检索结果-南通市图书馆

作者：陈泠伶西华大学

学位级别：硕士

农药是指用来防治危害农业及农副产品的害虫、杂草和调节植物生长的药剂,在农业生产中发挥着重要作用,然而农药使用过量、不当会污染环境和农产品,造成人、畜中毒和死亡。因此,研制出经济、快速、灵敏的农药残留检测技术有利于控制农药... 详细信息

农药是指用来防治危害农业及农副产品的害虫、杂草和调节植物生长的药剂,在农业生产中发挥着重要作用,然而农药使用过量、不当会污染环境和农产品,造成人、畜中毒和死亡。因此,研制出经济、快速、灵敏的农药残留检测技术有利于控制农药残留,减少因农药中毒的事件发生从而保障食品安全。氨基甲酸酯类和有机磷类农药是在农业生产中常用的农药,其残留问题也值得高度重视。本论文分别选择了3种有机磷农药(敌敌畏、敌百虫、久效磷)和2种氨基甲酸酯类农药(灭多威、涕灭威),选取B-酯酶种族中的三种酶电鳗乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase,AChE)、马血清丁酰胆碱酯酶(Butyryl cholinesterases,BChE)、花芸豆酯酶作为酶源。胆碱酯酶是能催化水解胆碱酯酶且有不同专业性的水解酶,分为AChE和BChE,它们主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药的最适反应底物,其主要来源是动物,成本高,难保存。花芸豆酯酶是一种植物酯酶,植物酯酶酶源丰富且成本低,易于保存,通过实验得出花芸豆纯化后的酶活相对较好。本论文运用两种方法荧光法和比色法,比较该两种方法检测常见5种农药对B-酯酶的灵敏性和检出限,以及两种方法在蔬菜样品中运用并在研究中发现环糊精衍生物对荧光有增敏作用。通过这2种方法比较3种酶对于常用5种农药的敏感性与检出限的不同,运用到蔬菜样品中的研究,可以为快速检测农药提供更好的方法以及在实际样品种运用提供新的思路,为酶抑制法检测酶源提供依据。其主要研究结果如下:1.比色法测定花芸豆酯酶、AChE、BChE酶活的最佳温度为40℃、35℃、35℃,最佳pH为6.5、7.5、8.0,最佳时间均为15min。2.电鳗AChE、马血清BCh E、花芸豆酯酶在荧光法中,反应的最适pH、温度、时间分别为6.5、35℃、15min。3.比色法与荧光分光光度法分别检测农药对花芸豆酯酶、AChE、BChE的IC值时比色法和荧光法检测5种农药对电鳗AChE、花芸豆酯酶、马血清BChE的抑制情况,随着5种农药浓度的负对数值逐渐增大,即农药的终浓度不断减小抑制强度也不断减弱。荧光法检测三种酶对5种农药敏感性比用比色法更灵敏,检出限更低。4.荧光法和比色法测定电鳗AChE、马血清BChE、花芸豆酯酶对5种农药的检出限时,荧光法测定的检出限较比色法更低更灵敏。5.5种蔬菜研磨匀浆经丙酮处理后用酶抑制法检测时对酶影响作用不大,对红油菜的影响效果最大超过30%。酶抑制法能应用于检测蔬菜中有机磷及甲酸酯类农药残留。6.不同浓度蔬菜的反应溶剂,对荧光都有淬灭作用,不同蔬菜样品液稀释浓度不同,对荧光的淬灭效果不同。7.蔬菜液对4-甲基伞形酮和吲哚乙酸酯都有淬灭作用,说明蔬菜液对底物无特异性,对荧光都有淬灭作用。***-β-CD溶液浓度为400mg/mL时荧光增强效果最好,荧光增加5倍。三甲基-Beta-环式糊精浓度为40mg/mL时荧光增强效果最好,荧光增加3.5倍。9.引起荧光淬灭现象的原因有很多,机理也很复杂,如因荧光物质的分子和淬灭剂分子碰撞而损失能量。荧光增强剂能缓解一部分荧光淬灭,但提高荧光持续的能力不强。在实验中还用了增稠剂聚乙烯吡络烷酮、黄原胶,乙二胺四乙酸、十六烷基三甲基溴化铵等来减少蔬菜液对荧光的干扰,虽然对荧光有增强效果但是作用不强,运用在实际样品中时效果不好。

