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北京师范大学学报（自然科学版） 1998年第2期34卷 212-215页

作者：罗莹王若桢马本堃北京师范大学物理学系北京100875

在有效质量近似下，采用无限深势阱模型研究了强受限范围内球形、圆柱形、立方形半导体量子点的形状对受限激子的影响．结果表明对于采用体激子的等效Rydberg能量R比较大的材料制备的量子点，其形状带来的影响是显著的．

关键词：量子点受限激子强受限半导体形状

双重否定表达的日汉对比研究——兼从认知语言学视角

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双重否定表达的日汉对比研究——兼从认知语言学视角

作者：鞠威威黑龙江大学

学位级别：硕士

本文以认知语言学原型（范畴）理论为指导，分别对日汉双重否定表达进行分类，且以类为单位考察其结构、意义的特点，并从认知语言学角度对该特点进行了分析。然后，通过比较找出日汉双重否定表达在结构、意义上的异同。最后，结合日汉... 详细信息

本文以认知语言学原型（范畴）理论为指导，分别对日汉双重否定表达进行分类，且以类为单位考察其结构、意义的特点，并从认知语言学角度对该特点进行了分析。然后，通过比较找出日汉双重否定表达在结构、意义上的异同。最后，结合日汉双重否定表达的实际使用、翻译情况，运用认知语言学体验性、视角的理论对日汉双重否定表达的异同及翻译难度给予解释。即：日语主观识解的语言习惯不仅促成了日语双重否定表达的句型性结构，而且也为双重否定表达提供了诸多的使用条件;虽然日语双重否定表达的意义比汉语丰富、细腻，但是其表达范围却受到主观识解视角的制约，如主语不如汉语灵活等。与此相反，汉语双重否定表达词组性结构突显、意义表达自由宽泛的这一特点源于其客观识解的语言喜好，但是这种语言视角习惯却没有向该语言使用者提供主观识解的体验性说话人与听话人之间存有通过语言不同的形式传达、接收言外之意的“默契”，由此导致汉语的双重否定表达使用率不高，日译汉时多用肯定形式表达。

关键词：日语双重否定汉语双重否定对比情意主观识解原型

劳动力成本上升对我国制造业技术进步影响的路径研究

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劳动力成本上升对我国制造业技术进步影响的路径研究

作者：鞠士奇山西财经大学

学位级别：硕士

作为衡量我国综合国力的重要标志之一,改革开放以来,制造业依靠资源丰富、劳动力充足和劳动成本低廉等优势,获得了飞速发展。然而近几年来我国人口红利逐渐衰竭,劳动力成本呈现出加速上升的态势。劳动力成本上升态势对制造业企业其实是... 详细信息

作为衡量我国综合国力的重要标志之一,改革开放以来,制造业依靠资源丰富、劳动力充足和劳动成本低廉等优势,获得了飞速发展。然而近几年来我国人口红利逐渐衰竭,劳动力成本呈现出加速上升的态势。劳动力成本上升态势对制造业企业其实是一把双刃剑:一方面劳动力成本上升即员工工资上升,使得企业的生产成本增加,企业的负担也随之增加;另一方面在劳动力成本上升的压力下,想在市场竞争中取胜,制造业企业必将提高生产效率,推动产业升级。面对当前激烈的国际竞争环境,我国要想从“制造业大国”转型为“制造业强国”就要脱离传统制造业劳动密集和低附加值的生产方式,而转向技术密集和高附加值的发展方向,从而促使企业加快技术进步。面对劳动力成本上升制造业企业如何应对,其行为又会从哪些路径对自身技术进步水平产生影响?在这些路径上,劳动力成本的上升促进还是阻碍了我国制造业技术进步?本文将对以上问题进行分析论证。论文首先从理论上探讨了劳动力成本上升是否会对企业技术进步产生影响这一论点。其次,从企业行为角度出发,运用经济理论和数理模型阐述了劳动力成本上升对技术进步的作用机理,将其分为直接影响路径和间接影响路径。然后基于我国2002-2014年数据分析制造业各行业的劳动力成本变化情况,并选择KLEMS-MFP指数法测算制造业的全要素生产率,以分析制造业各行业的技术进步情况。进一步通过格兰杰因果检验方法验证了劳动力成本与间接影响路径的中介变量之间的因果关系,最后通过建立路径分析模型探究劳动力成本对制造业技术进步的直接影响路径和间接影响路径,并得出相应结论。本文主要研究结论如下:2002-2014年间,劳动力成本的上升对我国制造业行业技术进步产生了积极的促进作用。同时,在分析影响路径的基础上得出以下结论:1、验证了我国制造业劳动力成本对技术进步的间接影响路径。其一,资本替代路径:劳动力成本变动是人均固定资产存量的格兰杰原因,具有单向影响并存在明显的时滞性,企业过去所选择的增加固定资产进行资本替代的方式对我国制造业的技术进步可能会产生一些不利的影响;其二,技术替代路径:劳动力成本变动也是研发投入的单向格兰杰原因且存在滞后性,制造业企业通过增加研发投入进行技术替代对制造业技术进步有一定的促进作用。2、劳动力成本上升对制造业技术进步水平的直接影响较为明显,有显著的促进作用。

