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血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱候选参考方法的性能评价及临床应用

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中华检验医学杂志 2022年第5期45卷 456-462页

作者：欧阳芬张乔轩严君韩丽乔王建兵柯培锋庄俊华黄宪章广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)检验医学部广州510120

目的建立本实验室血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)候选参考方法,并将其用于5种临床常规检测系统的性能评价,探讨不同检测系统检测血清孕酮的可比性。方法采用液液萃取的方法进行样本前处理,在正离子质谱模式下的反相... 详细信息

目的建立本实验室血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)候选参考方法,并将其用于5种临床常规检测系统的性能评价,探讨不同检测系统检测血清孕酮的可比性。方法采用液液萃取的方法进行样本前处理,在正离子质谱模式下的反相液相分离检测人血清中孕酮,通过梯度洗脱,使单个样本检测时间控制在5 min内。为提高方法准确度,使用包括法建立标准曲线,根据美国临床和实验室标准化协会C62-A、EP15-A2、EP6-A2和EP9-A3等文件分别评价包括法和经典校准曲线法检测的灵敏度、正确度、精密度和特异度等性能,并评价5个血清孕酮临床常规检测系统的检测性能,与ID-LC-MS/MS法比较,评估其在医学决定水平2和25 ng/ml处的偏倚是否均<1/2允许总误差(TEa,12.5%)。结果本实验室血清孕酮ID-LC-MS/MS候选参考方法检测限为0.005 ng/ml,包括法和经典校准曲线法回收实验的回收率分别为97.95%~101.58%和96.88%~110.70%,包括法对认证标准物质的测量结果在其声明的不确定度范围内;包括法批内、批间变异系数(CV)均<3.0%,优于经典校准曲线法(2.48%~9.33%)。5种临床常规检测系统的精密度和线性范围均能达到要求;检测系统1、3和5在2和25 ng/ml处2个医学决定水平的测量结果偏倚不满足均<1/2TEa,检测系统2和4在2个医学决定水平的测量结果偏倚均<1/2TEa。结论本室建立的血清孕酮ID-LC-MS/MS候选参考方法分析性能符合要求,包括法较经典校准曲线法具有更好的检测性能;5种临床常规检测系统的精密度、线性评估良好,仅2个检测系统在2个医学决定水平的正确度评价能满足临床需求。

关键词：孕酮液相色谱串联质谱参考方法性能评价

雷公藤内酯醇衍生物对肝癌细胞增殖、凋亡的作用研究

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中药新药与临床药理 2022年第1期33卷 14-19页

作者：王意韩丽乔杨祎琦王凯张露王晓婉刘博黄宪章广州中医药大学第二附属医院广东广州510120 广州市中药活性成分手性研究重点实验室广东广州510006 粤港澳中医药与免疫疾病研究联合实验室广东广州510006

目的研究新型雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)衍生物对正常肝细胞的毒性以及对肝癌细胞的增殖、凋亡作用。方法通过对TPL进行化学修饰,获得2种新型衍生物:雷公藤内酯三醇(TP-3-OH)和丙烯酸雷公藤甲素酯(TPO)。通过体外培养人胚胎肝细胞LO... 详细信息

目的研究新型雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)衍生物对正常肝细胞的毒性以及对肝癌细胞的增殖、凋亡作用。方法通过对TPL进行化学修饰,获得2种新型衍生物:雷公藤内酯三醇(TP-3-OH)和丙烯酸雷公藤甲素酯(TPO)。通过体外培养人胚胎肝细胞LO2和肝癌细胞Hep G2、Hep3B、SMMC-7721,分为DMSO对照组,TPL/TP-3-OH/TPO低、中、高浓度组(25、50、100 nmol·L^(-1))。通过检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活性来评价TP-3-OH、TPO对肝细胞的毒性;采用MTT实验检测细胞增殖情况;采用流式细胞术及Western Blot法检测细胞凋亡及凋亡通路相关蛋白表达情况;采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果与TPL组比较,50、100 nmol·L^(-1)浓度条件下TP-3-OH、TPO组的LO2细胞培养上清中的LDH活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。与DMSO对照组比较,TPO中、高浓度(50、100 nmol·L^(-1))组的LO2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05,P<0.01),TPO低、中、高浓度(25、50、100 nmol·L^(-1))组的Hep G2、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.05,P<0.01);TPO高浓度(100 nmol·L^(-1))组的LO2、Hep G2和SMMC-7721细胞的早期、晚期细胞凋亡率均明显升高(P<0.05,P<0.01);TPO中、高浓度(50、100 nmol·L^(-1))组SMMC-7721、Hep G2细胞的cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达显著上调(P<0.01);TPO中浓度(50 nmol·L^(-1))组SMMC-7721细胞的24 h迁移率明显降低(P<0.05)。结论经化学修饰获得的2种新型TPL衍生物对肝细胞的毒性降低,其中TPO具有抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。

关键词：雷公藤内酯醇衍生物雷公藤内酯三醇丙烯酸雷公藤甲素酯肝癌凋亡迁移

冰冻人血清尿素和肌酐国家二级标准物质的研制

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中华检验医学杂志 2023年第8期46卷 845-852页

作者：张鹏伟王建兵韩丽乔林海标展敏张乔轩严君庄俊华黄宪章广州中医药大学第二附属医院检验医学部广州510120

目的联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质,作为量值溯源的载体。方法参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求... 详细信息