关键词：乙酰胆碱酯酶丁酰胆碱酯酶花芸豆酯酶农药敏感性

门诊2型糖尿病患者骨骼肌质量、力量、功能变化及影响因素分析

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门诊2型糖尿病患者骨骼肌质量、力量、功能变化及影响因素分析

作者：陈泠忻西南医科大学

学位级别：硕士

目的:2型糖尿病患病率在全球范围内呈逐年增加趋势。糖尿病骨骼肌变化严重降低了糖尿病患者的生活质量、增加了其致残率及病死率,也因此成为重要的研究热点。目前,糖尿病骨骼肌变化的发病机制尚不明确,除年龄、性别、病程、血糖、运动... 详细信息

目的:2型糖尿病患病率在全球范围内呈逐年增加趋势。糖尿病骨骼肌变化严重降低了糖尿病患者的生活质量、增加了其致残率及病死率,也因此成为重要的研究热点。目前,糖尿病骨骼肌变化的发病机制尚不明确,除年龄、性别、病程、血糖、运动等影响因素外,还可能与胰岛素抵抗、慢性炎症、线粒体功能障碍、神经血管系统并发症等有关。深入探究其影响因素,力求做到早期干预,是改善糖尿病骨骼肌变化患者生活质量的重要手段。故本研究的目的为:(1)调查门诊2型糖尿病(T2DM)患者骨骼肌质量、力量及功能变化的发病情况,比较2型糖尿病组与正常对照组骨骼肌相关指标是否存在差异。(2)进一步探讨门诊2型糖尿病患者骨骼肌变化的影响因素。方法:共纳入门诊就诊的2型糖尿病者201例,正常对照者102例。检测空腹血糖、记录T2DM病程、有无并发症及运动情况;测定身高、体重、腰围、臀围等人体参数,并计算体重指数(BMI)、腰臀比等相关影响因素。采用生物电阻抗测量仪测量骨骼肌质量,并计算骨骼肌质量指数(SMI)以评估骨骼肌质量;采用握力测量器检测握力以评估骨骼肌力量;采用平衡能力测试、4米定时行走实验、定时端坐起立时间实验,评估骨骼肌功能。根据亚洲骨骼肌减少症工作组(AWGS)有关骨骼肌变化的诊断标准,比较T2DM组与正常对照组间骨骼肌质量、骨骼肌力量、骨骼肌功能和骨骼肌变化发生率的差异;并进一步将2型糖尿病组分为骨骼肌无变化组及骨骼肌变化组,分析T2DM组骨骼肌变化的相关因素。结果:1、2型糖尿病组骨骼肌质量指数低于正常对照组[(8.809 ± 1.793)kg/m2 vs.(9.490±1.989)kg/m2(P0.05)。2、正常对照组中骨骼肌变化发生率为5.882%,2型糖尿病组中骨骼肌变化发生率为12.942%,两组发生率差异有统计学意义[5.882%vs.12.942%,P<0.05]。3、门诊2型糖尿病骨骼肌变化与患者性别及并发症相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。4、门诊2型糖尿病骨骼肌变化的单因素pearson相关性分析:(1)病程与SMI呈负相关(pearson=-0.251,P<0.05)、与握力呈负相关(pearson =-0.259,P<0.05)、与4m定时行走时间呈正相关(pearson = 0.333,P<0.05)、与定时端坐起立时间呈正相关(pearson =0.237,P<0.05);(2)年龄与SMI呈负相关(pearson =-0.406,P<0.05)、与握力呈负相关(pearson =-0.400,P<0.05)、与4m定时行走时间呈正相关(pearson =0.515,P<0.05)、与定时端坐起立时间呈正相关(pearson =0.411,P<0.05);(3)BMI与SMI 呈正相关(pearson =0.722,P<0.05)、与握力呈正相关(pearson=0.238,P<0.05)、与 4m 定时行走时间呈负相关(pearson =-0.196,P<0.05)、与定时端坐起立时间呈负相关(pearson =-0.168,P<0.05)。5、门诊2型糖尿病骨骼肌变化的多因素影响分析:结果示年龄[OR=1.211,95%CI(1.077～1.362),P<0.01]、运动[OR=0.795,95%CI(1.209～4.346),P<0.05]、BMI[0R=0.202,95%CI(0.094～0.434),P<0.05]、性别[OR=0.447,95%CI(0· 066～3.005),P<0.05]、并发症[0R=1.147,95%CI(0.066～0.850),P<0.05]是2型糖尿病患者骨骼肌变化发生的影响因素。年龄、并发症为骨骼肌变化危险因素;运动、性别、BMI为保护因素。结论:本研究结果提示:(1)门诊2型糖尿病患者骨骼肌质量指数降低,骨骼肌变化发生率增加,血糖可能在骨骼肌变化发生、发展中发挥一定的作用;(2)低BMI、病程长、年龄大、血糖高及并发症会减少2型糖尿病患者骨骼肌质量、降低肌肉力量及减弱肌肉功能。规律适当的运动可以增加2型糖尿病患者骨骼肌质量、力量及改善肌肉功能。