关键词：劳动力成本技术进步 KLEMS-MFP 格兰杰因果检验路径分析模型

沙棘籽油脂肪乳对营养缺乏和烧伤动物的静脉营养支持作用及其机制探讨

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沙棘籽油脂肪乳对营养缺乏和烧伤动物的静脉营养支持作用及其机制...

作者：鞠学鹏中国医科大学

学位级别：硕士

目的静脉营养(Intravenous nutrition,IVN)即肠外营养(parenteral nutrition,PN)是为不能经胃肠营养的病人提供营养支持的治疗手段。脂肪乳是静脉营养的重要组分,其主要功能是提供能量和脂肪酸(fatty acids,FAs)。与蛋白和碳水化合物相... 详细信息

目的静脉营养(Intravenous nutrition,IVN)即肠外营养(parenteral nutrition,PN)是为不能经胃肠营养的病人提供营养支持的治疗手段。脂肪乳是静脉营养的重要组分,其主要功能是提供能量和脂肪酸(fatty acids,FAs)。与蛋白和碳水化合物相比,脂肪乳脂质的能量密度更大(≈9 kcal/g比≈4 kcal/g),所以在临床上普遍推荐脂质供能应占总热量的15-30%,或非蛋白热量的30-50%。同时,脂肪乳还提供生物膜构成和细胞代谢所不可缺少但不能由机体自身合成的必需脂肪酸(essential fatty acid,EFA)。然而,许多人认为,静脉营养病人出现的许多副作用都与脂质的应用有关,尤其是在免疫抑制、炎症反应增强及脂质过氧化等方面。近些年来,此问题一直被人们所关注,而脂肪乳制作工艺上的进步并没有能解决此难题。如今,越来越多的研究开始着眼于脂肪乳脂质成分的合理配比上。传统的大豆油脂肪乳之所以出现诸多的副反应,主要是因为它提供了过量的n-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated FAs,PUFAs),而其它形式的脂肪酸又相对不足所以应用代谢产物生物活性较低的饱和脂肪酸(saturated FAs,SFAs)、单不饱和脂肪酸(monounsaturated FAs,MUFAs)或活性有所不同的n-3 PUFAs部分地替代脂肪乳中的n-6 FAs将会有助于预防或减轻副作用的发生。许多相关研究都得到了肯定的结果。沙棘籽油脂肪乳(Seabuckthorn seed oil fat emulsion,SOFE)是一种新型的SFAs、MUFAs和PUFAs合理配比的天然绿色长链脂肪乳剂。其n-3/n-6 PUFAs的比例大约在1/2到1/3之间,更适合于应激病人的应用。其中足量的n-3 FAs可以对抗由n-6FAs引起的免疫抑制和炎症反应增强,而SFAs和MUFAs的含量也很可观,在提供能量的同时可以减轻由PUFAs引起的脂质过氧化反应。而且SOFE中还含有大量的维生素、微量元素及其它生理活性成分,可对机体多个器官和系统产生积极广泛的影响。其富含的维生素特别是VE具有生物膜保护作用,可抗自由基和抗脂质过氧化,减轻应激时的组织损伤。沙棘籽油可以显著改善微循环,对促进组织再生有着重要意义。同时沙棘籽油还有免疫调节作用,能增强机体免疫力,对机体状态的整体提升有利,有助于疾病的痊愈和良性转归。我们的实验将会对SOFE的静脉营养支持作用进行考察,并探讨其可能的作用机制。材料与方法分别采用醋酸烧灼法、番泻叶诱导法和膏状固体酒精燃烧法制作大鼠实验性胃溃疡模型、小鼠慢性腹泻模型和大鼠重度烧伤模型。将实验动物随机分成六组:①正常对照组(N组);②模型组(C组);③模型+沙棘籽油脂肪乳低剂量(10%)组(S1组);④模型+沙棘籽油脂肪乳高剂量(20%)组(S2组);⑤模型+英脱利匹特(?)组(I组);⑥模型+尤文(?)组(O组)。动物成模后按组给予对应药物处理,并检测相关指标,包括一般状态、代谢状态、免疫状态及模型相关的特异性指标,如胃溃疡相关的胃液总酸度、胃蛋白酶活力、溃疡面积、血清一氧化氮(nitrogenmonoxidum,NO)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)水平等,腹泻相关的腹泻指数等,烧伤相关的静息能量消耗(resting energy expenditure,REE)、血浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、血浆丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)、内毒素(lipopolysaccharide,LPS)水平、小肠二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、创面组织羟脯氨酸含量等。结果1、SOFE对胃溃疡大鼠的静脉营养支持作用:(1)药物治疗后大鼠体重升高水平明显高于模型组(p<0.05),大鼠一般状态也有所改善。(2)药物治疗后低水平的胸腺指数明显回升(S2,p<0.05),轻度升高脾指数和内脏综合系数。(3)药物治疗后可升高胃溃疡大鼠白细胞计数(S2,p<0.05)、红细胞计数(p<0.05)、血清白蛋白(S2,p<0.05)、血清球蛋白(p<0.05)、血清总蛋白(p<0.05)及血清总胆固醇(S2,p<0.05),但降低低密度脂蛋白胆固醇(p<0.05)。(4)药物治疗后胃溃疡大鼠胃液总酸度(p<0.05)、胃蛋白酶活力(p<

