pET32a-PTEN融合质粒的构建与表达

作     者：张战锋 韩丽乔 庄俊华 黄宪章 

作者机构：广州中医药大学第二附属医院检验科510120 

出 版 物：《实用医学杂志》 (The Journal of Practical Medicine)

年 卷 期：2014年第30卷第5期

页      面：706-708页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划项目(编号:2010B031600126) 广东省自然科学基金课题(编号:S2011010004750) 科技部重大新药创制专项(编号:2012ZX09303009-003) 

主　　题：大肠杆菌 PTEN 融合质粒 

摘      要：目的:构建PTEN原核融合质粒,利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法:从人新鲜外周血中提取总RNA,采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因,并将其pET32a质粒融合,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果:菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合;融合质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论:成功构建融合质粒,并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。