关键词： 2型糖尿病骨骼肌人体成分分析仪年龄病程

Tritordeum花粉特异性启动子的克隆与研究

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Tritordeum花粉特异性启动子的克隆与研究

作者：陈泠华中科技大学

学位级别：硕士

小麦是世界重要的粮食作物之一,分离麦类作物花粉、花药特异性基因不仅为了解小麦有性生殖中的基因调控提供重要基础,同时也为构建小麦雄性不育系和恢复系创造了条件。为了在作物中分离新的启动子,以小大麦tritordeum 为材料,采用无启... 详细信息

小麦是世界重要的粮食作物之一,分离麦类作物花粉、花药特异性基因不仅为了解小麦有性生殖中的基因调控提供重要基础,同时也为构建小麦雄性不育系和恢复系创造了条件。为了在作物中分离新的启动子,以小大麦tritordeum 为材料,采用无启动子转化策略,获得了一调控序列被uidA 基因标记的转基因材料,初步检测为花粉特异性启动子被标记材料。为更明确该材料后代中标记基因uidA 的花粉特异性表达遗传特性,以便为该上游的启动子分离工作打下基础,本文对筛选的该材料阳性单株进行了两代遗传表达分析。结果表明,后代51 株材料的基因组中都含有uidA 基因,uidA 基因没有发生分离。组织化学检测显示,各材料都只在花粉中检测到GUS 活性,而在其他组织没有检测到GUS 活性。进一步的RT-PCR 分析显示,uidA 基因在子代的根和叶中没有发生转录,因而在根和叶中没有uidA 基因的表达。通过以上分析说明,该株材料为花粉特异性阳性纯合体,并且该特异性能稳定遗传,从而可以肯定该材料被标记的启动子为花粉特异性启动子,仅启动基因在花粉中表达。为了得到调控uidA 基因表达的上游启动子序列,采用了TAIL-PCR 法进行克隆。结果显示,标记基因uidA 为多拷贝且发生了重排或者丢失,这为分离启动子增加了难度也提供了帮助。

关键词：花粉组织特异性 tritordeum GUS RT-PCR

从女性主义翻译理论来看女性小说 ——浅析《食、色、钱》的翻译策略

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从女性主义翻译理论来看女性小说 ——浅析《食、色、钱》的翻译...

作者：陈泠复旦大学

学位级别：硕士

本文分成两大部分。第一部分是翻译,原作选自澳大利亚作家莉兹·拜尔斯基的小说《食、色、钱》第二十二章和第二十三章。主要内容围绕三名中年妇女——邦妮、弗兰和西尔维娅间的友谊而展开,涉及各自的日常生活,以及对家庭、事业和感情... 详细信息

本文分成两大部分。第一部分是翻译,原作选自澳大利亚作家莉兹·拜尔斯基的小说《食、色、钱》第二十二章和第二十三章。主要内容围绕三名中年妇女——邦妮、弗兰和西尔维娅间的友谊而展开,涉及各自的日常生活,以及对家庭、事业和感情的困惑。第二部分是评论。首先介绍了女性主义翻译理论是翻译“文化转向"以后出现的一个具体有强烈女性意识、政治意识和文化意识的流派,注重性别差异和文化意识。其次,在女性主义翻译理论的指导下,运用改写和保留的女性主义翻译策略,对女性主义作品《食、色、钱》第二十二章和第二十三章进行翻译。在此过程中,大力倡导译者的主体性,实践女性主义思想。