关键词：沙棘籽油脂肪乳静脉营养营养缺乏胃溃疡慢性腹泻烧伤

渗透泵控释片醋酸纤维素水分散体包衣技术研究

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渗透泵控释片醋酸纤维素水分散体包衣技术研究

作者：鞠承乙沈阳药科大学

学位级别：硕士

为解决渗透泵控释片制备过程中有机溶剂对环境造成的污染以及给操作者带来的毒性等一系列问题，本文对主要包衣材料——醋酸纤维素的水分散体制备方法及其性质进行了较深入的研究。利用乳化——溶剂挥干法，通过对表面活性剂、有机相溶... 详细信息

为解决渗透泵控释片制备过程中有机溶剂对环境造成的污染以及给操作者带来的毒性等一系列问题，本文对主要包衣材料——醋酸纤维素的水分散体制备方法及其性质进行了较深入的研究。利用乳化——溶剂挥干法，通过对表面活性剂、有机相溶剂等的筛选，以醋酸纤维素水分散体离心沉降前后液体高度比为评价指标，筛选出制备醋酸纤维素水分散体的最佳处方。对醋酸纤维素水分散体的表面形态、粒径分布、稳定性等进行了研究。实验结果表明，依照最佳处方制备的CA水分散体中间粒径为0.162μm，稳定性较好。选择二乙酸甘油酯为增塑剂，采用平板铸膜法制备了醋酸纤维素水分散体游离膜，并测定了醋酸纤维素水分散体所制备游离膜的水分通透性、可溶性物质的洗脱率和力学性质。难溶性药物格列齐特是广泛应用于非胰岛素依赖型(Ⅱ型)糖尿病的降糖药，本文选择与有机溶剂包衣格列齐特渗透泵片相同的片芯处方，利用醋酸纤维素水分散体包衣制备了格列齐特渗透泵控释片。针对高分子辅料PEO在包衣过程中易吸水变软的特性，在片芯表面先包一层有机隔离衣，有效的避免了水分进入片芯。本文对隔离衣中PEG用量、隔离衣增重、增塑剂浓度、固化时间、固化温度和包衣增重等因素对格列齐特渗透泵型控释片释药行为的影响进行了单因素考察，采用相似因子法进行相似性判定不同因素对释药行为的影响，其结果表明，在实验考察的范围内，隔离衣中PEG用量、隔离衣增重、增塑剂浓度、固化时间、固化温度和包衣增重格列齐特渗透泵型控释片的体外释药行为有影响。单因素考察的基础上采用正交实验设计优化处方，制成了的格列齐特渗透泵型控释片，其体外释药零级特征明显(r=0.9961)。水溶性药物盐酸文拉法辛(Venlafaxine Hydrochloride，VH)是目前临床上应用较为广泛的苯乙胺类抗抑郁药物。本文选择与有机溶剂包衣盐酸文拉法辛渗透泵片相同的片芯处方，利用醋酸纤维素水分散体包衣制备了盐酸文拉法辛渗透泵控释片。本文对增塑剂浓度、固化时间、固化温度和包衣增重等因素对盐酸文拉法辛渗透泵型控释片释药行为的影响进行了单因素考察，采用相似因子法进行相似性判定不同因素对释药行为的影响，其结果表明，在实验考察的范围内，增塑剂浓度、固化时间、固化温度和包衣增重盐酸文拉法辛渗透泵型控释片的体外释药行为有影响。单因素考察的基础上采用正交实验设计优化处方，制成了的盐酸文拉法辛渗透泵型控释片，其体外释药

关键词：醋酸纤维素水分散体游离膜格列齐特盐酸文拉法辛渗透泵型控释片药物动力学

基体分子量和结晶度对聚丙烯/乙丙橡胶共混物性能的影响及其机理研究

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基体分子量和结晶度对聚丙烯/乙丙橡胶共混物性能的影响及其机理...

作者：鞠翼龙四川大学

学位级别：硕士

聚丙烯(PP)由于具有综合性能优异、成本低廉等优势,是目前产量最大、应用最广的一种通用高分子材料,但其也存在缺口冲击韧性差、低温韧性不佳等严重限制其应用范围的性能缺点。与弹性体共混是改善PP韧性的一条最简单而有效的途径,但弹... 详细信息

