评样本和患者血清合格率分别为77.1%和97.1%。用临床检验中心酶学正确度验证的标准评价室间质评样本测量结果,以参考方法检测结果为参比,湿化学系统所有测量结果合格率分别为72.9%和63.6%。结论参考方法可以应用于室间质评,对解决临床检验结果的正确性提供了重要依据。

关键词：酶参考方法室间质评检测系统结果互认

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血小板计数参考方法的性能评价及临床应用

临床检验杂志 2015年第12期33卷 932-933页

作者：林海标彭桉平王建兵杨红玮韩丽乔张乔轩吴新忠柯培锋黄宪章广东省中医院检验医学部广州510120 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司标准化实验室深圳518057

目的复现血小板计数的参考方法并应用于临床。方法根据国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的流式细胞术计数血小板的参考方法,在本实验室复现该参考方法;通过2家校准实验室赋值新鲜全血,对4台不同型号血液分析仪的血小板计数结果进行正... 详细信息

目的复现血小板计数的参考方法并应用于临床。方法根据国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的流式细胞术计数血小板的参考方法,在本实验室复现该参考方法;通过2家校准实验室赋值新鲜全血,对4台不同型号血液分析仪的血小板计数结果进行正确度验证,并对结果不满意的仪器进行校准。结果血小板计数参考方法检测高、中、低值标本PLT的不精密度(CV)分别为2.2%、2.0%、8.4%,PLT在21×109/L^794×109/L范围内线性良好(r2=0.998),标本在6 h内测定结果稳定,携带污染率为0.05%,正确度偏倚小于3%。正确度验证中,Mindray BC 6800、Sysmex XE-5000i和Sysmex XT 1800i血液分析仪细胞检测结果均在可接受限内,Sysmex XS 500i血液分析仪经校准后通过验证。结论复现了ICSH推荐的血小板计数参考方法,其性能符合要求;赋值新鲜全血用于临床血液分析仪的正确度验证具有可行性,且可用于仪器的校准。

关键词：血小板计数参考方法正确度校准

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影响α-淀粉酶参考方法准确测量因素的探讨

现代检验医学杂志 2013年第5期28卷 72-74页

作者：韩丽乔庄俊华郑松柏李云黄宪章王建兵广州中医药大学第二临床医学院检验科广州510120

目的通过对影响α-淀粉酶参考方法测量准确性的主要因素进行探讨,以帮助参考实验室更好地建立和运行该参考方法.方法在其他因素不变的条件下,只改变实验中的一个因素,检测2009A,2009B（指2009年RELA样本,下同）各10次,计算其与原方法... 详细信息

目的通过对影响α-淀粉酶参考方法测量准确性的主要因素进行探讨,以帮助参考实验室更好地建立和运行该参考方法.方法在其他因素不变的条件下,只改变实验中的一个因素,检测2009A,2009B（指2009年RELA样本,下同）各10次,计算其与原方法检测结果的相对偏倚及统计学意义（允许偏倚范围设定为参考方法等效限的1/4,即±1.25%）.主要探讨的影响因素有：a.反应液和样本加入步骤：a1.反应液和样本分步加入;a2.反应液和样本同时加入.b.加样方式：b1.手工加样,加样前润洗移液器,加样后不洗;b2.手工加样,加样前、后均不润洗移液器;b3.手工加样,加样前不洗,加样后回洗移液器;b4.稀释配液仪加样.c.混匀方式：c1.反应全程不搅拌;c2.搅拌至反应延迟时间（delay time）的2/3时停止;c3.反应全程搅拌.d.α-葡萄糖苷酶浓度：反应液中溶液2和α-葡萄糖苷酶（活性为1 014 ku/L）的比例为d1 100：1,d2 100：0.5,d3 100：0.8和d4 100：1.2.e.调节起始试剂pH方式：e1.静止条件下达到方法要求;e2.搅拌条件下达到方法要求.结果 ①a2,b1,c1,d4方法检测样本（2009A,2009B,下同）结果,相对偏倚为-0.44%～0.40%（t=-1.00～4.45,P值均＞0.05,差异均无统计学显著性意义）.②b2,b3和c3方法检测结果的相对偏倚为-2.14%～17.0%（t=-37.21～26.50,P值均＜0.05,差异均有统计学显著性意义）.③d2,d3方法检测两样本结果的相对偏倚为-0.47%～-0.04%（t=1.191～12.92,2009A样本结果P值均＞0.05,差异无统计学显著性意义,2009B样本结果P均＜0.05,差异有统计学显著性意义）.④e2方法检测两样本结果的相对偏倚为-0.48%和0.11%（t=2.523,1.728,2009A样本P值＜0.05,差异有统计学显著性意义,2009B样本P值＞0.05,差异无统计学显著性意义）.结论通过对实验中常见影响因素的分析,优化了方法步骤,对参考方法的建立和运用具有一定的实用价值.

关键词： α-淀粉酶参考方法影响因素

不同厂家腺苷脱氨酶测定结果的可比性调查与结果一致化

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不同厂家腺苷脱氨酶测定结果的可比性调查与结果一致化