关键词：《食、色、钱》莉兹·拜尔斯基女性主义翻译理论女性主义翻译策略

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心印

基于动态硼酸酯键交联的敏感性水凝胶制备及其性质研究

作者：陈泠

来源：南通市图书馆图书评论

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基于动态硼酸酯键交联的敏感性水凝胶制备及其性质研究

作者：陈泠颖辽宁大学

学位级别：硕士

水凝胶是一种由亲水性聚合物在水中发生化学交联或物理交联后形成的具有三维网络结构的高分子软材料。但是通过简单的合成步骤以及低成本的原料来制备性能优异的水凝胶仍具有很大的挑战。本文基于硼酸与多元醇反应形成的动态硼酸酯键,... 详细信息

水凝胶是一种由亲水性聚合物在水中发生化学交联或物理交联后形成的具有三维网络结构的高分子软材料。但是通过简单的合成步骤以及低成本的原料来制备性能优异的水凝胶仍具有很大的挑战。本文基于硼酸与多元醇反应形成的动态硼酸酯键,简便快捷地制备了两种敏感性水凝胶,具体的研究内容如下:1.以4-羧基苯硼酸(CPBA)和聚乙烯醇(PVA)为原料,制备了 CPBA-PVA水凝胶。研究了水凝胶的拉伸强度、敏感性、识别能力和三维可打印性。结论如下:CPBA-PVA水凝胶具有pH敏感性和温度敏感性,当CPBA与PVA的质量比为3:7、4:7、5:7时,临界转变温度分别为45℃、50℃和60℃。CPBA-PVA水凝胶在室温下具有自愈性,自愈性能最好的是CPBA与PVA质量比为4:7的CPBA-PVA水凝胶。CPBA-PVA水凝胶可以特异性识别Cu2+。CPBA与PVA的质量比为3:7、pH值为7的CPBA-PVA的水凝胶识别Cu2+效果较好,水凝胶识别Cu2+的检出限为0.0003 mol/L,并且混合离子对识别其中的Cu2+没有影响。CPBA-PVA水凝胶具有识别糖类的能力,利用水凝胶的温度辅助糖类敏感性,对浓度高于0.3 mol/L的甘露醇、0.2 mol/L的果糖有识别作用;对葡萄糖、蔗糖、D(+)麦芽糖、D(+)半乳糖无识别作用。CPBA-PVA水凝胶的拉伸强度最大为0.038 Mpa,伸长量最大为12.765 cm。CPBA-PVA-明胶水凝胶的拉伸强度最大为0.115 Mpa,伸长量最大为4.760 cm,与CPBA-PVA水凝胶相比,CPBA-PVA-明胶水凝胶的强度有所提高。当明胶的加入量为3 g、4 g时,CPBA-PVA-明胶水凝胶具有3D可打印性。打印开始时,温度为30℃,打印速度为0.1 cm/s。2.以4-羧基苯硼酸(CPBA)、聚乙烯醇(PVA)和1,4-苯二硼酸(DPBA)为原料,制备了 CPBA-PVA-DPBA水凝胶。研究了 DPBA的含量与CPBA-PVA-DPBA水凝胶形成的关系和CPBA-PVA-DPBA水凝胶的自愈性、敏感性。结论如下:CPBA-PVA-DPBA水凝胶对温度和pH不具有敏感性,70℃以下稳定,70℃以上变质。CPBA-PVA-DPBA水凝胶具有自愈性,在室温下可以即时自愈。CPBA-PVA-DPBA水凝胶具有糖类敏感性,随着葡萄糖溶液、果糖溶液、D(+)麦芽糖溶液和D(+)半乳糖溶液浓度的增加,CPBA-PVA-DPBA水凝胶溶解的部分越多。CPBA-PVA水凝胶与CPBA-PVA-DPBA水凝胶的性质有所不同。CPBA-PVA水凝胶具有温度和pH敏感性,CPBA-PVA-DPBA水凝胶对温度和pH稳定。CPBA-PVA水凝胶不具有糖类敏感性,CPBA-PVA-DPBA水凝胶具有糖类敏感性。

