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丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

中国医药教育协会成人教育委员会第四次理事大会暨药学、医...

作者：张惠中张利潮韦三华刘昕阳唐都医院临床实验与检验、输血科

面对国内外新军事变革的快速发展和趋势,检验医学学科专业军队任职教育教学如何跟上新军事变革形势发展的步伐?只有不断深化教改,在更新和不断完善中发展,才能提高任职教育的人才培养效果。本文主要就本学科教学课程名称、性质和地位、... 详细信息

面对国内外新军事变革的快速发展和趋势,检验医学学科专业军队任职教育教学如何跟上新军事变革形势发展的步伐?只有不断深化教改,在更新和不断完善中发展,才能提高任职教育的人才培养效果。本文主要就本学科教学课程名称、性质和地位、教学目标定位、教学内容更新、创新能力培养、师资素质的优化、精品课程实施、课堂效果评价系统的确立等方面加以叙述和探讨,为本学科在职教学质量的提高奠定基础。

关键词：检验任职教育教学改革

来源： cnki会议评论

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中国生物制品学杂志 2007年第9期20卷 633-636页

作者：韦三华尹文雷迎峰胡兴斌董轲李斌张青张惠中第四军医大学唐都医院临床实验与检验输血科西安710038 第四军医大学基础部微生物学教研室西安710032

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性.方法用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切含有HCV C区、E2区模拟表位和NS3～NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-C... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性.方法用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切含有HCV C区、E2区模拟表位和NS3～NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1（-）,脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达.以100 μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果.结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达.该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组.结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答.

关键词：丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗免疫原性

HCV复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性分析

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免疫学杂志 2006年第6期22卷 652-655页

作者：韦三华尹文胡兴斌雷迎峰杨敬吕欣孙梦宁徐志凯第四军医大学基础部微生物学教研室西安710032

目的构建丙型肝病炎病毒（HCV）截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒，表达纯化融合蛋白，分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct；合成HCVE2区模拟表位与NS3～NS57个表位基因Em；分别将Ct、Em... 详细信息

目的构建丙型肝病炎病毒（HCV）截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒，表达纯化融合蛋白，分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct；合成HCVE2区模拟表位与NS3～NS57个表位基因Em；分别将Ct、Em克隆人原核表达质粒pQE30，筛选阳性重组质粒pQE30-CtEm，转化E．coli M15，IPTG诱导融合蛋白表达，薄层扫描分析表达蛋白；可溶性分析后用Ni^2＋-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白；Westernblot分析纯化蛋白的特异性和抗原性；纯蛋白免疫小鼠后分析其免疫原性。结果成功构建了HCV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pQE30-CtEm，目的基因可高效表达，表达产物主要以包涵体形式存在，Ni^2＋-NTA纯化可获得目的蛋白，纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。结论HCV复合多表位抗原基因融合蛋白可高效表达并得到纯化，该融合蛋白可作为HCV诊断抗原，也为丙型肝炎新型疫苗的研究提供了靶抗原。

关键词：丙肝肝炎病毒融合蛋白原核表达疫苗

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实验诊断学网络教学模式探索

国际检验医学杂志 2021年第S1期42卷 264-266页

作者：武熹张惠中韦三华王希林芳董轲空军军医大学第二附属医院实验诊断学教研室陕西西安710038

实验诊断学是临床医学专业的一门重要课程,是联系基础医学和临床医学的桥梁课程,对培养合格的临床医生至关重要。在目前全面网络授课的大背景下,实验诊断学网络教学模式对实验诊断学教学提出了新的要求。本文总结本教研室网络教学模式... 详细信息

实验诊断学是临床医学专业的一门重要课程,是联系基础医学和临床医学的桥梁课程,对培养合格的临床医生至关重要。在目前全面网络授课的大背景下,实验诊断学网络教学模式对实验诊断学教学提出了新的要求。本文总结本教研室网络教学模式在理论课、实验课、课程考核、课程评价等方面的探索经验,就如何在网络教学模式下做好教学工作、提高教学质量,促进实用型人才培养,探讨并总结一些行之有效的教学体会。

关键词：实验诊断学网络教学教学模式

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卫勤快速检验培训课程建设的必要性及应用

人民军医 2020年第1期63卷 34-36,43页

作者：韦三华耿捷刘小刚董轲王希崔颖刘昕阳空军军医大学唐都医院临床检验输血科陕西西安710038 唐都医院医务处

战时快速检验是提高战时快速救治的重要手段,培养卫勤检验人才是提高卫勤保障能力的重要措施之一。该文通过分析我军卫勤医学检验现状及存在的问题,探讨卫勤快速检验培训课程建设的必要性,介绍了卫勤快速检验培训课程体系建设和应用情况... 详细信息

战时快速检验是提高战时快速救治的重要手段,培养卫勤检验人才是提高卫勤保障能力的重要措施之一。该文通过分析我军卫勤医学检验现状及存在的问题,探讨卫勤快速检验培训课程建设的必要性,介绍了卫勤快速检验培训课程体系建设和应用情况,可为构建适应现代战争卫勤快速检验培训课程提供理论和实践参考。