聚丙烯(PP)由于具有综合性能优异、成本低廉等优势,是目前产量最大、应用最广的一种通用高分子材料,但其也存在缺口冲击韧性差、低温韧性不佳等严重限制其应用范围的性能缺点。与弹性体共混是改善PP韧性的一条最简单而有效的途径,但弹性体的加入往往会引起强度和模量的大幅降低,所以实现刚韧平衡一直以来都是PP增韧改性研究的热点和难点问题。除此之外,随着制造业的变革,塑料制件的轻量化、薄壁化和复杂化成为主流趋势,这不仅需要PP材料具有高的刚性和韧性,还要具有良好的加工流动性。PP的加工流动性与其分子量密切相关,减小分子量有利于流动性的提高,但会导致刚性和韧性的降低;同时,作为一种半结晶高分子,结晶度对PP刚性和韧性也有很大影响,因此要想在保证高流动性的前提下实现刚韧平衡,就必须系统地研究PP分子量和结晶度对PP/弹性体共混物性能影响的基本规律及其机理。然而,目前的研究主要局限于定性讨论基体分子量或结晶度与共混物性能的关系,对其分子机理缺乏清楚的认识,同时也没有文献公开报道二者在调控性能中的耦合作用规律和机制。基于此,本论文选择乙丙橡胶(EPR)增韧的PP为研究对象,研究了基体分子量和结晶度对PP/EPR共混物力学性能的影响规律,揭示了其分子机理,并提出设计兼具高流动性和优异刚韧平衡的PP新材料的新思路。主要研究结果如下:(1)基体分子量对PP/EPR共混物的性能有着显著的影响,共混物的冲击性能、拉伸强度、杨氏模量均随着分子量的增大而明显提高,且脆韧转变温度同步降低。更有趣的是,尽管分子量对基体结晶度和结晶形态结构都没有明显影响,但这些力学性能随分子量的变化并不是简单的线性关系,特别是缺口冲击强度和脆韧转变温度均在数均分子量为5×10g/mol至7×10g/mol的范围内呈现出明显的跳跃性转变。(2)通过对比分析不同EPR粒径的PP/EPR共混物的性能对基体分子量的依赖性,发现韧性随分子量增加而出现的跳跃性转变与弹性体粒径并没有直接关联,而是与分子链缠结密度密切相关(缠结密度在该分子量范围内也发生了突变)。进一步分析发现在一定橡胶含量下共混物的冲击强度与缠结密度呈线性正相关关系,并且临界粒间距与缠结密度的1/3次方也是线性相关的,这表明基体分子量对性能影响的分子机制主要受控于链缠结密度。这是由于共混物的韧性与基体的剪切屈服密切相关,缠结密度主要影响基体的银纹化,缠结密度越高,银纹强度越强,基体越倾向于在银纹萌生之前即发生剪切屈服,表现出更高的韧性;反之则会引发银纹,进而导致韧性下降。(3)基体结晶度对PP/EPR共混物性能也有显著影响。随基体结晶度增加,共混物的拉伸强度、杨氏模量提高,但冲击强度则逐渐降低。同时发现结晶度对性能的影响机制也与非晶区的链缠结密度直接相关。这是由于增加基体结晶度会引起链缠结密度的降低,进而导致基体银纹强度的减小、共混物冲击韧性降低。(4)基体分子量和结晶度对共混物韧性的影响存在耦合作用,提高分子量和降低结晶度均可有效改善韧性,并且由二者所引起的缠结密度变化对共混物韧性的依赖性均可用同一数学式来表达。因此,由分子量的小幅减小而引起的韧性劣化可通过降低结晶度来弥补;反之,由增加结晶度而导致的韧性降低也可通过提高分子量来补偿。(5)基于共混物性能与分子链缠结密度的关系,并结合缠结密度和熔体流动速率对分子量的依赖性,通过高分子量和低分子量PP的复配构筑了“双峰”分布的PP基体,进而成功制备得到了同时具有良好的熔体流动性和优异刚性、韧性的PP/EPR共混物(例如,对于EPR含量为30wt%、熔融指数约为11 g/10min的共混物,当基体为“双峰”PP时其缺口冲击强度和拉伸强度分别为35.5 k J/m和19.8 MPa,当基体为“单峰”PP时则分别为26.4 k J/m和20.2 MPa)。

关键词：聚丙烯分子量结晶度流动性刚韧平衡链缠结

作业布置对高中生数学学业成就的影响机制研究

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作业布置对高中生数学学业成就的影响机制研究

作者：秦瀚鞠山东师范大学

学位级别：硕士

立德树人是教育的根本任务,素质教育是教育发展的重要方向,数学学科的学习是学生素质教育中的重要内容,同样在人的终身学习与发展中占据重要地位。而数学作业又与数学学科息息相关,它不仅是学生数学学习生活的重要组成,也是教师需要斟... 详细信息