关键词：硼酸酯键自愈敏感性水凝胶 Cu2+识别糖识别 3D打印

钯催化下芳基卤化物与炔丙基呋喃甲醚的串联反应研究

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钯催化下芳基卤化物与炔丙基呋喃甲醚的串联反应研究

作者：陈泠竹浙江大学

学位级别：硕士

串联反应从简单易合成的原料出发,以有效、经济的方式得到结构新颖的复杂分子,符合绿色化学的需求,是有机合成化学中一个非常引人入胜的组成部分。其中过渡金属催化的串联反应在使用催化量金属试剂的条件下能够一步生成多个碳-碳和碳-杂... 详细信息

串联反应从简单易合成的原料出发,以有效、经济的方式得到结构新颖的复杂分子,符合绿色化学的需求,是有机合成化学中一个非常引人入胜的组成部分。其中过渡金属催化的串联反应在使用催化量金属试剂的条件下能够一步生成多个碳-碳和碳-杂键,近几十年来涌现出了大量的研究报道。我们小组在钯催化的以联烯为中间体的串联反应方面作了一系列的研究,为快速高效地合成结构复杂多样的多环化合物提供了有效方法。在这些工作的基础上,本论文主要研究了芳基卤化物与炔丙基呋喃甲醚在钯催化下的串联反应,以联烯基呋喃甲醚为活性中间体,实现了Sonogashira偶联反应,炔丙基-联烯异构,分子内[4+2]环加成和氧桥开环反应的串联,在比较温和的反应条件下以优良的产率和非对映异构体选择性合成官能化的二氢异苯并呋喃化合物。反应的关键步骤是碱作用下的炔丙基-联烯的异构过程,而反应的立体选择性可能取决于Diels-Alder反应。

关键词：钯催化串联反应呋喃炔丙基-联烯异构

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引诱违约的侵权责任研究

引诱违约的侵权责任研究

作者：陈泠琅华东政法大学

学位级别：硕士

根据债之相对性原理,债之效力往往仅及于债之当事人,而不及于外部第三人。但是随着经济的发展,债之关系以外的第三人侵害债权的现象屡见不鲜,本文所讨论的引诱违约行为就是第三人侵害债权的典型表现形式。我国涉及第三人侵害债权行为的... 详细信息

根据债之相对性原理,债之效力往往仅及于债之当事人,而不及于外部第三人。但是随着经济的发展,债之关系以外的第三人侵害债权的现象屡见不鲜,本文所讨论的引诱违约行为就是第三人侵害债权的典型表现形式。我国涉及第三人侵害债权行为的立法寥寥无几,虽然《合同法》第一百二十一条规定了因第三人违约的情况下债务人需要向债权人承担违约责任,债务人与第三人的纠纷依法律规定或者约定另行解决,但第三人是否应当向债权人承担侵权责任并无明确立法,《侵权责任法》中所列举的权利也并没有明确将债权纳入其保护范围。因此,对于引诱违约行为人是否应当承担侵权责任问题,学界依旧存在分歧,司法实践中对于引诱违约的侵权责任的认定也存在不同判决。第三人对他人合同利益的尊重是现代合同法效力扩张的重要表现,也是现代侵权法效力拓展的重要力量,是对债权加强保护的重要方式,具有重大的理论意义和实践意义。而如何解决引诱违约的侵权责任之理论障碍,以及确定侵权责任的构成要件、责任承担都是亟需探讨的问题。本文由导言、正文和结论三部分组成,正文主要分为三个部分,其内容与结构大致如下:第一部分是对引诱违约的侵权责任之理论基础的分析。本部分从司法实践中对于引诱违约行为人侵害债权时是否应当承担侵权责任的不同判决出发,据此引出引诱违约的侵权责任之理论障碍主要在于债之相对性理论,并对债之相对性理论的恪守与松动作出了阐述,列举了民法中对债之相对性原理的突破的表现,进而指出债权的不可侵性理论亦是其中之一。接着又从公序良俗原则的视角下分析对债之相对性原理的突破的正当性。此外,还讨论了保护性法律亦是引诱违约的侵权责任的理论基础之一。总之,本部分从三方面对引诱违约的侵权责任之理论基础进行了分析和讨论。第二部分是对引诱违约的侵权责任之构成要件的分析。本部分将构成要件分为客观要件与主观要件,在客观要件中主要讨论了引诱违约行为及其不法性、损害以及因果关系,在对不法行为的论述中,本文列举了引诱违约的几种行为类型,并且分析了与引诱对预约合同的违反以及诈害债权之行为之关系,其后又专门对分析了不法性的认定方法。在探讨了不法行为所造成的损害结果后,本就对行为与结果之间的因果关系问题展开了讨论,并总结出了判定因果关系的方法与顺序。在主观要件中则从过错的程度和故意的内容两方面进行分析。第三部分是对引诱违约的侵权责任之承担所作的分析。本部分分为两小节,一是责任形式,即债务人与侵权行为人对债权人应当承担连带责任抑或是不真正连带责任,以及责任的对外效力如何、对内又是否可以追偿;二是责任范围,即侵权行为人所承担的损害赔偿责任应涉及的债权人的哪些损害。