目的联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质,作为量值溯源的载体。方法参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求对候选物质进行均匀性、稳定性、互换性评价;联合广东省中医院、北京航天总医院、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、迈克生物股份有限公司、北京利德曼生化股份有限公司、浙江美康生物科技股份有限公司的6家参考实验室采用国际检验医学溯源联合委员会推荐的同位素稀释液相色谱串联质谱法及酶学参考方法共同对标准物质进行定值,计算不确定度。结果所研制标准物质均匀性的方差分析结果为P>0.05,稳定性评价t值小于t(0.05)查表时的t值,互换性评价结果位于4个常规检测系统测量值95%置信区间内,最终定值结果为尿素:14.7 mmol/L,扩展不确定度0.3 mmol/L(k=2),肌酐:313.9μmol/L,扩展不确定度14.5μmol/L(k=2)。结论成功研制的冰冻人血清尿素、肌酐二级标准物质标示值可靠,均匀性、稳定性较好,不同检测系统间具有良好互换性。

关键词：尿素肌酐同位素稀释液相色谱串联质谱标准物质均匀性稳定性互换性

液相色谱串联质谱技术定量检测的临床应用现状与挑战

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中华检验医学杂志 2020年第10期43卷 945-950页

作者：韩丽乔张乔轩黄宪章广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)检验医学部广州510120

液相色谱串联质谱技术具有高灵敏度、高特异性和高通量的特性,近年来在临床类固醇类激素、维生素、代谢小分子定量检测、药物浓度监测以及参考方法/参考物质研制等方面有快速的发展和应用,但其在临床中广泛应用仍存在一些挑战。

关键词：液相色谱串联质谱定量检测临床应用挑战

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肾功能试验项目检测标准化的现状

中华检验医学杂志 2017年第8期40卷 555-559页

作者：张乔轩韩丽乔黄宪章广东省中医院检验医学部广州510120

肾功能试验项目主要有肌酐、尿素、尿酸、胱抑素C、尿白蛋白、尿蛋白以及α1-微球蛋白、β2-微球蛋白和视黄醇结合蛋白等.实现这些肾功能试验项目结果的标准化与一致化有助于临床诊疗.因此,很多学者致力于肾功能试验标准化的研究.目前... 详细信息

肾功能试验项目主要有肌酐、尿素、尿酸、胱抑素C、尿白蛋白、尿蛋白以及α1-微球蛋白、β2-微球蛋白和视黄醇结合蛋白等.实现这些肾功能试验项目结果的标准化与一致化有助于临床诊疗.因此,很多学者致力于肾功能试验标准化的研究.目前已有一部分项目可以实现标准化,但仍有一些肾功能试验项目,由于检测的复杂性,在实现标准化的过程中仍然存在一些问题和挑战.

关键词：肾功能试验参考标准参考值

pET32a-PTEN融合质粒的构建与表达

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实用医学杂志 2014年第5期30卷 706-708页

作者：张战锋韩丽乔庄俊华黄宪章广州中医药大学第二附属医院检验科 510120

目的:构建PTEN原核融合质粒,利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法:从人新鲜外周血中提取总RNA,采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因,并将其pET32a质粒融合,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32... 详细信息

目的:构建PTEN原核融合质粒,利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法:从人新鲜外周血中提取总RNA,采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因,并将其pET32a质粒融合,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果:菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合;融合质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论:成功构建融合质粒,并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。

关键词：大肠杆菌 PTEN 融合质粒

8个临床检测系统检测α-淀粉酶与参考测量程序的比对分析

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临床检验杂志 2012年第8期30卷 617-620页

作者：韩丽乔庄俊华黄宪章王建兵郑松柏广州中医药大学附属广东省中医院检验科广州510120

目的观察不同临床检测系统与参考测量程序测定α-淀粉酶(Amy)的可比性。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件,用8个临床检测系统与参考测量程序分别测定患者血清、国际和国内实验室间比对样本、商用校准品及质控品的Am... 详细信息

目的观察不同临床检测系统与参考测量程序测定α-淀粉酶(Amy)的可比性。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件,用8个临床检测系统与参考测量程序分别测定患者血清、国际和国内实验室间比对样本、商用校准品及质控品的Amy活性水平,并进行比对。以卫生部临床检验中心室间质评Amy允许总误差的1/2为标准,评价临床检测系统检测血清Amy结果的临床可接受性。结果 8个临床检测系统(依次编号为Y1～Y8)与参考测量程序(X)测定血清样本的相关性方程分别为Y1=0.934 7X-2.375 0、Y2=0.801 6X+13.901 4、Y3=1.139 7X+13.979 5、Y4=0.829 3X+0.702 4、Y5=0.830 6X+5.826 9、Y6=0.791 0X+12.195 8、Y7=0.728 4X-0.826 5、Y8=0.721 9X+44.318 0。其中,Y1、Y2、Y5、Y6系统检测患者血清Amy结果为临床可接受,而Y4、Y7系统经参考测量程序赋值新鲜血清校准后检测结果为临床可接受。结论用参考测量程序赋值的新鲜血清对临床检测系统进行校准可提高不同检测系统间检测Amy的可比性;建立参考测量程序是保证不同检测系统间Amy检测结果可比性的关键。

关键词： α-淀粉酶参考测量程序临床检测系统结果互认一致性