立德树人是教育的根本任务,素质教育是教育发展的重要方向,数学学科的学习是学生素质教育中的重要内容,同样在人的终身学习与发展中占据重要地位。而数学作业又与数学学科息息相关,它不仅是学生数学学习生活的重要组成,也是教师需要斟酌考虑的教学活动,数学作业的有效布置是提升教学质量必不可少的手段。尽管人们普遍认识到数学作业及其布置在学生数学学习中的必要性及二者的相关性,但是关于数学作业究竟如何影响学生数学学业成就,哪些方面影响效果更显著,以及各个因素的影响路径如何,目前还缺乏深入研究,因此围绕以上问题展开的研究具有重要意义。本文主要采用文献分析法、问卷调查法、结构方程方法展开研究。研究思路是:首先,通过文献分析法进行筛选,找到研究学生数学学业成就影响因素的相关文献,并对其进行总结,一方面,得到与作业布置相关的影响因素,另一方面,得到影响学生数学学业成就的其他因素;其次,以总结结果为基础,编制教师调查问卷,根据收集到的数据,进一步筛选重要影响因素,并结合作业布置相关影响因素,编制学生问卷,调查学生在数学学业方面的表现;再次,根据学生调查结果,建立结构方程模型,探究学生数学学业成就与各因素之间的关系,以及数学作业相关因素对学业成就的影响;最后,根据研究结果,提出具有针对性的教学建议,并给出教学案例。研究的主要结论如下:(一)对高中生数学学业成就产生影响的因素有9个,其中,与作业布置相关的影响因素有2个:数学作业努力、数学作业时间;其他影响因素有7个:数学学习投入、学习动机、数学学习兴趣、数学学习策略、自我效能感、自我监控能力、坚毅性;(二)对高中生数学学业成就产生直接影响的因素有3个:学习动机、自我效能感、自我监控能力,其中自我效能感的影响程度最大;产生间接影响的因素有6个:数学学习投入、数学学习兴趣、数学学习策略、坚毅性、数学作业努力、数学作业时间;(三)间接影响因素的影响路径有:数学学习投入—学习动机—数学学业成就;数学学习兴趣—学习动机—数学学业成就;数学学习兴趣—自我效能感—数学学业成就;数学学习兴趣—自我监控能力—数学学业成就;数学学习策略—学习动机—数学学业成就;坚毅性—自我效能感—数学学业成就;坚毅性—自我监控能力—数学学业成就;数学作业努力—自我监控能力—数学学业成就;数学作业时间—学习动机—数学学业成就;(四)针对研究结果提出教学建议:第一,教师应当避免布置过量的数学家庭作业;第二,教师应当注重提高学生完成数学作业的主动性;第三,教师应当布置内容合适、难易恰当的数学作业。

关键词：数学学业成就数学作业影响因素结构方程方法

Lotus1-2-3及其编译软件KJ的应用 1版

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高管管理认知、战略行动与企业绩效的关系研究——中国制造业上市公司数据