关键词：引诱违约侵权理论障碍构成要件责任承担

同声传译实践报告——以广州市政府主持召开的日资企业座谈会为例

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同声传译实践报告——以广州市政府主持召开的日资企业座谈会为例

作者：陈泠宇广东外语外贸大学

学位级别：硕士

同声传译，即指使用专门设备，译者边听发言者的叙述边译成外语的口译形式。当今，许多会议都采用同传方式进行。本论文为实践报告，以笔者承担同传工作的广州对外经济贸易局日资企业座谈会为例，描述译前准备、原稿翻译、现场应对等全... 详细信息

同声传译，即指使用专门设备，译者边听发言者的叙述边译成外语的口译形式。当今，许多会议都采用同传方式进行。本论文为实践报告，以笔者承担同传工作的广州对外经济贸易局日资企业座谈会为例，描述译前准备、原稿翻译、现场应对等全过程。特别对于现场应对中察觉到的“原语效应”问题，即目的语对原语的最大模仿，指出原语效应在传播学中存在的依据，通过具体译例，分析原语效应的有利影响及其局限性，得出结论原语效应并不可全盘适用，译者需要剥离语言外壳，而译出其真实含义。最后，探讨了原语效应在词汇、句式上的使用等。本报告共分五章，第一章说明口译任务，第二章介绍事前准备以及原稿资料的准备，第三章为工作流程的说明，叙述了译文检查以及现场状况等内容。第四章具体译例分析，探讨了原语效应的适用性及其局限性。最后为对本次口译工作的总结，以期在今后的口译工作中有更好的发挥。

关键词：译前准备文本译语原语效应

人参内生真菌对人参毛状根生长及次生代谢的影响

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人参内生真菌对人参毛状根生长及次生代谢的影响

作者：陈泠第二军医大学

学位级别：硕士

人参(Panax ginseng ***.)是五加科人参属植物,其干燥根和根茎同名入药,始载于《神农本草经》,列为上品,是我国常用传统中药。味甘、微苦,性微温。归肺、脾、心、肾经,具有大补元气,补脾益肺,生津止渴,安神益智等功效。现代临床主要用... 详细信息