关键词：卫勤快速检验课程体系培训实践

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临床检验专业本科生实习带教的几点体会

卫生职业教育 2008年第2期26卷 122-123页

作者：董轲张惠中韦三华张利潮第四军医大学唐都医院陕西西安710038

临床医学检验学是临床医学的一个重要分支。临床检验专业相对于其他临床专业来说是一个新兴专业，其高等教育在20世纪末才得到了充分的重视和发展。我军某医科大学自1986年开始就为部队培养医学检验高等技术人才。1991年以来，我科相继... 详细信息

临床医学检验学是临床医学的一个重要分支。临床检验专业相对于其他临床专业来说是一个新兴专业，其高等教育在20世纪末才得到了充分的重视和发展。我军某医科大学自1986年开始就为部队培养医学检验高等技术人才。1991年以来，我科相继承担了86名临床检验本科生的实习带教工作，取得了很好的成绩。临床检验专业是—个对动手能力要求非常高的专业。

关键词：临床检验本科生实习

嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定

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现代免疫学 2017年第2期37卷 107-110页

作者：王晓岩张海雷迎峰林芳崔颖李斌舒放张惠中韦三华第四军医大学唐都医院临床实验与检验科西安710038 第四军医大学实验动物中心西安710032 第四军医大学基础部微生物学教研室西安710032

制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培... 详细信息

制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP-MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP-MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10~4 ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。

关键词：丙型肝炎病毒中和表位病毒样颗粒制备

稳定表达丙型肝炎病毒HLA-A2限制性多表位基因C1R-AAD细胞克隆的建立

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 683-686页

作者：韦三华张海董轲林芳王希李斌沈建军张利军张惠中西安第四军医大学临床实验与检验输血科西安710038

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性多表位基因的C1R-AAD细胞克隆。方法合成人泛素基因(Ub)和HCVHLA-A2限制性多表位基因(Mep),分别克隆入原核表达质粒pRSET-A,构建多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep。用BamHⅠ和H... 详细信息

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性多表位基因的C1R-AAD细胞克隆。方法合成人泛素基因(Ub)和HCVHLA-A2限制性多表位基因(Mep),分别克隆入原核表达质粒pRSET-A,构建多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep。用BamHⅠ和HindⅢ双酶切质粒pRSET-Ub-Mep,得到复合多表位基因Ub-Mep,亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(-),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep,转染至C1R-AAD细胞,G418压力筛选后,通过有限稀释法获得稳定表达Ub-Mep融合蛋白的C1R-AAD细胞克隆,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中Ub-Mep基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Westernblot法检测Ub-Mep蛋白在稳定转染细胞中的表达。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep经酶切鉴定证明构建正确;在稳定转染的C1R-AAD细胞中可检测到Ub-MepmRNA和蛋白水平的表达。结论已建立了稳定表达HCVHLA-A2限制性多表位抗原的C1R-AAD细胞克隆,为进一步研究HLA-A2限制性多表位基因诱导的细胞免疫应答建立了靶细胞。

关键词：丙型肝炎病毒表位真核细胞基因表达转染

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三种梅毒血清学检测方法的实验室评价

现代检验医学杂志 2007年第6期22卷 62-63页

作者：董轲顾炳权韦三华张惠中第四军医大学唐都医院检验科西安710038

目的比较RPR,ELISA,TPHA三种血清学实验诊断方法在临床诊断梅毒中的应用。方法将42例一期梅毒、61例二期梅毒、24例潜伏期梅毒患者及健康人的血清分别用RPR,ELISA,TPHA三种方法进行检测,结果进行统计学处理。结果RPR,ELISA,TPHA三种方... 详细信息

目的比较RPR,ELISA,TPHA三种血清学实验诊断方法在临床诊断梅毒中的应用。方法将42例一期梅毒、61例二期梅毒、24例潜伏期梅毒患者及健康人的血清分别用RPR,ELISA,TPHA三种方法进行检测,结果进行统计学处理。结果RPR,ELISA,TPHA三种方法针对梅毒患者血清的敏感度分别为85.8%,94.5%,96.9%;特异性分别为87.3%,98.0%,100.0%。其中一期梅毒RPR,ELISA,TPHA三种检测方法的检出率分别为73.8%,92.9%,95.2%;二期梅毒的检出率分别为96.7%,100.0%,100.0%;潜伏期梅毒的检出率分别为79.1%,83.3%,91.7%。应用统计学处理后发现,RPR与TPHA,ELISA的检出率比较均有显著差异,而ELISA,TPHA两种方法之间的检出率无显著差异。结论ELISA,TPHA 2种检测方法与RPR比较,具有较高的灵敏度和特异性,考虑到ELISA较TPHA方法的试剂成本便宜,且操作简便,为目前梅毒血清学检测的首选方法。

关键词：梅毒 RPR ELISA TPHA