1991年

作者：鞠枫陈少清姜红星编译

本书一至四章在简单地介绍了1-2-3的基本操作后,详述了版本2.00及2.01新增的42条高级宏命令及89种内部函数且给出了1-2-3应用程序的一般编制方法。五至十三章介绍了90年代面世的1-2-3编译软件KJ。

ISBN: (纸本)7810122584

关键词：表处理编译程序

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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高管管理认知、战略行动与企业绩效的关系研究——中国制造业上市...

作者：鞠梦迪内蒙古财经大学

学位级别：硕士

经济的不断发展,企业所处的产业环境日益复杂,在这种环境背景下,决定企业是否能够进行及时快速的调整适应整个市场大的发展趋势的决定性因素是高层管理者的管理认知,企业高管的管理认知决定了企业是否能够及时对企业战略进行调整,使企... 详细信息

经济的不断发展,企业所处的产业环境日益复杂,在这种环境背景下,决定企业是否能够进行及时快速的调整适应整个市场大的发展趋势的决定性因素是高层管理者的管理认知,企业高管的管理认知决定了企业是否能够及时对企业战略进行调整,使企业发展适应整个市场的趋势。因此,本文在有限理性的视角下,通过因果映射分析高层管理者的管理认知对企业的战略行动有何影响进而又如何影响企业绩效。本文对以下问题进行研究:(1)企业的高层管理者的管理认知会对企业战略行动产生什么影响。(2)企业的战略行动又会对企业绩效产生什么影响。(3)企业的战略行动在不同产业环境背景的调节下会对企业绩效产生什么不同的效果。研究思路是研究高层管理者的管理认知对企业绩效的作用,以企业的战略行动作为高管认知与企业绩效的中介变量,研究企业战略行动对企业绩效的影响时,考虑了产业环境对战略行动与企业绩效的调节作用。本文的创新之处在于:第一,按照“认知——行为——绩效”的范式,研究高管认知、战略行为与企业绩效的关系,并且分析了环境动态性、高管认知、战略行为与企业绩效的理论机理,构建了理论模型。第二,本文选取了我国电脑行业、软件行业、服装业、日化品行业、家电行业5个高动态性行业以及家具行业、航空业、钢铁业和石油化工业低动态性的行业的102家上市公司,测量了9个行业环境变动性、环境复杂性,以及102家企业2015-2017年在环境变化的背景下高管管理认知(关注焦点集中度、因果逻辑复杂度)、战略行动速度。第三,以产业环境为研究背景,研究在不同的产业环境背景下,企业战略行动对企业绩效的影响。