人参(Panax ginseng ***.)是五加科人参属植物,其干燥根和根茎同名入药,始载于《神农本草经》,列为上品,是我国常用传统中药。味甘、微苦,性微温。归肺、脾、心、肾经,具有大补元气,补脾益肺,生津止渴,安神益智等功效。现代临床主要用于治疗心气虚证、冠心病、心律失常等疾病,是应用最广泛、研究最深入的中药之一,主要分布在我国辽宁东部、吉林东部和黑龙江东部。现代研究表明,人参含有人参皂苷、氨基酸及挥发油等成分。其中公认的有效成分主要是人参皂苷,可分为三类:一是五环三萜类的齐墩果烷型皂苷——人参皂苷Ro;二是原人参二醇型的四环三萜类达玛烷型皂苷——人参皂苷Rh2、Rg3、Rb1、Rb、Rc;原人参三醇型的四环三萜类达玛烷型皂苷——Re、Rf、Rg1。利用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes侵染宿主植物人参Panax ginseng ***.的细胞可以诱导其产生大量的人参毛状根。毛状根与传统的细胞培养技术相比,是更为理想的生产次生代谢产物的植物组织,因为其具有生长周期短、遗传性状稳定以及激素自养型等特点。人参毛状根是一种激素自养型的植物组织培养物,通过调控而改变其次生代谢产物的积累是较有意义的。因此以人参毛状根为平台,为人参皂苷类和人参多糖类次生代谢产物的生产开辟了一种新的途径。本课题以我国重要药用植物人参Panax ginseng ***.和西洋参Panax quinquefolius L.的内生真菌作为研究对象,以人参毛状根为研究平台,筛选得到能够与人参共培养并促进宿主植物生长及有效成分含量积累的内生真菌;通过形态及分子鉴定确定目标菌种的种属;通过高效液相色谱技术研究人参毛状根活性成分的变化;通过免疫荧光染色技术研究人参内生真菌侵染宿主植物的过程;通过RT-RCR技术研究人参皂苷代谢途径中关键酶基因的变化。期望初步探讨人参内生真菌影响人参毛状根的机制,为揭示内生真菌影响中药材品质及其机制提供实验基础和科学依据。主要研究结果如下:1.采用传统分离方法从吉林省通化市栽培3年人参、4年人参、4年西洋参根中分离得到内生真菌83株,根据形态合并为55个形态型;采用HPLC筛选到了一株能够能与人参毛状根共培养,并提高人参毛状根生物量和人参皂苷Rc、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3含量的内生真菌3R-2,通过形态和分子鉴定为普通裂褶菌(Schizophyllum commune),为下一步研究人参内生真菌对人参毛状根的影响提供了目标菌株。2.将人参内生真菌3R-2菌丝通过打孔的方式加入到人参毛状根培养液中,考察3R-2菌丝对人参毛状根生长和次生代谢成分生物合成的影响。结果表明在3R-2菌丝与人参毛状根共培养的7天内,3R-2菌丝对人参毛状根的生物量、人参皂苷Rg2和人参皂苷Rg3的含量无显著影响,在14-21天内有显著的促进作用;3R-2菌丝与人参毛状根共培养的14天时,人参皂苷Rc的含量达到最高。3.为了去除3R-2菌丝的毒力作用以考察3R-2对人参毛状根的影响,我们将3R-2菌丝的水溶性提取物作为诱导子研究其对人参毛状根生长和人参皂苷类次生代谢成分生物合成的影响,结果表明,与中剂量浓度的3R-2诱导子共培养21天后,人参毛状根的鲜重、人参皂苷Rg2的含量和人参皂苷Rc的含量的含量相比其他组别更高,因此确定中剂量浓度为最佳浓度。4.通过对长白山产栽培人参和人参毛状根组织的包埋切片和HE、六铵银及免疫荧光染色,观察到栽培基地新鲜人参根、茎、叶、果组织切片在显微下的形态及内生真菌的存在,发现茎和果组织中的菌斑最为明显;观察到几株重要内生真菌对人参毛状根组织的侵染情况,发现其主要侵染部位是周围的薄壁细胞。为将来研究内生真菌对植物组织的侵染途径提供一定的实验基础。5.通过对人参皂苷次生代谢途径中4个关键酶基因HMGR、SS、SE和DS的rtPCR,结果表明,活菌丝体组的关键酶基因SS在第6天时显著高于对照组且达到最高,而诱导子组的关键酶基因HMGR、SE和DS在第15天时达到最高值,且分别是对照组的90倍、20倍和120倍以上。6.本研究通过代谢组学的研究手段明确了3R-2菌丝对人参毛状根的影响和对人参皂苷类成分生物合成的促进作用;对不同时间点的3R-2处理组和空白对照组人参毛状根甲醇提取物正、负离子模式质谱处理后,正极得到2166个化合物,负极2189个化合物。Heatmap图表明,大量化合物经处理后有显著提高和下降;PCA聚类分析发现随处理时间增加,代谢差异越显著。

关键词：人参内生真菌毛状根次生代谢普通裂褶菌Schizophyllum commune 免疫荧光染色关键酶