关键词：高管管理认知战略行动企业绩效产业环境因果映射法

幽门螺杆菌微孔蛋白基因hopX的鉴定及分析

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幽门螺杆菌微孔蛋白基因hopX的鉴定及分析

作者：鞠小丽江苏大学

学位级别：硕士

目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)微孔蛋白(porin)HopX编码基因;原核表达并纯化HopX融合蛋白;制备针对HopX融合蛋白的兔源性多抗;通过体外实验观察微孔蛋白HopX诱导人胃癌细胞株SGC7901表达分泌IL-8的能力,并初步探讨MAPK... 详细信息

目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)微孔蛋白(porin)HopX编码基因;原核表达并纯化HopX融合蛋白;制备针对HopX融合蛋白的兔源性多抗;通过体外实验观察微孔蛋白HopX诱导人胃癌细胞株SGC7901表达分泌IL-8的能力,并初步探讨MAPK信号通路在HopX诱导SGC7901细胞表达分泌IL-8中的作用;探讨HopX对人胃癌细胞株SGC7901增殖能力的影响。为进一步了解幽门螺杆菌微孔蛋白HopX的生物学功能奠定基础。方法: 1)应用PCR技术从Hp DNA基因组扩增微孔蛋白HopX编码基因片段,将其TA克隆和测序,并与GenBank公布的其他Hp菌株的基因序列比较,用信息学软件分析其物理化学特性;2)以重组质粒pQE30-hopX转化*** M15宿主菌,IPTG诱导阳性*** M15菌株,用NTA-Ni树脂分离纯化所表达的HopX融合蛋白,纯化后蛋白经SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定;3)将融合蛋白HopX与弗氏佐剂充分乳化后,免疫家兔,制备抗HopX抗血清,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)测其效价;4)不同浓度蛋白HopX与SGC7901细胞共培养不同时间,设阳性对照和阴性对照;收集培养上清,ELISA法检测分泌IL-8蛋白的量;提取细胞总RNA后,荧光定量RT-PCR检测IL-8mRNA表达水平;用MAPK信号通路ERK1/ERK2特异性抑制剂PD-98059预先处理细胞,再加入HopX与细胞作用,提取细胞总RNA,荧光定量RT-PCR检测IL-8mRNA表达水平的变化;5)应用细胞计数、细胞活力、MTT方法观察HopX对细胞增殖的影响;通过细胞周期和DNA倍体分析、DNA凝胶电泳,Hoechest33258荧光染色等方法分析HopX诱导SGC7901细胞凋亡作用。结果: 1)扩增hopX基因全长为1284bp,(申请GenBank的登录号为EF208122)与GenBank公布的ATCC43504及J99同源性为97%,与26695同源性为96%。软件预测表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为47kDa,并显示具有良好的抗原性。 2)成功构建pQE30-hopX原核表达重组质粒。通过NTA-Ni树脂分离纯化目的蛋白,获得原核表达的HopX融合蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定大小约为47KDa,与预测一致。 3)HopX融合蛋白免疫家兔获得多克隆抗体,效价为1:8×10。 4)HopX可诱导胃癌细胞SGC7901表达和分泌IL-8,该效应呈浓度依赖性;经PD-98059处理后,细胞IL-8mRNA表达水平与未处理前相比明显下降。 5)HopX可抑制SGC7901细胞的增殖及活力,呈剂量-时间依赖关系。未出现典型的凋亡形态改变。结论:本研究首次克隆NCTC11637 hopX基因,成功构建pQE30-hopX载体并获得原核表达的HopX融合蛋白;HopX可诱导胃癌细胞株SGC7901表达和分泌IL-8,该作用在一定程度上依赖MAPK信号通路;纯化的HopX蛋白对胃癌细胞SCG7901的增殖和细胞活力都有一定的抑制作用。以上的研究为更进一步探讨Hp外膜蛋白生物学功能、致病机制及Hp疫苗的研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌微孔蛋白原核表达信号传导